Name: ELIME (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2009-10-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 11 s
Description: اكتشف طريقة كشف السموم الفطرية من نوع التريكوثيسين في عينات الأغذية باستخدام المقارنة المناعية والكشف الكهروكيميائي. هذه التقنية توفر حساسية عالية وتحسّن سلامة الغذاء.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

والكتاب أود أن أشكر نانسي داونر وجميع أعضاء من مختبر الكيمياء التحليلية من جامعة روما &quot;تور فيرغاتا&quot; للتعاون والدعم اللوجستي. وأيد هذا العمل من قبل &quot;BioCop&quot; مشروع الاتحاد الأوروبي.

1) حظر الخرز المغناطيسي المغلفة : المضي قدما على النحو التالي لعرقلة الخرز المغناطيسي المغلفة : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد مجموعة من أنابيب إيبندورف 2 مل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس (الهز ولكن ليس vortexing) حبات مغلفة المغناطيسي (انظر الملحق لإعداد حبات المغناطيسي مغلفة) باستخدام عينة الدورية خلاط ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مباشرة بعد التجانس ، ماصة 10 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي في كل الأنابيب المغلفة إيبندورف منفصلة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1ml من الحليب منزوع الدسم عرقلة الحل في كل أنبوب إيبندورف من المجموعة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة على خلاط نموذج الدورية ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة الحجب الحل : أن تفعل ذلك في مكان الأنبوب المكثف الجسيمات المغناطيسية مع الجزء المغناطيسي وضعت على لمدة 2 دقيقة (انظر الخرز المغناطيسي شائكة على الجدار الجانبي للأنبوب) ؛ ماصة بعناية قبالة طاف ، تاركا حبات دون عائق ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 1 مل من نان PBS عازلة + 3 + جيش صرب البوسنة باعتبارها حلا لتخزين كل أنبوب ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين حبات المغناطيسي المغلفة وسدت في 4 درجات مئوية (يرجى ملاحظة أن حبات المغناطيسي المغلفة مستقرة لمدة لا تقل عن 2 أشهر على 4 درجات مئوية) ؛ </li></ol> 2) سلسلة مناعية على حبات المغناطيسي لبناء منحنى المعايرة وتحليل العينات المضي قدما على النحو التالي أن يكون جاهزا الخرز المغناطيسي لقياس : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تأخذ واحدة إيبندورف أنبوب (2 مل) من حل المغلفة وسدت لكل استخراج عينة أنت ذاهب لتحليل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> أخذ أنبوب إيبندورف إضافية لكل حل calibrant العمل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس الخرز المغناطيسي لمدة 2 دقيقة على خلاط نموذج الدورية قبل الاستعمال ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة السائل التخزين باستخدام الجسيمات المغناطيسية المكثف ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات المغناطيسي ثلاث مرات بمحلول الغسيل PBS / جيش صرب البوسنة. إزالة غسل السائل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> الخطوة المنافسة : أضف لكل أنبوب يحتوي على حبات غسلها المغناطيسي ، واستخراج عينة من 200μl أعدت ، واستخدام أنبوب واحد لكل حبة المغناطيسي العينة. كرر نفس الإجراء لكل حل القياسية. إضافة 200 ميكرولتر من محلول ريتوكسيماب إلى أنبوب كل حبة المغناطيسي. اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة نصف ساعة على خلاط نموذج الدورية في درجة حرارة الغرفة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنابيب من إيبندورف الحل المستخدمة في خطوة المنافسة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وسم الخطوة : أضف 400μl من الأجسام المضادة الثانوية المسمى لكل أنبوب المغناطيسي إيبندورف حبة. اسمحوا الخرز المغناطيسي احتضان لمدة نصف ساعة على خلاط نموذج الدورية في درجة حرارة الغرفة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة العلامات من حل أنابيب إيبندورف ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات المغناطيسي ثلاث مرات مع PBS / توين ® 20 حل الغسيل. إزالة السائل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Resuspend 100μl مع كل من إدارة مكافحة المخدرات العازلة قسامة من الخرز المغناطيسي. الآن الخرز المغناطيسي مستعدون للخطوة القياس الكهروكيميائية ؛ </li></ol> 3) جمعية PalmSens مع الخيارات (مسك الغزال) المضاعف يرجى ملاحظة : المنتج من التحلل الأنزيمي الركيزة الأخطاء سطح القطب ، ولهذا السبب هناك حاجة إلى القطب جديد لكل قياس. <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل جهاز الكمبيوتر المحمول إلى الكمبيوتر عن طريق كابل PalmSens المسلسل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> توصيل القابس من 9 - DIN مع PalmSens CH8 المضاعف. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> اتصال كبل تسلسلي الثمانية قناة اتصال مع مسك الغزال الكهربائية CH8 المضاعف ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> مكان الشريط الكهربائي على كتلة المغناطيس ثمانية. الالتفات الى كل مكان تحت كل أقطاب المغناطيس العمل (لاحظ ، على ضرورة وجود مغناطيس كهربائي واحد لكل أمر حتمي وإلا سوف لا الجسيمات المغناطيسية أن يتركز على منطقة القطب العمل) ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> سد العجز في قطاع غزة إلى ثمانية أقطاب كهربائية قناة اتصال مسك الغزال ؛ </li></ol> لقياس DPV استخدام المعلمات التالية في المربعات المناسبة : E تبدأ : 0 (V) ؛ نهاية E : 0.6 (V) ؛ الخطوة الخامسة : 0.016 (V) ؛ E نبض : 0.0339 (V) ؛ E تكييف : معدل المسح الضوئي ؛ : ؛ 0 (V) 0 (V) ترسب E : 0.1 (V / ث) ؛ T نبض : 0.06 (ق) ؛ T تكييف : 0 (ق) ؛ T ترسب : 0 (ق) ؛ T موازنة : 8 (ق). 4) رد الفعل الأنزيمية والقياس الكهروكيميائية <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس التي تهز برفق كل أنبوب إيبندورف تحتوي حبات المغناطيسي على استعداد للخطوة القياس الكهروكيميائية من أجل الحصول على تعليق من الخرز كذلك فرقت المغناطيسي ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة من كل إيبندورف ، مباشرة بعد التجانس ، وقسامة من 20 ميكرولتر من التشتت حبة المغناطيسي على سطح القطب المقابل العمل. لكل قطب من استخدام شريط واحد 20 ميكرولتر من الخرز المغناطيسي المأخوذة من أنابيب إيبندورف مختلفة (على سبيل المثال لاستخدام القطب eight eight إيبندورف مختلفة) ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 80 ميكرولتر حل الركيزة الأنزيمية على القطب الأول. بدء العد التنازلي 2 دقيقة. بعد 14 ثانية ، إضافة 80 ميكرولتر من محلول الركيزة الأنزيمية على القطب الثاني. بعد 14 ثانية أخرى ، إضافة 80 ميكرولتر من محلول الركيزة الأنزيمية في القطب الثالث. المضي قدما في الوقت نفسه مادباerval (14 ثانية) حتى القطب الماضي (وهذا يعني : كل قطرة من قسامة الركيزة مع فترات من 14 ثانية). ويتم احتساب الوقت الفاصل الزمني من 14 ثانية والوقت اللازم من قبل potentiostat لأداء القياس ؛ من المذكرة ، فإن الحل 80 ميكرولتر على كل أجهزة الاستشعار ينبغي أن تغطي القطب العمل ، ومرجعية وصفة طبية. وعلاوة على ذلك ، ينبغي للحلول لكل مجس لا تتلامس مع حلول من الأقطاب الكهربائية المجاورة. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد 2 دقيقة العد التنازلي من اضافة اولى حل الركيزة الأنزيمية ، بدء القياس الكهروكيميائية ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> استخدام برامج لايت PalmSens للحصول على قمم الحالية (أمبير) لكل حل. </li></ol> 5) حساب إنشاء منحنى المعايرة باستخدام معادلة لوجستية 4 معلمات وحساب المبلغ الإجمالي تركيز السم في HT-2/T-2 نانوجرام لكل ملليلتر لكل عينة تحتوي على أنبوب إيبندورف مجهولة. البيانات التجريبية ، وارتفاع الذروة (أمبير) مقابل تركيز calibrants (نانوغرام / مل) ، يجب أن تكون مجهزة لاستعمال غير الخطية أربعة المعلمة لوجستية (4 - PL) مؤامرة المعادلة (1) (سيغما باستخدام قطعة أو 8.0 Kaleidagraph). يعتمد عادة غير الخطية 4 - PL نموذج لوصف المقايسات ملزم يجند (LBAs) 6. <img src="/files/ftp_upload/1588/1588eq1.jpg" alt="المعادلة 1" /> (1) أ ، ب ، X0 ، y0 معلمات اللوجستي والتي قدمها البرنامج مؤامرة سيغما تناسب المنحنى. استخدام صيغة لحساب يفسر من محتوى HT-2/T-2 السم المبلغ الإجمالي في حل استخراج عينة المخففة <img src="/files/ftp_upload/1588/1588eq2.jpg" alt="المعادلة 2" /> (2) x هو تركيز كتلة من المبلغ الإجمالي للHT-2/T-2 السموم في حل استخراج المخفف ، وتحسب من المعادلة 4 معلمات لوجستية في نانوغرام لكل milliltre (نانوغرام / مل) y هو القيمة الحالية في أمبير الحصول على عينة غير معروفة ملحق 6) المغناطيسي الخرز المغلفه المضي قدما على النحو التالي أن يكون مطلي الخرز المغناطيسي : الغسيل الداخلي <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> التجانس Dynabeads tosylactivated ® M - 280 (2 × الأسهم حل حبات 109 / مل) من الهز وvortexing (سرعة قصوى) لمدة 1 دقيقة (تجنب الرغوة) (يرجى ملاحظة تركيز حبات المغناطيسي يجب أن يكون دائما هو نفسه لضمان تكرارية في قياس) ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة فورا 1 مل من الخرز والمتجانس أعلاه في أنبوب 2 مل إيبندورف ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> وضع أنبوب في الجسيمات المغناطيسية المكثف مع الجزء المغناطيسي وضعت على لمدة 2 دقيقة (انظر الخرز المغناطيسي شائكة على الجدار الجانبي للأنبوب) ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة بعناية قبالة طاف ، تاركا حبات دون عائق ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إزالة أنبوب إيبندورف المكثف من الجسيمات المغناطيسية وresuspend حبات في 1 مل من 0.1 درجة الحموضة عازلة M بورات 9.5. المزيج برفق لمدة 2 دقيقة في الخلاط عينة بالتناوب لمدة 2 دقيقة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة قبالة طاف ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ماصة 1 مل من محلول بورات عازلة داخل الأنبوب إيبندورف. الخرز المغناطيسي على استعداد الآن للخطوة الطلاء ؛ </li></ol> طلاء الداخلي <ol start="8" style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إضافة 600 مل من HT - 2 مترافق مع الحل KLH الأسهم (الخادم Keyhole هيموسيانين بطلينوس) إلى 1 مل من الخرز المغناطيسي) (نهائي HT - 2 - KLH تركيز 375 ملغ / مل) ؛ الخرز المغناطيسي احتضان والحل HT - 2 - لKLH 20h عند 37 درجة مئوية * مع دوران بطيء على الميل الدورية خلاط نموذج ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد مكان الحضانة الأنبوب المكثف في الجسيمات المغناطيسية وماصة قبالة طاف ؛ تغسل حبات مغلفة مرتين مع 1 مل من محلول العازلة PBS / جيش صرب البوسنة. بين كل غسيل إزالة PBS / BSA الحل. أجريت كل خطوة الغسيل وضع الخرز المغناطيسي وPBS / جيش صرب البوسنة على خلاط الدورية لمدة 5 دقائق ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات المغناطيسي به مرة واحدة 1 مل من محلول العازلة TRIS / جيش صرب البوسنة. إزالة TRIS / حل جيش صرب البوسنة. القيام بهذه الخطوة عن طريق وضع الخرز المغناطيسي والعازلة TRIS / جيش صرب البوسنة على الدورية خلاط لمدة 4 ساعات في 37 درجة مئوية * ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تغسل حبات المغناطيسي مرة واحدة باستخدام 1ml من منتعشة (يحتفظ بها في الثلاجة على 4 درجات مئوية) PBS / BSA حل العازلة. إزالة PBS / BSA الحل. تنفيذ هذه الخطوة وضع الخرز المغناطيسي والعازلة PBS / جيش صرب البوسنة على الدورية للخلاط 5min في درجة حرارة الغرفة ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> بعد الغسيل السائل الخطوة إزالة كافة الغسيل وإضافة 1 مل PBS العازلة نان + 3 + جيش صرب البوسنة وتخزين السائل ؛ </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> تخزين حبات المغناطيسي المغلفة في 4 درجات مئوية (يرجى ملاحظة أن حبات المغناطيسي المغلفة مستقرة لمدة لا تقل عن 2 أشهر على 4 درجات مئوية) ؛ </li></ol> * ولهذا الغرض يوضع في الفرن خلاطة مجهزة حفرة الذي يسمح للالإدراج من كابل لامدادات الطاقة. بدلا من ذلك يمكن أن يوضع في الخلاط في غرفة thermostated عند 37 درجة مئوية. 7) إعداد واستخراج عينة 25 غ من العينة المطحون ناعما (أغذية الأطفال أو الفطور الحبوب) نحنighed في وعاء الخلاط وانتزعت مع 100 مل من أسيتونتريل / المحلول المائي (86/14) لمدة 3 دقائق في خلاط عالية السرعة. بعد الطرد المركزي عند 4000 دورة في الدقيقة (3000 ز) لمدة 5 دقائق ، اتخذت 8 مل من طاف وتنقيته مع العمود Mycosep ، والمجففة 4 مل من مستخلص تنظيفها تحت تدفق النيتروجين. ويمكن تخزين العينات المجففة في -30 درجة مئوية تصل إلى عدة أشهر. 8) إعادة تشكيل نموذج إفطار الحبوب إعادة تشكيل حبوب الافطار المجففة استخراج (الغذائية من الحبوب المخصصة للاستهلاك تستند الكبار) مع 40 مل من الحموضة PBS 7.4. بهذه الطريقة سوف عينة مع تركيز السم المساواة القانونية للحد من المفترض (200 نغ / غ) في خطوة تعطي قياس إشارة سقوطه في منتصف نطاق العمل. طعام للأطفال إعادة تشكيل أغذية الأطفال المجففة استخراج (الغذائية من الحبوب المخصصة للاستهلاك تستند الرضع) مع 4 مل من برنامج تلفزيوني. بهذه الطريقة سوف عينة مع التركيز على قدم المساواة من السموم للحد من المفترض القانونية (20-25 نانوغرام / غرام) في خطوة تعطي إشارة القياس التي سقطت في منتصف نطاق العمل.

<ol><li>Koch, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+of+trichothecenes+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol.+Letters%22%5BJournal%5D)">State of the art of trichothecenes analysis.</a> Toxicol. Letters. 153, 109-112 (2004).</li>
<li>Krska, R., Baumgartner, S., Josephs, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((State+of+the+art+in+the+analysis+of+type-A+and-B+trichothecene+mycotoxins+in+cereals%5BTitle%5D)+AND+%22Fresenius+J.+Anal.+Chem%22%5BJournal%5D)">State of the art in the analysis of type-A and-B trichothecene mycotoxins in cereals.</a> Fresenius J. Anal. Chem. 371, 285-299 (2001).</li>
<li>Morozova, T. Y., Morozov, V. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Force+differentiation+in+recognition+of+cross-reactive+antigens+by+magnetic+beads%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Force differentiation in recognition of cross-reactive antigens by magnetic beads.</a> Anal. Biochem. , 263-271 (2008).</li>
<li>FAO Food and Nutrition Paper 74. JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES Fifty-sixth meeting. 2001 Feb 6-15, Geneva, , Food & Agricultural Organization of the United Nations. 115 (2001).</li>
<li>Piermarini, S., Volpe, G., Ricci, F., Micheli, L., Moscone, D., Palleschi, G., Fuhrer, M., Krska, R., Baumgartner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Screening+Electrochemical+Methods+for+Aflatoxin+B1+and+Type-A+Trichothecenes%3A+a+preliminary+study%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Lett%22%5BJournal%5D)">Rapid Screening Electrochemical Methods for Aflatoxin B1 and Type-A Trichothecenes: a preliminary study.</a> Anal. Lett. 40, 1333-1346 (2007).</li>
<li>Findlay, J. W. A., Dillard, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Appropriate+calibration+curve+fitting+in+ligand+binding+assays%5BTitle%5D)+AND+%22AAPS+J%22%5BJournal%5D)">Appropriate calibration curve fitting in ligand binding assays.</a> AAPS J. 9 (2), E260-E267 (2007).</li>
<li>Ricci, F., Volpe, G., Micheli, l, Palleschi, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+novel+developments+and+applications+of+immunosensors+in+food+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Chim.+Acta%22%5BJournal%5D)">A review on novel developments and applications of immunosensors in food analysis.</a> Anal. Chim. Acta. 605 (2), 111-129 (2007).</li>
</ol>

وقد شهد استخدام الأجسام المضادة وتحقيق الاعتراف الجزيئية البيولوجية استخدام تقنيات الاستشعار عن بعد على نطاق واسع ل؛ منهجيات الكشف immunochemical ، مثل ELISAs وMEIAs ، هي ، في الوقت الحاضر ، من بين المنصات المستخدمة وتطبيقها في العديد من المختبرات 7. في حين أن هذه المناهج تحقيق حساسية وخصوصية استثنائية ، وهو الهدف الرئيسي للمجموعات بحثية عديدة في السنوات الماضية في تحسين وتحسين أدائهم. <p class="jo...

