JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:29 د • January 30th, 2026
خذ جنين سمكة الزرد المصاب بفطر البكتيريا الخراجينية، وهي بكتيريا ممرضة تستهدف الجهاز العصبي المركزي وتشكل خراجات تحتوي على بكتيريا وخلايا مناعة مضيفة.
حضن الجنين على الثلج لتثبيته، ثم تعرضه لجرعة زائدة من المخدر لإيقاف النشاط القلبي والعصبي، مما يؤدي إلى الوفاة.
اغسل الجنين لإزالة بقايا المخدر.
أضف محلول منظف لتعطيل أغشية الخلايا وتحليل الجنين.
اقص المادة المحللة عبر إبرة لتجانس النسيج وإطلاق البكتيريا.
قم بالطرد المركزي، ثم تخلص من المادة الفائقة، وأعد تعليق الحبيبات في محلول خافض للتوتر الطبيعي لمنع تكتل البكتيريا.
قم بتخفيف التعليق البكتيري بشكل تسلسلي ونشره على صفائح الأجار.
يتم تعزيز الوسط بالمضادات الحيوية لمنع نمو الميكروبات الأخرى بينما تتكاثر خلايا المتفطرة المصممة لمقاومة المضادات الحيوية.
الحضانة لتعزيز تكوين المستعمرات، مما يمكن من قياس كمية حمل البكتيريا على الجنين.
لتعداد وحدات تكوين المستعمرات أو وحدات CFU في النقطة الزمنية المطلوبة، اجمع خمسة أجنة لكل حالة عدوى وانقل كل جنين إلى أنبوب طرد مركزي دقيق بسعة 1.5 ملليلتر. قم بتجميد الأجنة عن طريق الحضانة على الثلج لمدة 10 دقائق. بعد القتل الرحيم للأجنة بكمية تتراوح بين 300 إلى 500 ملغ لكل لتر من التريكين، استخدم ماء معقم لغسل الأجنة مرتين في أنبوب جديد.
بعد ذلك، بعد إزالة الماء بنسبة 2٪ من ترايتون X-100 في 1 X PBS لكل جنين، استخدم إبرة قياس 26 لتوحيد النسيج للتحلل الكامل.
بعد توصيل نظام التعليق، استخدم 1 X PBST لإعادة تعليق الحبيبة. ثم تم تخفيف التجانس بالصفائح المتجانسة على Middlebrook 7H10OADC مع إضافة BBL MGIT PANTA.
حضن الصفائح عند 30 درجة مئوية لمدة 4 أيام قبل عد المستعمرات.