JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدات • 2:18 د • August 31st, 2026
خذ مزرعة من الأميبا المصابة بفيروس عملاق يُعرف باسم Faustovirus.
اجمع السائل الطافي للمستنبت الذي يحتوي على Faustovirus.
قم بترسيب الطافي على شبكة مجهر إلكتروني معالجة بالتفريغ التوهجي.
تُحضن العينة للسماح بامتزاز الجسيمات الفيروسية على الشبكة.
جفف الشبكة باستخدام ورق ترشيح لإزالة الجسيمات الفيروسية غير المرتبطة.
ضع قطرة من موليبدات الأمونيوم.
يعمل موليبدات الأمونيوم كصبغة سلبية من خلال الارتباط بالشبكة حول الفيروس وتغميق الخلفية لتعزيز التباين أثناء التصوير.
تخلص من فائض موليبدات الأمونيوم عن طريق تجفيف الشبكة باستخدام ورق ترشيح.
ضع الشبكة في طبق بتري واتركها حتى تجف.
بعد ذلك، ضع الشبكة على حامل العينات.
أدخل الحامل في المجهر الإلكتروني.
التقط صورة لـ Faustovirus وقم بقياس حجم Faustovirus لإجراء المزيد من التحليل.
لإجراء المجهر الإلكتروني، ضع 5 µl من العينة الموجبة على شبكة مفصعة بالتفريغ المتوهج، واحضنها في درجة حرارة الغرفة لمدة 20 دقيقة تقريبًا. جفف الشبكة بعناية، ثم أضف كمية صغيرة من موليبدات الأمونيوم بتركيز 1% واحضنها لمدة 10 ثوانٍ. بعد إزالة القطرة بعناية، اترك الشبكة لتجف لمدة خمس دقائق. بعد ذلك، اضبط المجهر الإلكتروني على 200 keV. ثم، ضع الشبكة على الحامل وأدخل الحامل في المجهر. انقر فوق أيقونة نظرة عامة على الفراغ وتحقق من حالة الفراغ. ثم، أغلق الصمامات، واضبط حجم البقعة على 5، والتكبير على 25,000 قبل بدء الملاحظة. بعد تحديد موقع الفيروس العملاق على شاشة الالتقاط، استخدم أداة القياس لقياس الفيروس.
قم بإجراء البيولوجيا الجزيئية وتسلسل الجينوم الفيروسي وفقاً للبروتوكول المكتوب.