JoVE Encyclopedia of Experiments
علم الأعصاب
0 مشاهدات • 2:38 د • July 8th, 2025
خذ مزارع خلايا القمة العصبية الملتصقة المزروعة على أغطية مغلفة بمواد هلامية مائية متفاوتة الصلابة. اغسل الخلايا بالعازلة.
أضف بارافورمالدهيد لإصلاح الخلايا والحفاظ على التشكل الخلوي.
اغسل الخلايا بمحلول عازل لإزالة أي فائض من البارافورمالدهيد.
بعد ذلك ، أضف منظفا غير أيوني لنفاذية أغشية الخلايا.
اغسل الخلايا بمحلول عازل لإزالة المنظفات الزائدة.
بعد ذلك ، أدخل حل حجب لمنع الارتباط غير المحدد.
احتضان الخلايا بمسبار أكتين خيطي عالي التقارب يرتبط بخيوط الأكتين.
اغسل الخلايا بمخزن مؤقت لإزالة أي مجسات غير مرتبطة.
أضف صبغة نووية فلورية لتلطيخ النوى ، ثم اغسلها بمحلول عازل لإزالة الصبغة الزائدة.
ضع وسائط التثبيت على الطبقات وفحص الخلايا الملطخة تحت المجهر الفلوري.
تظهر الخلايا المزروعة على الهلاميات المائية الأكثر صلابة زيادة في تكوين خيوط الأكتين ومورفولوجيا أكثر انتشارا من تلك التي تزرع على الهلاميات المائية الأكثر ليونة.
استخدم الملقط لنقل الغطاء إلى لوحة جديدة لتقليل الإشارات الخاطئة من الخلايا المزروعة مباشرة على اللوحة. بعد ذلك ، قم بإصلاح الخلايا باستخدام 500 ميكرولتر من 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 10 دقائق ، قبل معالجة الخلايا ب 500 ميكرولتر من 0.1٪ Triton X-100 في درجة حرارة الغرفة.
بعد 15 دقيقة ، قم بسد الخلايا ب 250 ميكرولتر من مصل الحمار بنسبة 10٪. تلطيخ خلايا F-actin بالفالودين عند تخفيف من 1 إلى 400 في 250 ميكرولتر من مصل الحمار 10٪ ، متبوعا بالحضانة باستخدام DAPI لمدة 10 دقائق.
اغسل الخلايا باستخدام PBS لمدة دقيقتين قبل إضافة ثلاث إلى أربع قطرات من وسط التركيب إلى كل بئر. على المجهر الفلوري ، التقط صورا لما لا يقل عن ثلاثة إطارات عشوائية لكل عينة هيدروجيل تنتج قنوات فردية ومدمجة.