نوفمبر 18, 2012
هذا البروتوكول يحدد الصيانة الدورية والرعاية للحفاظ على الظروف المثلى لتربية اسماك الزرد. شريط الفيديو يوضح البروتوكول لصيانة النظام والإسكان العادية، والتغذية، والتربية، وتربية اليرقات الزرد.
يصف هذا البروتوكول الرعاية والصيانة الدورية لمختبر أسماك الزيبرا. ونظرًا للاهتمام المتزايد بأبحاث أسماك الزيبرا، تزداد الحاجة أيضًا إلى إنشاء وصيانة مرافق لإيواء هذه الأسماك. وعلى الرغم من توفر مراجع أدبية حول صيانة مختبرات أسماك الزيبرا، إلا أن هناك نقصًا في البروتوكولات المرئية الموجزة.
يشرح هذا الفيديو صيانة النظام، وتغذية، وتربية، وتنشئة يرقات سمك الزيبرا. مرحبًا، أنا ABH من كلية العلوم الطبية في الجامعة. مرحبًا، أنا Manchi من مؤسسة Thee Institution.
سنعرض لكم اليوم الرعاية والصيانة الدورية لمختبر أسماك الزيبرا. تكتسب أسماك الزيبرا شعبية متزايدة في أبحاث الوراثة والعقاقير والسلوك. ونظراً لسهولة صيانتها ونموها السريع، فإنها تكون قابلة للتعديل الوراثي بشكل كبير ومناسبة لعمليات فحص العقاقير عالية الإنتاجية.
يوفر هذا الجزء من الكود أفكاراً حول تربية أسماك الزيبرا لمربي هذه الأسماك والباحثين الذين يفكرون في إنشاء مرفق جديد للأسماك. لذا، فلنبدأ. توفر عدة شركات أنظمة لتربية الأسماك، ولكننا نستخدم أنظمة من aquatic habitats.
في مختبرنا، يتم الاحتفاظ بأسماك الزيبرا في درجة حرارة تتراوح بين 26 و 28.5 °C وبدورة ضوئية تتراوح من 14 إلى 10 ساعات (ضوء إلى ظلام). تُحفظ أسماك الزيبرا في نظام تدوير يقوم بتصفية وتهوية مياه النظام باستمرار. وللحفاظ على جودة المياه المطلوبة لبيئة مائية صحية، يستخدم النظام مجموعة من المرشحات من أنواع مختلفة ضمن نظامنا.
تمر المياه من الخزانات عبر وسادة ترشيح، ومرشح أسطواني، ومرشح بيولوجي، ومرشح كربون نشط، ومرشح بالأشعة فوق البنفسجية (UV) قبل أن يتم تدويرها مرة أخرى إلى الخزان. تُستخدم مياه منزوعة الكلور أو مياه مُعتقة في نظام أسماك الزيبر فيش. يمكن إزالة الكلور من المياه عن طريق تعتيقها لمدة 48 ساعة على الأقل.
افحص درجة حموضة (pH) مياه النظام يومياً وحافظ عليها بين 6.8 و7.5. يجب تنظيف أحواض الأسماك بانتظام باستخدام بيكربونات الصوديوم. ولتنظيف حوض الأسماك، أغلق تدفق المياه إلى هذا الحوض، وصرف المياه الزائدة عن طريق إمالة الحوض للخلف، ثم أخرج الحوض بعناية من النظام.
قم بتجهيز حوض نظيف وملئه بمياه النظام. انقل الأسماك بعناية إلى هذا الحوض باستخدام شبكة صيد الأسماك. أغلق الغطاء وأعد وضع بطاقة اسم الحوض بعناية.
ضع الخزان في النظام. أعد الأنبوب إلى الخزان وقم بتشغيل إمدادات المياه. قم بتطهير شبكة الأسماك والخزان باستخدام 70% ethanol.
اشطفه بالماء واتركه ليجف قبل إعادة الاستخدام. يجب فحص مرشحات نظام التدوير وتغييرها بانتظام لضمان عملها بشكل صحيح.
