موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 2:38 دقيقة • July 8th, 2025
خذ مزارع خلايا القمة العصبية الملتصقة المزروعة على أغطية مغلفة بمواد هلامية مائية متفاوتة الصلابة. اغسل الخلايا بالعازلة.
أضف بارافورمالدهيد لإصلاح الخلايا والحفاظ على التشكل الخلوي.
اغسل الخلايا بمحلول عازل لإزالة أي فائض من البارافورمالدهيد.
بعد ذلك ، أضف منظفا غير أيوني لنفاذية أغشية الخلايا.
اغسل الخلايا بمحلول عازل لإزالة المنظفات الزائدة.
بعد ذلك ، أدخل حل حجب لمنع الارتباط غير المحدد.
احتضان الخلايا بمسبار أكتين خيطي عالي التقارب يرتبط بخيوط الأكتين.
اغسل الخلايا بمخزن مؤقت لإزالة أي مجسات غير مرتبطة.
أضف صبغة نووية فلورية لتلطيخ النوى ، ثم اغسلها بمحلول عازل لإزالة الصبغة الزائدة.
ضع وسائط التثبيت على الطبقات وفحص الخلايا الملطخة تحت المجهر الفلوري.
تظهر الخلايا المزروعة على الهلاميات المائية الأكثر صلابة زيادة في تكوين خيوط الأكتين ومورفولوجيا أكثر انتشارا من تلك التي تزرع على الهلاميات المائية الأكثر ليونة.
استخدم الملقط لنقل الغطاء إلى لوحة جديدة لتقليل الإشارات الخاطئة من الخلايا المزروعة مباشرة على اللوحة. بعد ذلك ، قم بإصلاح الخلايا باستخدام 500 ميكرولتر من 4٪ بارافورمالدهيد لمدة 10 دقائق ، قبل معالجة الخلايا ب 500 ميكرولتر من 0.1٪ Triton X-100 في درجة حرارة الغرفة.
بعد 15 دقيقة ، قم بسد الخلايا ب 250 ميكرولتر من مصل الحمار بنسبة 10٪. تلطيخ خلايا F-actin بالفالودين عن
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية