إثراء الفيروسات العملاقة باستخدام الأميبا من عينة مياه بيئية

خذ طبقاً متعدد الآبار يحتوي على أميبات مستزرعة في وسط تجويع.

يحتوي وسط التجويع على مضادات حيوية وعوامل مضادة للفطريات تحد من النمو الميكروبي مع الحفاظ على حيوية الأميبا دون تكاثر أو تكوين تكيسات خاملة.

خذ أنبوبًا يحتوي على عينة المياه البيئية وقم برجها باستخدام جهاز vortex لتحرير الفيروسات من المواد الصلبة العالقة والشوائب.

أضف عينة المياه التي تحتوي على الفيروسات إلى الأميبات.

ضع الطبق في كيس مع كمادة مبللة لمنع التبخر، ثم قم بالتحضين.

خلال فترة التحضين، تبتلع الأميبات الفيروسات العملاقة عن طريق البلعمة.

بمجرد دخوله إلى الداخل، يطلق الفيروس جينومه في سيتوبلازم الأميبا.

تتشكل مصنع فيروسي سيتوبلازمي حول الجينوم الفيروسي، حيث يستخدم آليات المضيف للتضاعف وإنتاج بروتينات فيروسية تتجمع لتكوين جسيمات فيروسية جديدة.

يؤدي ذلك إلى جعل خلايا الأميبا مستديرة وتحللها، مما يؤدي إلى إطلاق فيروسات جديدة في الوسط، وهو ما يساهم في إثراء الفيروسات العملاقة لعملية الكشف اللاحقة.

بعد جمع عينات المياه الملوثة وفقاً للبروتوكول النصي، يتم تحضير الخلية المضيفة، V. vermiformis، عن طريق إضافة الأميبا إلى قارورة زراعة خلايا بمساحة 75 سنتيمتر مربع تحتوي على 30 ملليلتر من وسط مستخلص البروتياز والببتون والخميرة والجلوكوز، أو وسط PYG، وتحضينها عند 28 درجة مئوية لمدة 48 ساعة. تُستخدم شرائح العد لحساب عدد الأميبا، وعندما ت