مزمن انقباض في العصب الوركي والألم اختبار فرط الحساسية في الفئران

الهدف العام من هذا الإجراء هو إجراء تضييق مزمن وإصابة للعصب الوركي، وهو نموذج شائع الاستخدام في القوارض لدراسة الألم الاعتلالي العصبي، وقياس سلوكيات الألم الناتجة كمياً. يتم تحقيق ذلك أولاً من خلال وضع أربعة أربطة من أمعاء الكروم حول العصب الوركي المكشوف عند مستوى منتصف الفخذ لإحداث إصابة تضييقية في العصب الوركي. بعد ذلك، يتم مراقبة سلوكيات الألم في القدم الخلفية في النقاط الزمنية المطلوبة عن طريق القياس الكمي لعتبة سحب القدم استجابة للمحفز الميكانيكي باستخدام جهاز von fray، وقياس فترة زمن سحب القدم استجابة للمحفز الحراري باستخدام مقياس التسكين الأخمصي.

في نهاية المطاف، يمكن الحصول على نتائج تظهر وجود الألم الميكانيكي والحراري، وفرط الحساسية في الطرف الخلفي المصاب من خلال قياس استجابات السحب المستحثة لكل من المحفزات الميكانيكية والحرارية. يمكن لهذه الطريقة في إصابة الأعصاب الطرفية، التي طورها أول مرة bene و Z، أن تساعدنا في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال الألم المزمن، مثل ما هي الآليات الطرفية والمركزية التي يتولد من خلالها الألم الاعتلالي العصبي. وتمتد تطبيقات هذه التقنية إلى علاج الألم الاعتلالي العصبي لأن هذا النموذج يوفر الأساس لفحص استراتيجيات جديدة لتقليل فرط الحساسية للألم.

بشكل عام، قد يواجه الأشخاص المبتدئون في هذه الطريقة بعض الصعوبات، حيث يمثل وضع غرز الأمعاء من نوع cmic حول العصب الساكن وبإحكام مناسب لإحداث إصابة عصبية كافية ولكن غير مفرطة تحدياً خاصاً. لبدء هذا الإجراء، قم بتطهير سطح العمل الجراحي باستخدام 70%ethanol وجهز الأدوات المعقمة والشاش والدباسات والمسحات التي سبق تعقيمها بجهاز الـ autoclave. بعد ذلك، قم بتخدير الجرذ في غرفة التحريض باستخدام 5%ISO fluorine.

قم بتوصيل 2%ISO fluorine إلى الحيوان عبر قناع وجه مُصنع خصيصاً أثناء الجراحة. بعد ذلك، قم بحلاقة الساق الخلفية اليسرى للجرذ، ثم ضع الحيوان على بساط تدفئة منظم حرارياً عند 37 درجة Celsius. ضع مرهم رمد تزييتي على العينين.

بعد ذلك، قم بتجهيز خيط الجراحة المعوي الكرومي عن طريق قطعه إلى قطع صغيرة بطول ثلاثة سنتيمترات تقريباً، ثم اغمرها في محلول ملحي معقم. تالياً، قم بتعقيم المنطقة المحلوقة من خلال ثلاث تطبيقات متبادلة من الكحول ومحلول اليود. ومع وضع الحيوان على صدره، ارفع ساقه الخلفية اليسرى وثبت الفخذ بزاوية 90 درجة بالنسبة للعمود الفقري باستخدام شريط لاصق على القدم.

بعد ذلك، قم بإجراء شق في الجلد على عمق يتراوح بين ثلاثة إلى أربعة مليمترات أسفل عظمة الفخذ. افصل الجلد عن العضلات المحيطة بالشق عن طريق قطع النسيج الضام. استخدم مقصاً غير مدبب لقطع النسيج الضام الموجود بين عضلة gluteus superficialis وعضلة biceps fems.

بعد ذلك، استخدم مباعداً لتوسيع الفجوة بين العضلتين من أجل السماح برؤية واضحة للعصب الوركي، ثم استخدم الملقط والمقصات الدقيقة لتحرير حوالي 10 millimeters من العصب الوركي برفق من النسيج الضام المحيط. اربط الرباط الأول في منطقة قريبة من تفرع العصب الوركي لكل رباط، وابدأ بعقدة واحدة فضفاضة.

بعد ذلك، أمسك الطرفين بالقرب من العروة واسحبهما حتى تصبح العروة محكمة تماماً ولا ينزلق الرباط على طول العصب. ثم ثبت العروة في وضعها الصحيح وضع عروة ثانية فوق العروة الأولى لإكمال العقدة. بعد ذلك، قص الأطراف السائبة من الرباط ليكون تضييق العصب دائرياً بمقدار 1 mm وبحد أدنى.

كرر الخطوات مع الرباطات الثلاث المتبقية عن طريق ربط كل رباط إضافي بمسافة 1 mm أكثر تدنيًا (proximal) من الرباط السابق. وأخيرًا، مع ضمان الحد الأدنى من التضييق في نهاية الجراحة، استخدم الغرز الجراحية لإغلاق الطبقة العضلية والدبابيس لتثبيت الجلد. بعد ذلك، استخدم محلول اليود لتعقيم الجرح.

