تلطيخ أحمر النيل من C. ايليجانس: طريقة لتصور قطرات الدهون في الثابتة
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء
0 مشاهدة • 3:34 دقيقة • April 30th, 2023
- عند تصور قطرات الدهون ، تبدأ عضيات التخزين داخل الخلايا للدهون المحايدة بإضافة محلول منظف ، مثل محلول يحتوي على Triton X-100 ، إلى العينة. سيؤدي ذلك إلى اختراق خلايا الدودة. بعد ذلك ، قم بإصلاح العينة بالتركيز المناسب من الأيزوبروبانول ، على سبيل المثال 40٪.
ثم أضف النيل الأحمر إلى العينة واحميها من الضوء ، لأن الصبغة حساسة للضوء. يسمح التثبيت للصبغة بالوصول إلى قطرات الدهون في جميع أنحاء. النيل الأحمر هي صبغة محبة للدهون يعتمد طيف انبعاثها الفلوري على قطبية البيئة الدهنية المحلية.
عند التعرض للدهون القطبية ، مثل الدهون الفوسفورية ، يكون طيف انبعاث النيل الأحمر في الأطوال الموجية الحمراء الأعلى. عند التعرض للدهون المحايدة ، مثل ثلاثي الجلسرين واسترات الستيرول في النواة المحايدة لقطرات الدهون ، يتحول طيف انبعاث النيل الأحمر إلى الأطوال الموجية السفلية من الذهب الأصفر.
لذلك ، استخدم القناة الخضراء لمجهر الفلورسنت ، والتي ستجمع انبعاثات الطول الموجي للذهب الأصفر ، لتصور تلطيخ النيل الأحمر لقطرات الدهون في جميع أنحاء. في مثال البروتوكول ، سنرى إجراء تلطيخ أحمر النيل وتصوير قطرات الدهون في عينات ثابتة.
- لإجراء تلطيخ الدهون باللون الأحمر النيلي ، فإن الديدان الصفيحية على وسط نمو الديدان الخيطية ، أو NGM ، بذرة السجل المتأخر OP50 E. coli ، وتنمو الديدان عند 20 درجة مئوية إلى مرحلة L4 ا
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية