القياس الكمي للألجينات البكتيرية باستخدام مقايسة حمض اليورونيك كاربازول

خذ مزرعة بكتيريا Pseudomonas aeruginosa في المرق.

ضع المزرعة على أجار العزل واحتضان لتعزيز نمو البكتيريا وإنتاج الجينات ، وهو عديد السكاريد الخارجي المكون من أحماض اليورونيك.

أضف محلول ملحي متساوي التوتر إلى العشب البكتيري وكشط لجمع الخلايا البكتيرية مع الجينات.

انقل المعلق إلى أنبوب ، دوامة لتفريق المحتويات ، وضعه على الجليد لمنع التدهور الأنزيمي.

قم بقياس الكثافة الضوئية ، أو OD ، لتحديد كثافة البكتيريا.

أضف المعلق البكتيري إلى محلول البورات الحمضي واخلطه لتحلل الجينات في مونومرات حمض اليورونيك.

أضف الكاربازول ، وهو كاشف كروموجيني ، واحتضن. في ظل الظروف الحمضية ، يتفاعل الكاشف مع أحماض اليورانيك لتشكيل مجمعات ملونة.

قم بقياس الامتصاص لقياس مستويات حمض اليورونيك ، والتي تعكس تركيز الألجينات.

باستخدام منحنى قياسي ، حدد تركيز الألجينات ، ثم قسمه على كثافة الخلايا البكتيرية المقاسة لحساب إنتاج الألجينات لكل وحدة من الكتلة الحيوية.

لبدء اختبار حمض اليورونيك كاربازول ، حدد مستعمرة واحدة من ثقافة نقية من السلالة المطلوبة ليتم اختبارها واختر المستعمرة باستخدام عود أسنان معقم.

ضع عود الأسنان في أنبوب اختبار مزرعة يحتوي على خمسة ملليلتر من PIB. تنمو في حاضنة شاكر عند 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة. بعد الحضانة ، أضف كمية من مرق PIB المستزرع على طبق PIA دافئ مسبقا.

باستخدام موزع خلايا معقم ، انشر المرق عل