حقن داخل الصفاق الى اسماك الزرد الكبار

الهدف العام من هذا الإجراء هو حقن محلول في التجويف البريتوني لأسماك الحمار الوحشي البالغة. في هذا المثال ، سنقوم بحقن الجلوكوز في مختبرنا. نستخدم هذا الإجراء لدراسة ركود الجلوكوز في الدم.

يتم تحقيق ذلك عن طريق وزن الأسماك أولا لتحديد مقدار المحلول الذي يجب حقنه لكل جرام من وزن الجسم. الخطوة الثانية من الإجراء هي تخدير الأسماك بالماء البارد. الخطوة الثالثة من الإجراء هي نقل الأسماك إلى مرحلة المجهر وحقنها.

الخطوة الأخيرة من الإجراء هي إعادة الأسماك إلى حوضها للتعافي. في النهاية ، يمكن الحصول على نتائج تظهر تغيرات في توازن الجلوكوز من خلال قياس مستويات الجلوكوز في الدم. مرحبا ، أنا ماري كينكل من مختبر فيكتوريا برينس في قسم علم الأحياء والتشريح العضوي بجامعة شيكاغو.

أنا ستيفاني أميس أيضا من مختبر الأمير. سنعرض لك اليوم إجراء للحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة. نستخدم هذا الإجراء في مختبرنا لدراسة تنظيم توازن الجلوكوز في الدم.

لذلك دعونا نبدأ. لتحضير السمك للحقن ، ابدأ بنقل الأسماك إلى حوض نظيف وامنع الطعام بسرعة. السمك لمدة 24 ساعة لتفريغ محتويات البصلة المعوية و 72 ساعة لخفض نسبة الجلوكوز في الدم إلى مستويات خط الأساس.

الكثافة المستخدمة في هذا البروتوكول هي 10 إلى 12 من السكان من الجنس المختلط. سمك لكل خزان سعة تسعة لترات مع ثلاث طبقات من الرخام ، بيض الرخام يعزل حتى لا يؤكل. قم بإزالة البيض والفضلات يوميا عن طريق سحب الخزان.

في الجزء السفلي التالي ، قم بإعداد محلول ملح كورتلاند باستخدام 124.1 مللي مولار كلوريد الصوديوم 5.1 مللي مولار كلوريد البوتاسيوم 2.9 ملليمولار بيروفوسفات الصوديوم ، 1.9 ملليمولار كبريتات المغنيسيوم هيدرات هيدرات ، 1.4 ملليمولر كلوريد الكالسيوم ثنائي هيدرات 11.9 ملليمولار بيكربونات الصوديوم ، أربعة جرامات من البولي فينيل رون ، و 1000 وحدة USP من الهيبارين إلى حجم نهائي قدره 100 مل مع فلتر مياه منزوع الأيونات ، تعقيمها وتخزينها على أربع درجات مئوية. بعد ذلك ، قم بإذابة خمسة جرامات من الجلوكوز في 10 ملليلتر من محلول ملح الكوتين. لعمل 0.5 ملليغرام لكل ميكرولتر من محلول الجلوكوز ، قم بالتصفية والتعقيم وتخزينها عند أربع درجات مئوية.

ثم قم بإعداد الطاولة الجراحية عن طريق قطع إسفنجة ناعمة إلى ارتفاع 20 ملم تقريبا على الوجه المسطح. قم بعمل قطع بعمق 10 إلى 15 ملم لحمل السمكة للحقن. ضع الإسفنجة في طبق بتري مقاس 60 ملم وضع طبق بتري بإسفنجة في غطاء صندوق طرف ماصة P 200.

بعد ذلك ، قم بإعداد المجهر بتغطية قاعدة المجهر بغلاف بلاستيكي ومناشف ورقية للحماية. في حالة حدوث انسكابات ، ضع طاولة الجراحة فوق المنشفة الورقية. اضبط التركيز مسبقا من خلال عرض الطاولة الجراحية والتركيز على الإسفنجة.

ضع إصبعك فوق الإسفنجة وركز عليها لتقليل المزيد من التعديل البؤري عندما تكون السمكة على طاولة الجراحة. بعد وزن السمك عن طريق ملء دورق سعة 500 مل ، امتلئ حوالي ثلثه بالماء والمنشأة السمكية. على شبكة الميزان ، انقل الأسماك بأقل قدر ممكن من الماء الزائد إلى الدورق وسجل الوزن ، ونقل كل سمكة موزونة إلى خزان واضح ذي علامات.

احسب حجم الحقن بناء على الوزن. في هذا المثال، سنقوم بحقن محلول يساوي 0.5 ملليغرام لكل جرام من وزن الجسم من الجلوكوز المذاب في محلول ملح كورتلاند. نظرا لأن حلنا هو 0.5 ملليغرام لكل ميكرولتر ، فإن الحساب هو ضعف جرام وزن الأسماك يساوي حجم الحقن في ميكرولتر ، وإعداد المحقنة ومعدات الحقن ذات الصلة.

يستخدم هذا البروتوكول إبرة فولاذية مشطوفة 30 5G ومضخة فائقة الصغر ومعالج صغير رباعي وحقنة صغيرة سعة 10 ميكرولتر نانو لحقن الجلوكوز ، املأ المحقنة ب 0.5 ملليغرام لكل ميكرولتر من الجلوكوز المذاب في محلول ملح كورتلاند. من المهم إزالة جميع فقاعات الهواء من المحقنة ، وتركيب المحقنة على المضخة فائقة الصغر وبرمجة حجم الحقن للأسماك الأولى عن طريق إدخال الحجم بالنانولتر ، باستخدام لوحة المفاتيح المرقمة على المعالج الصغير الأربعة. أخيرا ، قم بإعداد مخدر الثلج عن طريق سحق ما يكفي من مكعبات الثلج المصنوعة من مياه منشأة الأسماك.

لملء دلو ثلج ، ضع طاولة الجراحة في وعاء أكبر مثل حاوية تخزين الطعام المصنوعة من المطاط سعة 2.4 لتر. صب بعض ماء المنشأة الدافئ في الحاوية الخارجية والطاولة الجراحية. احتفظ بخزان احتياطي من مياه المنشأة الدافئة في مكان قريب.

قم بتوصيل مقياس حرارة بالحاوية الخارجية. ضع حاوية التخدير الخارجية بالإضافة إلى طاولة الجراحة بجوار المجهر. ضع دلو رقائق الثلج في مكان قريب.

ابدأ في إضافة رقائق الثلج حتى تصل درجة حرارة الماء إلى 17 درجة مئوية. لا تقل عن 17 درجة مئوية لهذه الخطوة. استخدم شبكة لنقل الأسماك إلى الحاوية الخارجية.

عند 17 درجة أو أقل قليلا ، عادة ما تنشر الأسماك زعانفها الصدرية أفقيا ، وتلهث ، ولها حركات أذنية سريعة. أضف رقائق الثلج ببطء إلى الحاوية لخفض درجة الحرارة إلى 12 درجة مئوية على مدار عدة دقائق. مع انخفاض درجة الحرارة ، تسبح الأسماك بشكل أبطأ وتتوقف السباحة في النهاية.

في النهاية سيتوقف اللهاث وستتباطأ الحركات الأذنية. تكون السمكة جاهزة للحقن عندما لا تتفاعل مع التعامل معها. عند الوصول إلى درجة الحرارة المطلوبة ، اضغط على الإسفنجة لتشبعها.

احتفظ بأصابعك في الماء البارد بدرجة كافية حتى لا تسخن الأسماك وتخرجها من التخدير. أثناء التعامل مع الأصابع الباردة ، انقل السمك برفق إلى حوض الإسفنجة. ضع السمكة مع رفع البطن والخياشيم في الحوض الصغير.

انقل الطاولة الجراحية بسرعة إلى مرحلة المجهر. العمل بسرعة ، ضع الإبرة بعناية بحيث تكون نقاط الطرف أقرب إلى حزام الحوض من فتحة الشرج. أدخل الإبرة في خط الوسط بين زعانف الحوض.

يجب أن تكون قادرا على الشعور عندما تكون الإبرة عميقة على جدار الجسم. أثناء إدخال الإبرة ، يمكنك أن تشعر بجدار الجسم. عندما تدخل الإبرة إلى تجويف البطن ، قم بحقن الحجم المناسب باستخدام المعالج الصغير.

استخدم دواسة القدم لحقن ميكرولتر واحد لكل جرام من وزن جسم السمكة بعد الحقن ، وقم بإزالة الإبرة ونقل السمكة على الفور إلى خزان الماء الدافئ الخاص بها للتعافي. عن طريق إطلاق السمكة من الإسفنجة فوق ماء الخزان ، افحص الإبرة تحت المجهر. في بعض الأحيان سيتم إرفاق مقياس ويجب إزالته قبل الحقن التالي.

بعد فترة زمنية مناسبة ، تابع إجراء الفحص النهائي. لقد وجدنا أن الصيام لمدة 72 ساعة مطلوب لخفض نسبة الجلوكوز في الدم إلى مستوى خط الأساس قبل الحقن. في هذا الشكل ، تعرض بيانات التحكم غير المحقونة الموضحة باللون الأخضر قيم جلوكوز الدم التي لا تختلف اختلافا كبيرا عن أدوات التحكم المحقونة في السيارة الموضحة هنا باللون الأحمر.

ومع ذلك ، يعرض الخط الأزرق قيم الجلوكوز في الدم للأسماك المحقونة بالجلوكوز ويعرض ارتفاع وانخفاض الجلوكوز المنتشر. بمرور الوقت ، كانت كل من الجلوكوز المحقونة المحقونة في السيارة تحت التخدير الجراحي أثناء إجراء الحقن ، في حين أن الضوابط غير المحقونة لم تكن تحت التخدير الجراحي. لقد أوضحنا لك للتو كيفية إجراء الحقن داخل الصفاق في أسماك الزرد البالغة.

في مختبرنا ، ندرس التغيرات في تركيز الجلوكوز في الدم في نقاط زمنية مختلفة بعد حقن محلول الجلوكوز عبر بروتوكول الإنترنت. ومع ذلك ، يمكن استخدام هذه التقنية التي أظهرناها للتو لحقن الحل الذي يثير اهتمامك. عند القيام بهذا الإجراء ، تذكر تخدير الأسماك ببطء والتعامل معها برفق.

هذا كل شيء. شكرا على المشاهدة ونتمنى لك التوفيق في تجاربك.