يتم فحص وسادة الترشيح ذات الـ 120 micron وإعادة ضبط موضعها باتجاه تدفق المياه يومياً قبل استبدالها. كما يجب تغيير مرشح العلبة (canister filter) أسبوعياً. ولتغيير مرشح العلبة، قم بإزالته باستخدام مفتاح ربط أو باليد.
ضع ورقة بلاستيكية أو منشفة في الأسفل لمنع تسرب المياه. أدخل عبوة جديدة ومرشحاً، ثم أعد تركيب الوحدة في النظام. أحكم الربط بعناية باستخدام اليدين ومفتاح ربط.
عند الضرورة، يجب تغيير مرشح الكربون كل أسبوعين. ولتغيير مرشح الكربون، قم بإزالته بعناية. وباستخدام مفتاح ربط، تخلص من الكربون المنشط الموجود في المرشح واستبدله بكربون منشط جديد.
أعد تركيب حامل الكربون وضعه مرة أخرى في وحدة الفلتر. ثم أعد تركيب وحدة الفلتر في النظام. قم بتشغيل النظام وتحقق مما إذا كانت المياه تتدفق إلى الفلتر.
يجب تنظيف المرشح البيولوجي كل ستة أشهر. لتغيير المرشح البيولوجي، قم بإزالة المرشح من النظام. قم بتفريغ الضغط من المرشح عن طريق الضغط على زر تحرير الضغط.
قم بفك المرشح وإزالة الغطاء. أفرغ المحتويات في وعاء نخل لفصل Cy Oex عن الماء. إذا كان Cy Oex متسخاً جداً، فقم باستبداله.
املأ المرشح بـ cy ax الجديد. املأ الوحدة بماء النظام. أغلق غطاء المرشح وأعد تركيب الوحدة ثم قم بتشغيلها.
تُستخدم مرشحات الأشعة فوق البنفسجية للسيطرة على الملوثات البيولوجية ويجب استبدالها كل تسعة إلى 10 أشهر. يمكن تغذية أسماك Zebra fish بالأغذية الجافة أو الأغذية الحية مثل brine shrimps، وتتوفر بيض brine shrimp من محلات الحيوانات الأليفة المحلية ويمكن تفقيسها في المختبر باتباع الخطوات البسيطة الموضحة هنا. قم بإذابة ملح البحر الأحمر في مياه النظام لتحضير محلول بتركيز 30 إلى 35 جرام لكل لتر.
املأ حاضنة روبيان الملح بالماء المالح وأضف بيوض الروبيان بتركيز 1.2 ملعقة كبيرة لكل لتر. قم بتهوية الحاضنة بقوة باستخدام مضخة هواء واترك بيوض روبيان الملح لتفقس لمدة 48 ساعة تقريبًا. قم بإزالة أنبوب الهواء واترك المزرعة تترسب لمدة تتراوح من أربع إلى خمس دقائق.
تتجمع روبيان الملح المخصبة في قاع الحاضنة؛ وباستخدام الصنبور الموجود في أسفل الحاضنة، يتم التخلص من التدفق الأول الذي يحتوي على البيض غير المخصب، ثم تُجمع روبيان الملح المخصبة. بعد ذلك، يتم فصل روبيان الملح عن الماء المالح.
استخدام شبكة جمع روبيان الملح. شطف روبيان الملح في وعاء باستخدام مياه النظام، حيث يتواجد روبيان الملح بتركيز عالٍ في قاع الوعاء ويكون الآن جاهزاً لإطعام أسماك الزيبرا. يتم إطعام روبيان الملح للأسماك باستخدام ماصة أو قطارة.
تعتمد كمية الغذاء المقدمة على حجم تعداد الأسماك في كل حوض على حدة. بعد حقن الغذاء في الماء، تسبح الأسماك الجائعة للإمساك بروبيان الملح (brine shrimp)، وهو أمر ضروري لضمان ممارستها للتمرين البدني المنتظم. يمكن إجراء التغذية الجافة إما باستخدام موزعات غذاء الأسماك المخصصة للموائل المائية، أو باستخدام ملعقة بسيطة.
