نموذج الأمعاء في المختبر لتقييم التصاق البكتيريا واستبطانها

ابدأ بإدخال ترانسويل يحتوي على زراعة مشتركة من الخلايا الطهارية وخلايا تشبه الكأس.

تشكل خلايا الظهارة وصلات ضيقة، بينما تنتج الخلايا الشبيهة بالكأس مخاطا، مكررا الحاجز الطهاري المعوي داخل الجسم.

خذ معلقا من مجتمع البكتيريا الفموية الذي تم علاجه بسائل معوي محاكى لمحاكاة الهضم في الأمعاء الدقيقة.

استبدل الوسط في الحجرة العلوية بنظام التعليق البكتيري.

حضن البكتيريا مع الرج لتسهيل التصاق البكتيريا واستيعابه.

اجمع الوسط من الغرفة العلوية التي تحتوي على بكتيريا غير ملتصقة لإجراء اختبارات البقاء لاحقا.

أضف محلول يذيب المخاط وحضن المخاط لإذابة المخاط وإطلاق البكتيريا الملتصقة.

اجمع الحل لمزيد من التحليل لفعالية البكتيريا والالتصاقها.

اغسل الخلايا باستخدام العزل وأضف منظفا لإزاحتها.

اجمع تعليق الزنزانة.

يقوم بعمل التعليق الدوامي لتحليل الخلايا وإطلاق البكتيريا الداخلية.

قم بجهاز الطرد المركزي وجمع الحطام الفائق والخلوي بشكل منفصل لمزيد من التحليل.

بعد غسل وضبط كثافة الخلايا في الهضم في الأمعاء الدقيقة وفقا لبروتوكول النص، إزالة الوسط القمي من نظام الترانسويل، وإضافة 1.5 ملليلتر من التعليق البكتيري.

قم بزراعة النظام تحت ظروف زراعة الخلايا العامة لمدة ساعتين. أضف 0.5 ملليلتر من 10 ملليمولر n-أستيل سيستيين في HBSS لإذابة المخاط الناتج عن HT29-MTX واستعادة البكتيريا الملتصقة.

حضن الألواح على درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة ساعة تحت التحريك. استرجع NAC-HBSS في أنبوب جهاز طرد مركزي دقيق، واستخدم 1 ملليلتر من DPBS لغسل الخلايا مرتين. أضف 0.5 ملليلتر من ترايتون X-100 بنسبة 0.5٪ فوق الطبقات الأحادية، وقم بتعطيل الخلايا عن طريق التقطيع.

ثم استرجع السائل بسرعة في الدوامة لمدة دقيقة واحدة. السرعة ضرورية لتجنب إتلاف الخلايا البكتيرية باستخدام المنظف. حلل العينات وفقا لبروتوكول النص.