MALDI تحضير العينة : الترا أسلوب طبقة رقيقة

مرحبا بكم في البرنامج التعليمي CHI Lab حول طريقة الطبقة الرقيقة للغاية ، والتي تعد مفيدة بشكل خاص لتحديد كتلة البروتينات بدقة. نظرا للطبيعة الحساسة لقياس الطيف الكتلي ، فإننا نستخدم فقط كواشف درجة HPLC بالإضافة إلى قفازات اللاتكس أو النتريل الخالية من المسحوق لتنظيف اللوحة. شطف بالتناوب مع ماء الميثانول ، ثم أخيرا الميثانول مرة أخرى.

بين كل شطف ، امسح المذيب الزائد برفق باستخدام مناديل العدسة. يمكنك تكرار خطوات الغسيل هذه عدة مرات حسب الضرورة لإنتاج طبق نظيف. وبمجرد تنظيفها وتجفيفها ، يجب استخدام اللوحة على الفور.

ضع وانشر 20 إلى 30 ميكرولترا من محلول الركيزة ذو الطبقة الرقيقة عبر لوحة MALDI النظيفة. هنا نستخدم طرف ماصة P اثنين 50 لتوزيع المحلول بالتساوي مع تجنب خدش اللوحة. عندما تجف الطبقة الرقيقة ، قم بإزالة أي قطرات ماء متبقية إذا كانت موجودة عن طريق النشاف برفق بمنديل كيم.

ثم امسح الطبق برفق بحركة واحدة سلسة بمنديل كيم لتشكيل الطبقة الرقيقة بشكل صحيح. أخيرا ، قم بتنظيف حواف اللوحة لتجنب تلويث مطياف الكتلة. من الأهمية بمكان اختبار الطبقة الرقيقة قبل تطبيق العينة.

إذا استغرقت بقعة الاختبار وقتا طويلا حتى تجف حيث لا تكون البلورات متجانسة ، فقد تكمن المشكلة داخل الطبقة الرقيقة نفسها أو محلول المصفوفة ، وتنظيف اللوحة ، وإعادة تطبيق الطبقة الرقيقة ، وإعادة الاختبار. عند اكتشاف الطبقة الرقيقة ، لا تريد أن تتبخر بقعك حتى تجف. بدلا من ذلك ، بمجرد أن يتباطأ التبلور ويتوقف ، قم بإزالة المذيب الزائد.

باستخدام شفاط الفراغ ، قد يتداخل وجود الملوثات مثل الأملاح والمنظفات ، وكذلك تركيز التحليل العالي مع التبلور. قد يؤدي تخفيف العينة الإضافي إلى تحسين التبلور بقعة النمل على مقربة من العينة. سيسمح ذلك بالمعايرة الداخلية الزائفة التي يتم فيها نقل اللوحة من بقعة العينة إلى بقعة المعايرة.

أثناء الحصول على العينة ، بإضافة بضع لقطات ليزر من CAS إلى الطيف ، يضمن هذا النهج معايرة دقة كتلة أعلى من المعايرة الخارجية وحدها. من المهم جدا غسل أي ملوثات مثل الملح أو المنظفات التي قد تتداخل مع المادة التحليلية. تأيين. للقيام بذلك ، قم بإسقاط البرد المثلج ، 0.1٪ حمض الخليك ثلاثي الفلور في HPLC ، وقم بتصنيف الماء مباشرة على البقع.

قم بإزالة محلول الغسيل باستخدام شفاط فراغ كما هو موضح هنا. تنتج هذه الطريقة أطياف ممتازة لكل من البروتينات الغشائية والقابلة للذوبان.