تبدأ أسماك الزيبرا في التكاثر عند بداية الضوء. ويمكن الحصول على البيوض من خلال التكاثر الجماعي أو التكاثر الزوجي. وبينما يعد التكاثر الجماعي أكثر كفاءة من حيث الجهد ويُستخدم في الجمع المعتاد للأجنة، يفضل التكاثر الزوجي عند الرغبة في فحص جينات أو طفرات معينة؛ في التكاثر داخل الحوض، قم بتجميع جهاز التكاثر وأنزله ببطء داخل الحوض.
بعد بدء الإضاءة، اترك مجموعة التزاوج في الحوض لمدة 15 دقيقة تقريبًا للسماح للأسماك بالتزاوج قبل إزالة وحدة التزاوج من الحوض وجمع البيض. يتم إعداد التزاوج الزوجي في وقت متأخر من فترة بعد الظهر عن طريق تجميع حوض التزاوج وملئه بمياه النظام. انقُل أنثى واحدة وذكرًا واحدًا إلى جانبين متقابلين من الحوض.
يمكن تمييز الإناث عن الذكور بسبب بطونهن الأكبر حجماً. قم بإزالة الفاصل في صباح اليوم التالي. وبعد وقت قصير من ظهور الضوء، اترك الأسماك للتزاوج دون إزعاج لمدة 20 دقيقة أو حتى يتم وضع أعداد كافية من الأجنة في قاع الحوض.
بعد التزاوج، أعد الأسماك إلى أحواضها. اجمع البيض باستخدام مصفاة، ثم اغسل الأجنة جيداً.
باستخدام مياه النظام. يتم نقل الأجنة إلى طبق بتري عن طريق شطف المصفاة بوسط الأجنة. ويمكن ملاحظة الأجنة تحت المجهر.
يجب فصل الأجنة غير المخصبة عن الأجنة المخصبة باستخدام إبرة وماصة. بعد فصل البيض المخصب عن البيض غير المخصب، يتم الاحتفاظ به في حاضنة عند درجة حرارة 28.5 °C تقريبًا لمدة 72 ساعة حتى تفقس اليرقات. الآن أصبحت اليرقات خارج الـ CORs وتسبح بحرية.
يجب تغذية اليرقات بدءاً من اليوم الخامس بعد الإخصاب، مع الاحتفاظ بها في مياه راكدة لبضعة أيام قبل نقلها إلى النظام. انقُل اليرقات برفق إلى خزان يحتوي على حاجز صغير الحجم يتراوح قياسه بين 300 إلى 400 microns. بعد 14 يوماً، يمكن وضع خزانات اليرقات على الرفوف في النظام وتزويدها بتيار صغير من المياه الدوارة.
يجب استخدام حواجز بأحجام مختلفة اعتماداً على حجم اليرقات والأسماك البالغة. وعادةً ما يستغرق تطور الأجنة لتصبح بالغين ناضجين جنسياً ثلاثة أشهر. شكراً لمتابعتكم هذا العرض، وبالتوفيق في تجاربكم.
يوضح هذا البروتوكول أعمال الصيانة والرعاية الدورية المطلوبة لضمان التربية المثلى لأسماك الزيبرا. ويتضمن إجراءات مفصلة لصيانة النظام، والإيواء، والتغذية، والتكاثر، وتربية يرقات أسماك الزيبرا.
يدعم وضع بروتوكولات قوية لتربية أسماك الزيبرفيش (zebrafish) توفير نماذج قبل سريرية موثوقة للأبحاث الفارماكولوجية والجينية. وتعمل ممارسات الإيواء والتغذية والتكاثر الموحدة على تقليل التباين البيولوجي وتحسين إمكانية تكرار البيانات في تدفقات عمل الاكتشاف المبكر. وهذا يتيح إجراء مسح نمطي متسق والتحقق من صحة الأهداف في الأنظمة ذات الصلة بالأمراض.
تندمج تربية أسماك الزيبرا في سلسلة الاكتشافات بدءاً من التحقق المبكر من الأهداف وصولاً إلى تحديد المركبات الواعدة والتوصيف قبل السريري، وذلك من خلال توفير منصة بيولوجية مستقرة وقابلة للتوسع.