راقب الحيوان عن كثب خلال فترة الإفاقة من التخدير، واتركه ليتعافى في قفص منفصل يحتوي على فرش من الورق المسطح. وقبل البدء في التجربة، تعامل مع الحيوان يومياً لعدة أيام.

ثم قبل البدء في الاختبار السلوكي، قم بتعويد الجرذ على enclosure. يجب الحفاظ على بيئة الاختبار هادئة ومنضبطة جيداً مع مستويات ثابتة من درجة الحرارة والرطوبة، كما يجب إجراء كل جلسة اختبار في وقت مماثل من اليوم. ولدراسة عتبة السحب الميكانيكي في يوم الاختبار، ضع الجرذ في قفص الاختبار ذي الأرضية الشبكية المرتفعة قبل 15 إلى 30 دقيقة من التجربة، وباستخدام dynamic plantar von fray ضع وحدة محفز اللمس مع الفتيلة مباشرة تحت السطح الأوسط لبطن القدم الخلفية ثم اضغط على مفتاح البدء.

يؤدي هذا الإجراء إلى رفع الشعيرة لتحفيز السطح الأخمصي للقدم الخلفية ميكانيكيًا بقوة متزايدة. بعد ذلك، يتم تسجيل عتبة السحب الميكانيكي من كل من القدمين الخلفيتين المصابة وغير المصابة. يقوم هذا الجهاز بتسجيل وعرض القوة القصوى المسلطة عند حدوث رد فعل السحب تلقائيًا.

كرر التحفيز الميكانيكي ثلاث مرات بفاصل زمني يبلغ حوالي خمس دقائق بين عمليات التحفيز، واختبر القوائم الخلفية غير المصابة بترتيب متوازن، ثم احسب متوسط عتبات سحب القائمة. ولدراسة زمن استجابة السحب الحراري في يوم الاختبار، ضع الجرذ في القفص ذو الأرضية الزجاجية قبل بدء التجربة بـ 15 إلى 30 دقيقة، وباستخدام جهاز تحليل التسكين الحراري لبطن القدم، وجه مصدر الأشعة تحت الحمراء مباشرة تحت السطح الأوسط لبطن القائمة الخلفية ثم اضغط على مفتاح البدء.

يؤدي ذلك إلى تعريض السطح الأخمصي للقدم الخلفية لشعاع من الحرارة المشعة عبر سطح زجاجي شفاف. بعد ذلك، يتم تسجيل زمن استجابة السحب من كل من القادمين الخلفيتين المصابة وغير المصابة. يقوم هذا الجهاز بتسجيل الوقت المستغرق من بداية التحفيز الحراري حتى سحب القدم من مصدر الحرارة تلقائياً.

كرر التحفيز الحراري ثلاث مرات على الأقل مع فاصل زمني يبلغ حوالي خمس دقائق بين كل تحفيز، مع اختبار القوائم الخلفية المصابة وغير المصابة بترتيب متوازن، ثم احسب متوسط فترات كمون سحب القائمة. يوضح الشكل هنا عتبة السحب الميكانيكي في كل من القوائم المصابة وغير المصابة لجرذان Wistar قبل وبعد مرور ما يصل إلى 12 يومًا من التضييق المزمن للعصب الوركي. هناك انخفاض ملحوظ في عتبة سحب القائمة تجاه المحفزات الميكانيكية في القائمة الخلفية المصابة في نفس الجانب مقارنة بالقائمة الخلفية غير المصابة في الجانب المقابل. يظهر هنا زمن كمون السحب الحراري في كل من القوائم المصابة وغير المصابة قبل وبعد مرور ما يصل إلى 12 يومًا من التضييق المزمن للعصب الوركي.

وبالمثل، يقل زمن استجابة سحب الطرف عند التعرض للحرارة بشكل ملحوظ في القائمة الخلفية المصابة في الجانب نفسه مقارنة بالقائمة الخلفية غير المصابة في الجانب المقابل. وبمجرد إتقان العملية، يمكن إجراء جراحة CCI بشكل صحيح في غضون 20 دقيقة فقط لكل حيوان، مما يؤدي إلى فرط حساسية طويل الأمد للألم في القائمة الخلفية. وأثناء محاولة تنفيذ هذا الإجراء، من المهم تذكر ربط الأربطة بشكل فضفاض، حيث إن التضيق يحدث نتيجة الخنق الذاتي تحت الأربطة عقب حدوث الوذمة بعد تطورها.

تتيح هذه التقنية لإصابة الأعصاب الطرفية مقترنة باختبار موجة P لفرط الحساسية للألم للباحثين في مجال الألم الاعتلالي العصبي استكشاف الآليات الكامنة وراء الألم المزمن الناتج عن إصابة الأعصاب.