الكواشف <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> فهرس العدد </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> كلوريد البوتاسيوم </td><td> سيغما </td><td> P9333 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروجين فوسفات البوتاسيوم </td><td> سيغما </td><td> P9791 </td><td></td></tr><tr><td> الفوسفات ثنائي الصوديوم الهيدروجينية </td><td> سيغما </td><td> S3264 </td><td></td></tr><tr><td> كلوريد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S3014 </td><td></td></tr><tr><td> 2 MgCl اللامائية </td><td> سيغما </td><td> M8266 </td><td></td></tr><tr><td> DEA (99.5 ٪) </td><td> سيغما </td><td> 31589 </td><td></td></tr><tr><td> حمض الهيدروكلوريك 37 ٪ </td><td> سيغما </td><td> 320331 </td><td></td></tr><tr><td> H 3 BO 3 </td><td> سيغما </td><td> B6768 </td><td></td></tr><tr><td> تريس [hydroxymethyl] - aminomethane </td><td> سيغما </td><td> 252859 </td><td></td></tr><tr><td> BSA (ألبومين المصل البقري) </td><td> سيغما </td><td> A4503 </td><td></td></tr><tr><td> هيدروكسيد الصوديوم </td><td> سيغما </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> توين 20 </td><td> سيغما </td><td> P9416 </td><td></td></tr><tr><td> نان 3 </td><td> الدريتش </td><td> 71290 </td><td></td></tr><tr><td> 1 - النفثول الفوسفات ثنائي الصوديوم الملح </td><td> Fluka </td><td> N7255 </td><td></td></tr><tr><td> منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل -- غير دهن الحليب الجاف </td><td> الحيوي راد </td><td> 170-6404 </td><td></td></tr><tr><td> HT - 2 مترافق مع KLH (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) ، حل سهم (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) : </td><td> Biopure </td><td> 004050 </td><td> تم الحصول على المتقارن HT - 2 - KLH - CDI حسب الطريقة التي تم تنشيط الحرة OH - مجموعات على موقف 3 و 4 في السم HT - 2 بواسطة N ، N&#39; - carbonyldiimidazole (CDI) وتنشيط HT - 2 توكسين كان السماح للتفاعل مع aminogroups من البروتين (KLH) لإنشاء الربط carbammate مستقرة. </td></tr><tr><td> الثانوية الضد المسمى : مكافحة الماوس مفتش (H + L) من الخيل ، مترافق مع الفوسفاتيز القلوية ، وتركيز 1 ملغ / مل. </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> AP - 2000 </td><td></td></tr><tr><td> HT - 2 توكسين </td><td> Biopure </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الخرز المغناطيسي : Dynabeads ® </td><td> Dynal </td><td> M - 280 Tosylactivated </td><td> تركيز 2 × 10 9 حبات / مل. </td></tr></table> الحلول <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> إعداد </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td> حل 0،20 غرام من كلوريد البوتاسيوم ، 0.20 غرام من فوسفات هيدروجين البوتاسيوم ، 1،16 غرام من فوسفات الصوديوم والهيدروجين 8.00 جرام من كلوريد الصوديوم في 900 مل من الماء </td><td></td></tr><tr><td> الديثانولامين العازلة ، DEA ، 0.97 M + 1 ملم MgCl 2 + 0.15 م بوكل ، ودرجة الحموضة 9.8 </td><td> حل 0.0476g من 2 MgCl اللامائية و7.3.59 غرام من بوكل في 300 ~ مل من الماء. بعد انحلال إضافة 51 مل من إدارة مكافحة المخدرات (99.5 ٪). ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.8 مع حمض الهيدروكلوريك (6 م). مخفف الى 500 مل من الماء. </td><td></td></tr><tr><td> بورات العازلة ، 0.1 م ، ودرجة الحموضة 9.5 </td><td> حل 3،09 غرام من H 3 BO 3 في 300 ~ مل من الماء المقطر ، ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 9.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 500 مل من الماء المقطر. </td><td></td></tr><tr><td> TRIS العازلة ، 0.2 م ، ودرجة الحموضة 8.5 </td><td> حل 3،85 غرام من تريس [hydroxymethyl] - aminomethane في 100 مليلتر من الماء. ضبط درجة الحموضة إلى 8.5 و / أو حمض الهيدروكلوريك هيدروكسيد الصوديوم (6 م أو أقل تركيزات). مخفف الى 200 مل من الماء. </td><td></td></tr><tr><td> TRIS عازلة + حل جيش صرب البوسنة (0.1 ٪) ، ودرجة الحموضة 8.4 </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من الحموضة عازلة TRIS 8.4. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> PBS عازلة + توين ® 0.05 ٪ </td><td> حل 0.250 غرام من توين 20 في 500 مل من المخزن برنامج تلفزيوني أعد سابقا ، ودرجة الحموضة 7.4 </td><td></td></tr><tr><td> PBS العازلة حل جيش صرب البوسنة + 0.1 ٪ </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> PBS عازلة + 0.1 ٪ + جيش صرب البوسنة نان 3 0.02 ٪ </td><td> حل 0.050 غرام من جيش صرب البوسنة و0،010 نان من 3 في 50 مل من المخزن برنامج تلفزيوني ، ودرجة الحموضة 7.3. </td><td> تخزين سولution </td></tr><tr><td> الركيزة الأنزيمية </td><td> حل 0.010 غرام من 1 النفثول فوسفات الصوديوم في 100 مل من الحموضة عازلة DEA 9.8. التفاف القارورة بإحكام بورق الألمنيوم. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> منزوع الدسم الحليب عرقلة الحل </td><td> إضافة 0،20 غرام من التنشيف الصف حظر غير دهن الحليب الجاف (بيو راد ، هرقل ، كاليفورنيا ، الولايات المتحدة الأمريكية) إلى 200 مل من برنامج تلفزيوني العازلة الحموضة 7.3. </td><td> يجب أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 الاسهم الحل </td><td> حل 10 ملغ من HT - 2 trichothecene قارورة السم ، في 10 مل من أسيتونتريل لإعطاء الحل مع تركيز 1 ملغ / مل. </td><td> تقسيم هذا الحل في استخدام المفرد aliquots من 30 مل وتخزينها في أقل من -30 درجة مئوية. </td></tr><tr><td> HT - 2 العامل حل القياسية </td><td> ماصة 20 مل من HT - 2 توكسين حل البورصة إلى 2 مل معايرة الدورق الحجمي وتمييع مع أسيتونتريل للحصول على حل HT - 2 العمل تحتوي على 10 ميكروغرام / مل من السم trichothecene. </td><td> وينبغي أن يكون هذا الحل الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 حلول calibrant العامل </td><td> تمييع HT - 2 الحل معيار العمل (10 ميكروغرام / مل) لإعداد حل calibrant العمل 100 نانوغرام / مل. تمييع HT - 2 العاملة حل calibrant 100 نانوغرام / مل لإعداد العاملين حلول calibrant لتركيزات التالية 0 (فارغة) ، 0.5 ، 1 ، 2 ، 4 ، 10 نانوغرام / مل. </td><td> يجب أن يكون مستعدا هذه الحلول الطازجة في اليوم للاستخدام. </td></tr><tr><td> HT - 2 مترافق مع KLH </td><td> تقسيم HT - 2 مترافق مع الحل KLH الأسهم (الخادم Keyhole هيموسيانين البطلينوس) (1 ملغ / مل في برنامج تلفزيوني) في واحد استخدام aliquots من 350 ميكرولتر. </td><td> aliquots المحل في -30 درجة مئوية. </td></tr><tr><td> ضد وحيد النسيلة محددة </td><td> تمييع 1:350 (ت : ت) تركيز المخزون (1،383 ملغ / مل) من ريتوكسيماب في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة </td><td> يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها. 10 مل الأسهم الضد الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 3.5 لتر ، ما يكفي لتحليل المعايير 17 و / أو عينات. </td></tr><tr><td> إعتبر جسم الثانوية </td><td> غير المخفف المضادة للمفتش الماوس (H + L) مترافق مع الفوسفاتيز القلوية 1:100 (ت : v) في برنامج تلفزيوني ، لاستخدامها في خطوة المنافسة. </td><td> 100 سهم الضد ميكرولتر الحل في برنامج تلفزيوني عن الحجم النهائي من 10 مل تكفي لتحليل المعايير 25 و / أو عينات. يجب أن يكون مستعدا هذا الحل الجديد في لحظة استخدامها. </td></tr></table> جهاز <table border="1" cellspacing="0" cellpadding="0" style=";text-align:right;direction:rtl"><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> تعليقات (اختياري) </td></tr><tr><td> الجسيمات المغناطيسية المكثف : MPC ® - S </td><td> Dynal </td><td></td></tr><tr><td> PalmSens الصك </td><td> PalmSens </td><td> قدمت مع لايت PalmSens ، المسلسل المحمول كابل ربط الكمبيوتر والبرمجيات خيارات مسك الغزال </td></tr><tr><td> CH8 PalmSens المضاعف </td><td> PalmSens </td><td></td></tr><tr><td> ثمانية قناة اتصال الكهربائية مسك الغزال </td><td> اليد التي قدمت </td><td></td></tr><tr><td> مع أقطاب قطاع الشاشة eight المطبوعة (الكيانات الخاصة الغرض) </td><td> اليد التي قدمت </td><td></td></tr><tr><td> المصممة خصيصا لدعم قطاع الأقطاب </td><td> اليد التي قدمت </td><td> يتضمن المغناطيس النيوديميوم 8 كل واحدة منها وضعت تحت سطح القطب كل عمل SPE </td></tr><tr><td> ماصات معايرة ميكروليتر </td><td> جيلسون </td><td></td></tr><tr><td> النمام المغناطيسي وقضبان ضجة. </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الأكواب الزجاجية (100 ، 50 ، 20 مل). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> الحجمي القوارير (2ml). </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 0.2 و 2ml أنابيب إيبندورف. </td><td> إيبندورف </td><td></td></tr><tr><td> الصقر ™ من أنابيب و5ml 15ml. </td><td> صقر </td><td></td></tr><tr><td> مختبر دوامة خلاط </td><td></td><td> لا تستخدم لدوامة خلاط resuspend الخرز المغناطيسي المغلفة مع HT2 - KLH أو مرتبطة مع سلسلة المناعية لتفادي تغيير طبيعة قطع بروتيني </td></tr><tr><td> فرن مختبر أو غرفة thermostated </td><td></td><td> اختيار الفرن قادرة على الحفاظ على درجة حرارة 37 درجة مئوية ± 3 </td></tr></table>

elime (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية

ELIME (Enzyme Linked Immuno Magnetic Electrochemical) Method for Mycotoxin Detection

المناعية هي بديل صالح للاستهلاك كمية HPLC أكثر كلفة والوقت أو GC 1 ، 2 طرق للكشف فحص السموم الفطرية الخطرة في السلع الغذائية. في هذا البروتوكول نظهر كيفية تلفيق واستجواب انزيم الكهروكيميائية تنافسية مقايسة immunomagnetic مرتبط على أساس استخدام الخرز المغناطيسي ودعما قويا لسلسلة immunochemical 3 و أقطاب الشاشة المطبوعة والاستشعار عن منصة. لدينا وسيلة تهدف إلى تحديد المبلغ الإجمالي للHT - 2 و T - 2 السموم ، والسموم الفطرية تعود لعائلة trichothecenes وقلق كبير على صحة الإنسان 4. استخدام الأجسام المضادة لاستنساخ عبر التفاعل مع 100 ٪ من نحو 2 و HT - 2 - T يسمح للكشف عن السموم في وقت واحد على حد سواء مع حساسية مماثلة 5. الخطوة الأولى للمقايسة لدينا هي الخطوة طلاء أين نحن شل HT2 - KLH السم المتقارن على السطح من الخرز المغناطيسي. بعد خطوة الحجب ، من الضروري تجنب الجواذب غير محددة ، وإضافة ريتوكسيماب يسمح المنافسة بين يجمد HT - 2 و HT - 2 مجانا أو T - 2 موجودة في العينة أو الذائب في محلول قياسي. في نهاية هذه الخطوة من حيث المنافسة ، وكمية من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ترتبط يجمد HT - 2 سوف تكون متناسبة عكسيا مع كمية من السم في حل العينة. وتستخدم الأجسام المضادة الثانوية المسمى مع الفوسفاتيز القلوية (ا ف ب) للكشف عن الربط بين الأجسام المضادة المحددة ويجمد HT - 2. يتم تنفيذ الخطوة النهائية قياس ألقت عليه قسامة التعليق حبة المغناطيسي ، والمقابلة لحل محدد / نموذج قياسي ، على سطح القطب الشاشة المطبوعة في العمل ، ويتم يجمد الخرز المغناطيسي ومركزة عن طريق المغناطيس وضعت على وجه التحديد في إطار الشاشة المطبوعة الكهربائي. بعد دقيقتين من الحضانة بين حبات المغناطيسي وركيزة لأب ، يتم الكشف عن المنتج الأنزيمية التي Voltammetry نبض التفاضلية (DPV) باستخدام أداة محمولة (PalmSens) قادرة أيضا على بدء تلقائيا eight قياسات ضمن فاصل زمني من بضع ثوان.

ويتجلى بروتوكول للكشف عن trichothecenes (السموم الفطرية للقلق على الصحة البشرية) باستخدام أسلوب الفحص وضعت حديثا على أساس أسلوب immunochemical تنافسية وكشف الكهروكيميائية النهائي.

ELIME (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية

تعد المقايسات المناعية بديلاً صالحاً لطرق الكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC) أو الكروماتوغرافيا الغازية (GC) الكمية الأكثر تكلفة واستهلاكاً للوقت في الكشف المسحي عن المواد الخطرة...

مرحباً، اسمي فرانشيسكو ليكي. أنا باحث في مرحلة ما بعد الدكتوراه في مختبر التحليل الحيوي التابع للبروفيسور بالكي في جامعة روما توفا غاتا. سأقوم اليوم، بالتعاون مع زملائي، بعرض كيفية تحضير مستشعر كهروكيميائي للكشف عن سموم TCO الفطرية في عينات الأغذية.من بين الطرق المختلفة المستخدمة في اختبار الخلايا المناعي، يعد اختبار الخلايا المناعي الإنزيمي أحد أكثر هذه الطرق شيوعاً. حيث يتم ربط الأجسام المضادة أو المستضدات بإنزيم. ومؤخراً، ثبت أن استخدام الطرق الكهروكيميائية للكشف عن نشاط الإنزيم يوفر مزايا خاصة لبعض التطبيقات.في الواقع، تُعد الكيمياء الكهربائية أقل عرضة للتداخلات، كما أنها مناسبة للتصغير وللاستنتاج الكمي بتكلفة منخفضة. ومن هذا المنظور، تكتسب الأقطاب الكهربائية المطبوعة بالشاشة أهمية كبيرة لضمان انخفاض التكلفة وبساطة الإجراءات. علاوة على ذلك، يمكن دمج استخدام الركائز المغناطيسية مع الأقطاب المطبوعة بالشاشة من أجل تحقيق أفضل حساسية للطريقة.سنوضح لكم اليوم كيفية تحضير مقياس كهروكيميائي يعتمد على استخدام الأقطاب المطبوعة بالشاشة والجسيمات المغناطيسية للكشف عن سموم التريكوثين الفطرية (TCOs) في عينات الأغذية. توجد سموم التريكوثين الفطرية عادةً في الحبوب، ولهذا السبب تمثل تهديداً خطيراً لسلامة الأغذية والأعلاف القائمة على الحبوب. وأهم هذه السموم ضمن المجموعة A هي سموم T2 و HT2.كما سنرى، يمكن تنفيذ هذه الطريقة بسهولة بواسطة أفراد غير مدربين، كما أنها تتطلب أجهزة محمولة ومنخفضة التكلفة. وهذا أحد الأهداف الرئيسية للمشروع المتكامل bio الممول من المجتمع الأوروبي، والذي تم إجراء هذا العمل في إطاره. والآن، لنطلع على مبدأ هذه الطريقة والمواد التي سنستخدمها؟لنبأ الآن. المواد: ستُستخدم الحبيبات المغناطيسية كدعامة للتفاعل المناعي المتسلسل. كما ستُستخدم شريحة مكونة من ثمانة أقطاب كهربائية مطبوعة بالشاشة كعنصر استشعار.يتكون كل مستشعر من قطب عمل من الجرافيت، وقطب مقابل، وقطب مرجعي من الفضة. ويمكن تشغيل هذه المستشعرات بشكل تتابعي وفردي في وقت قصير جداً باستخدام جهاز كهرومغناطيسي محمول من صنع palm Sense. وتعتمد فكرة الطريقة على مبدأ بسيط يستند إلى تفاعل مناعي تنافسي.يتم تثبيت السم المقترن على الخرزات المغناطيسية، والتي يتم حجبها بعد ذلك لمنع الامتصاص غير النوعي. وتبدأ عملية القياس نفسها بخطوة التنافس؛ حيث تُترك الخرزات المطلية في هذه المرحلة للتفاعل مع كمية محددة من الأجسام المضادة أحادية النسيلة، ويتنافس السم الموجود في العينة مع السم المثبت على الخرزات المغناطيسية على مواقع الارتباط بالأجسام المضادة.ستكون كمية الأجسام المضادة المرتبطة بالخرزات المرمزة متناسبة عكسياً مع كمية السم في العينة. تلي خطوة التنافس بعد ذلك خطوة الوسم. وفي هذه الحالة، تُترك الخرزات المغناطيسية لتتفاعل مع جسم مضاد ثانوي مقترن بإنزيم وسم.سيرتبط الجسم المضاد الثانوي بالجسم المضاد أحادي النسيلة لضمان عملية وسم فعالة. وتلي خطوة الوسم أخيراً خطوة القياس. وفي هذه الحالة، يتم تركيز الخرزات المغناطيسية على سطح القطب الكهربائي بمساعدة المنصة المغناطيسية، ثم نقوم ببساطة بإضافة مادة الركيزة الإنزيمية one napt phosphate، وقياس إنتاج one naptha.سيظهر منحنى الارتباط الناتج قيم تيار عالية عند تركيزات السم المنخفضة وإشارات منخفضة عند محتوى السم العالي. سيتم الحصول على تركيز السم باستخدام منحنى معايرة تم إنشاؤه في محلول منظم قياسي. لإعداد المقايسة الفعلية، نقوم بتجهيز حامل من أنابيب fendor النظيفة سعة 2 مل، أنبوب منفصل لكل محلول قياسي من منحنى المعايرة، وكذلك للعينات.بعد ذلك، يتم سحب 10 µL من معلق الخرزات ونقلها إلى كل أنبوب. يحتوي هذا المحلول على خرزات مغناطيسية مغلفة مسبقاً بالسم المقترن. ومع ذلك، يجب إزالة سائل التخزين قبل إجراء المقايسة، لأن أزيد الصوديوم المستخدم كمادة حافظة من شأنه أن يؤثر على النشاط الإنزيمي للوسم.للقيام بذلك، يُضاف منظم P-B-S-B-S-A. تُرج الأنابيب، ثم يُعاد إدخال المغناطيس ويُسحب منظم الغسيل باستخدام الماصة. تُسمى الخطوة الفعلية الأولى من المقايسة بخطوة الحجب.خلال هذه الخطوة، يتم إضافة 1 ml من محلول الحجب إلى كل أنبوب. ثم توضع الأنابيب على جهاز خلط العينات الدوار وتُترك لتحضن لمدة نصف ساعة في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك، يتم إزالة محلول الحجب للانتقال إلى الخطوة الحاسمة التالية، وهي خطوة التنافس، حيث نضيف محلول الأجسام المضادة أحادية النسيلة المتخصصة ومحاليل السموم إلى كل أنبوب.للقيام بذلك، يتم حقن 200 µL من الأجسام المضادة أحادية النسيلة بالتركيز الأمثل. بعد ذلك، يتم إضافة 200 µL من كل محلول قياسي أو عينة إلى كل أنبوب. تُترك هذه الكواشف لتتحضن لمدة 30 دقيقة.من أجل تحسين التلامس بين الكواشف المثبتة على سطح الجسيمات المغناطيسية والجزيئات الموجودة في المحلول لبدء هذه العملية، توضع الأنابيب مرة أخرى على خلاط العينات الدوار للانتقال إلى خطوة الوسم. ومن الضروري إزالة المحلول من الخطوة السابقة. بعد ذلك، يتم إضافة 400 µL من الجسم المضاد الثانوي الموّسم إلى كل أنبوب، ثم تُعاد الأنابيب إلى خلاط العينات الدوار وتُحضن لمدة 30 دقيقة.بعد ذلك، وعقب إزالة سائل الوسم، أجرينا إجراءات الغسيل باستخدام محاليل منظمة متنوعة لتجنب أي تداخل ناتج عن الكواشف الإنزيمية غير المرتبطة. وأخيراً، وللتحضير للقياسات الفعلية، يتم إعادة تعليق الخرزات المغناطيسية في 100 µL من محلول DEA المنظم، وهو محلول مناسب لتحسين النشاط الإنزيمي للوسم. يتم إجراء القياس باستخدام جهاز palm send spot potentials stat الموضح وهو متصل بشريط ثماني الأقطاب الكهربائية في الأسفل.يوجد حامل خاص ثُبتت عليه ثمانية مغناطيسات قوية تماماً تحت سطح كل قطب كهربائي عامل. يعمل المغناطيس على تركيز الخرزات على سطح القطب الكهربائي العامل. نقوم بسحب كمية قدرها 20 µL من تشتت الخرزات المغناطيسية التفاعلية من كل EOR ونضعها على سطح القطب الكهربائي العامل المقابل.لإجراء القياس الفعلي، يجب إضافة الركيزة الإنزيمية، كما يجب التحكم في تسلسل الخطوات بدقة. نقوم بإضافة ميكرولترات من محلول الركيزة الإنزيمية إلى سطح القطب الكهربائي الأول، ثم نبدأ عدًا تنازليًا لمدة دقيقتين.بعد 14 ثانية، نضيف محلول الركيزة إلى القطب الكهربائي الثاني. وبعد 14 ثانية أخرى، نضيف محلول الركيزة إلى القطب الكهربائي الثالث. ونستمر في استخدام نفس الفاصل الزمني حتى القطب الكهربائي الأخير.في الواقع، تم حساب الفاصل الزمني البالغ 14 ثانية على أنه الوقت المطلوب لجهاز potential stat لإجراء القياس. حسنًا، بعد انتهاء العد التنازلي لمدة دقيقتين من الإضافة الأولى لمحلول الركيزة الإنزيمية، يبدأ بروتوكول القياس الكهروكيميائي. ويتم القياس الفعلي للمنتج المتكون باستخدام تقنية differential postal telemetry.تبدأ منحنيات الأقطاب الكهربائية المتتالية في الظهور على الشاشة نظراً لأن الفحص هو مقايسة تنافسية. وستكون شدة التيار للإشارة التي يتم الحصول عليها متناسبة عكسياً مع تركيز السم الذي كان موجوداً في الأنبوب في خطوة التنافس. سيتم رسم إشارة التيار للمحاليل القياسية في منحنى سيني، ويتم الحصول على محتوى السم في العينات المجهولة عن طريق استقراء قيمة التركيز من الإشارة المسجلة.حسنًا، آمل أن يكون هذا العرض التوضيحي واضحًا ومفيدًا لفهم مزايا المستشعرات المناعية الكهروكيميائية. شكرًا للمشاهدة وبالتوفيق في تجاربكم.

elime-enzyme-linked-immuno-magnetic-electrochemical-method-for

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

ويستخدم نظام مغناطيسي لتعديل biosensing بسرعة ، بحساسية وبساطة كشف المقايسات البيولوجية ، مثل جزيئات الحمض النووي والبروتينات.

متجانسة الكشف السريع عن طريق فحوصات البيولوجي المغناطيسي نظام Biosensing التحوير

ويمكن تحقيق الأهداف وتحديد الحصانة على التكيف الميكروبي في أمراض مجهولة بواسطة استخدام مقايسة immunospot انزيم مرتبط.

