تحديد المجموعات الفرعية للخلايا التائية التنظيمية من الغدد الليمفاوية لتصريف البنكرياس في الفئران

الخلايا التائية التنظيمية ، أو Tregs ، هي مجموعة سكانية فرعية متخصصة في الخلايا التائية تمارس تأثيرات مثبطة للمناعة للتوسط في توازن الجهاز المناعي. تعبر Tregs عن علامات سطح الخلية CD4 و CD25 و Neuropilin 1 و Nrp1 وعوامل النسخ النووي صندوق شوكة P3 و Foxp3 و Helios.

لعزل Tregs من الغدد الليمفاوية لتصريف البنكرياس للفأر ، أو PDLNs ، ضع شبكة معدنية فوق أنبوب مخروطي الشكل. ضع PDLNs على الشبكة وطحن الأنسجة لفصلها ميكانيكيا. أضف وسيطا مناسبا فوق الشبكة ، وقم بغسل الخلايا في الأنبوب.

أجهزة الطرد المركزي ، وإزالة الخلايا الميتة والحطام الخلوي. أعد تعليق الخلايا القابلة للحياة في الوسائط. مرر الخلايا من خلال غطاء مصفاة خلية مثبت على أنبوب دائري القاع للحصول على تعليق متجانس أحادي الخلية ، مما يقضي على أي كتل خلية متبقية.

أضف الأجسام المضادة المضادة ل CD4 المترافقة بالفلوروكروم ، والأجسام المضادة ل CD25 ، والمضادة ل Nrp1. ترتبط الأجسام المضادة المضادة ل CD4 و CD25 بمستضدات سطح الخلية الخاصة بها في Tregs. في الوقت نفسه ، يرتبط anti-Nrp1 بمستقبلات Nrp1.

عالج الخلايا بمخزن مؤقت مناسب لتثبيت النفاذية ، وإصلاح الخلايا واختراق الأغشية الخلوية والنووية. أضف الأجسام المضادة المترافقة بالفلوروكروم التي تستهدف Foxp3 و Helios.

تسمح الأغشية المنفذة للأجسام المضادة بدخول الخلايا والارتباط بأهدافها داخل ال