انزيم مرتبط Immunospot الفحص (ELISPOT) : القياس الكمي للردود TH - 1 المناعة الخلوية ضد مولدات المضادات الجرثومية

يوضح هذا الفيديو الكشف عن مجمعات الأجسام المضادة والمستضد المترافقة كيميائيا عبر تقنية المقايسة الممتزة المناعية المرتبطة بإنزيم الساندويتش ، أو تقنية ELISA. يرتبط الجسم المضاد الذي تم التقاطه بالحاتمة المحددة لمستضد الجسم المضاد المترافق ، والذي يمكن تصوره لاحقا باستخدام جسم مضاد ثانوي مرتبط بالإنزيم.

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم للتحقق من اقتران الأجسام المضادة ومستضد المقترنة كيميائيا

قياس المؤشرات الحيوية في العينات البيولوجية المعقدة يوجه بشكل متزايد عملية صنع القرار السريري. نصف طريقة حساسة للغاية لقياس البروتين المرتبط بالميوسين القلبي في وقت واحد ، والكرياتين كيناز MB ، والتروبونين القلبي I في عينات المصل من الأشخاص الذين يعانون من احتشاء عضلة القلب والأشخاص الأصحاء للتحكم في نفس الوقت.

طريقة كمية حساسة ومحددة لتحديد بروتين ربط الميوسين القلبي في المصل C عن طريق المقايسة المناعية الكهربائية الكيميائية

&lt; p class = 'jove_content'&gt; يتم هنا عرض بروتوكول يتضمن تركيزا متكاملا وإثراء واكتشاف لوني نقطة النهاية لمسببات الأمراض المنقولة بالغذاء في كميات كبيرة من المياه الزراعية.  يتم ترشيح المياه من خلال مسحات مور المعدلة (MMS) ، المخصبة بوسائط انتقائية أو غير انتقائية ، ويتم الكشف باستخدام أجهزة تحليلية ورقية (μPAD) مدمجة بركائز لونية إرشادية للبكتيريا.

على الورق اللونية الكشف عن<em&gt; كولاي</em&gt;،<em&gt; السالمونيلا</em&gt; النيابة، و<em&gt; المستوحدة الليستيريا</em&gt; من كميات كبيرة من المياه الزراعية

يصف هذا البروتوكول تطوير اثنين من الأجسام المضادة أحادية النسيلة من فئة IgG (mAbs) التي تتفاعل بقوة مع الميوغلوبين من الحيتانيات. يتم تطبيق هذه mAbs على شريط اختبار كروماتوجرافي مناعي ذهبي غروي يعتمد على شكل الساندويتش للتمييز بين ميغابايت الحيتانيات والفقمة الأخرى.

تطوير المناعي اختبار قطاع تستند الذهب الغروية عن الكشف عن الحيتان الميوجلوبين

يعد وجود السموم الزرقاء في خزانات المياه العذبة للاستهلاك البشري مصدر قلق كبير لسلطات إدارة المياه. لتقييم مخاطر تلوث المياه ، تصف هذه المقالة بروتوكولا للكشف الميداني عن سلالات البكتيريا الزرقاء في العينات السائلة والصلبة باستخدام شريحة مصفوفة دقيقة للأجسام المضادة.

بروتوكول تجريبي للكشف البكتيريا الزرقاء في العينات السائلة والصلبة مع الأجسام المضادة ميكروأري رقاقة

microfluidic الرقمية القائمة على الكهربية هي تقنية تستخدم تغييرًا مدفوعًا بالجهد في زاوية الاتصال الظاهرة لقطرة بحجم ميكرولتر لتسهيل التلاعب بها. الجمع بين هذا مع الخرز المغناطيسي وظيفية تمكن من دمج عمليات وحدة مختبرية متعددة لإعداد عينة وتحديد مسببات الأمراض باستخدام الانزيم المرتبطة المناعة الاختزال (ELISA).

منصة Microfluidics الرقمية المستندة إلى الكهربية للعينات المناعية المناعية المرتبطة بالإنزيمات الآلية

المناعة الكهربية chemiluminescence (ECLIA) هو نهج جديد للكشف الكمي من المتغيرات البروتين MeCP2 المحلية وتطبيقها خارجيًا ، والتي تنتج قياسات كمية ودقيقة وقابلة للاستنساخ مع خطأ منخفض داخل وبين القياس على نطاق عمل واسع. هنا، يتم وصف بروتوكول MeCP2-ECLIA في شكل 96-well.

والكهربائية القائمة على القول بالبروتين MeCP2

في عدوى الميكوبلازما الرئوية ، يمكن أن تؤدي اختبارات الأمصال إلى نتائج جيدة ، ولكن مع خصوصية منخفضة بسبب التفاعل المتقاطع المناعي. يضمن ELISA الذي يلتقط المستضد الداخلي ، الموصوف في هذه الورقة ، خصوصية عالية للأنواع وقد ثبت أنه اختبار فحص موثوق به للتشخيص الدقيق للمتفطرة الرئوية.

مقايسة الممتز المناعي المرتبط بإنزيم التقاط المستضد للكشف المحدد عن الميكوبلازما الرئوية

يقدم هذا البروتوكول طريقة قياس الطيف الكتلي عالية الدقة للكروماتوغرافيا السائلة - حركة الأيونات - عالية الدقة لتحديد وجود قلويدات الإرغوت في الطعام وفقا للائحة المفوضية (EU) الصادرة مؤخرا 2023/915.

الكشف عن قلويدات الإرغوت المنظمة في مصفوفات الطعام عن طريق قياس طيف الحركة الأيونية المحاصرة بالكروماتوغرافيا السائلة - قياس الطيف الكتلي لوقت الرحلة

اكتشف طريقة كشف السموم الفطرية من نوع التريكوثيسين في عينات الأغذية باستخدام المقارنة المناعية والكشف الكهروكيميائي. هذه التقنية توفر حساسية عالية وتحسّن سلامة الغذاء.

ELIME (انزيم مرتبط المناعي المغناطيسي الكهروكيميائية) طرق الكشف عن السموم الفطرية

استكشف المزيد من الفيديوهات