حمل عضلية للبطانة الشريانية الحميد مقابل تصلب الشرايين في فئران: مقدمة من اثنين من نماذج صالحة

الهدف العام من التجربة التالية هو تقديم نموذجين حيوانيين صالحين يؤديان إلى تضيق الشريان الأورطي عبر آليات مختلفة. يتمثل النموذج الأول في قسطرة البالون للشريان الأورطي لإحداث فرط تنسج الطبقة العضلية الباطنة. أولاً، يتم كشف الشريان الأورطي البطني تحت الكلوي وتثبيته بمشبك.

بعد ذلك، يتم فتح الشريان الأبهر بواسطة شق عرضي، ثم يتم إدخال قثطرة البالون. ثم يتم كشط البطانة الداخلية للشريان الأبهر باستخدام القثطرة المنفوخة، وبذلك تنتهي العملية الجراحية. أما النموذج الثاني فهو عبارة عن تلاعب غذائي للفئران المعدلة وراثياً من نوع APOE null لإنشاء لويحات تصلبية.

تُربى هذه الفئران في ظروف قياسية وتتغذى على نظام غذائي غربي عالي الدهون لمدة تتراوح بين أربعة إلى ستة أشهر. وفي النهاية، يُظهر التحليل النسيجي لتضخم الطبقة العضلية الباطنية المستحث جراحياً ونموذج التقييد الغذائي أنهما يؤديان إلى تضيق تجويفي مختلف. سنعرض لكم اليوم نموذجين مختلفين لاستحثاث التضيق التجويفي: نموذج الفئران باستخدام قسطرة بالونية لإحداث إصابة في الوعاء الدموي، ونموذج تصلب الشرايين.

باستخدام الفئران المعدلة وراثياً التي تتغذى على نظام غذائي غربي، يمكن لنموذج القسطرة البالونية أن يساعد في الإجابة على أسئلة رئيسية في مجال التضيق. يُستخدم نموذج الفأر المتحول متماثل الزيجوت لـ upper E لدراسة الفزيولوجيا المرضية لتصلب الشرايين. وبالنسبة لنموذج فرط تنسج الغلالة الباطنة، يتم الحصول على فئران C 57 black six J تزن حوالي 25 grams.

يتم الإبقاء عليها تحت ظروف طبيعية مع نظام غذائي عادي. بعد تخدير الفأر باستخدام 2%isof fluorine، تُقص شعيرات البطن، ويُعطى carprofen عن طريق الحقن تحت الجلد لتسكين الألم. بعد ذلك، وبشكل تبادلي، يتم تعقيم الجلد باستخدام Provo iodine و 80%ethanol على دورتين.

تحقق الآن من غياب المنعكسات باستخدام قرصة لإصبع القدم. ابدأ الجراحة بفصل الجلد والعضلات على طول الخط الأبيض. بعد ذلك، قم بلف الأمعاء في قفاز مبلل بالمحلول الملحي، ثم قم بإزالة الأنسجة الدهنية بعناية لكشف الشريان الأبهر البطني.

قم الآن بكشف الشريان الأبهر تحت الكلوي وصولاً إلى تفرعه، مع الحرص على عدم إصابة أي من الأوعية الفرعية. ثم قم الآن بوضع ملقط على الشريان الأبهر.

أولاً، ضع مشبكاً للجراحة المجهرية على الشريان الأورطي تحت الكلوي من الجهة القريبة لوقف تدفق الدم. ثانياً، ضع مشبكاً ثانياً من الجهة البعيدة بجوار تفرع الشريان الأورطي. عند انقطاع تدفق الدم، قم بإجراء شق صغير في الشريان الأورطي بالقرب من المشبك القريب.

أدخل القسطرة باتجاه المشبك القاصي للشريان الأورطي لإحداث إصابة في البطانة الغشائية. قم بإزالة بطانة الشريان الأورطي عن طريق نفخ بالون القسطرة وسحب القسطرة بعناية وببطء في اتجاه المشبك الداني. كرر هذه المناورة مرتين، ليصبح إجمالي عدد مرات نفخ الشريان الأورطي ثلاث مرات.

الآن قم بإزالة القسطرة وإغلاق الشق الأبهر باستخدام غرز جارية من خيوط proline قياس 10. مع وجود الغرز في مكانها، افتح المشبك القاصي بعناية إذا كان هناك نزيف في موقع بضع الشريان الأبهر. أغلق المشبك مرة أخرى، وحدد موقع النزيف وأوقفه بغرز متقطعة إضافية.

عندما لا يكون هناك نزيف، افتح الملقط القريب ببطء. يجب أن يكون نبض الأبهر مرئياً في المنطقة البعيدة عن الشق. الآن قم بترتيب الأمعاء في C two.

بعد ذلك، أغلق جدار البطن بدءاً من الطبقة العضلية باستخدام ست غرز تجميلية متصلة (OTT) من البرولين. ثم أغلق الجلد بخمس غرز OTT وأعد الفأر إلى قفصه. وخلال الأيام الثلاثة الأولى بعد الجراحة، أضف الميترازول إلى مياه الشرب للسيطرة على الألم.

راقب الحيوان طوال فترة التعافي، والتي تستغرق حوالي 28 يوماً. وبالنسبة لنموذج تصلب الشرايين، أحضر فئراناً تفتقر إلى POE بعمر أربعة أسابيع. قم بإيواء هذه الفئران تحت ظروف قياسية مع اتباع نظام غذائي غربي عالي الدهون لمدة تتراوح من أربعة إلى ستة أشهر.

الحفاظ على هذا النظام الغذائي طوال فترة التجربة. قبل ست ساعات من حصاد الشريان الأورطي، يتم منع الوصول إلى الطعام. ثم يتم تحضير الفأر للجراحة كما هو موضح في القسم السابق.

ابدأ الجراحة بفتح الصدر. بعد ذلك، اقطع قمة القلب وقم بترويته تحت ضغط خفيف بـ 3 mL من 4%Paraform aldehyde عبر جذر الأبهر لتثبيت الأبهر. ثم حرر الأبهر من الجذر وصولاً إلى تفرعه.

حاول إزالة أكبر قدر ممكن من الأنسجة الدهنية. بعد ذلك، قم بقطع قوس الأبهر وتخزينه في 4%para formaldehyde. الآن، انقل القلب وشجرة الأبهر إلى طبق مبطن بالسيليكون يحتوي على PBS.

اقطع أحد طرفي الشجرة الأبهرية وثبتها على طبقة السيليكون باستخدام دبابيس دقيقة. افتح الأبهر طوليًا واترك أنسجة الأبهر في محلول PBS في درجة حرارة الغرفة لبضع دقائق. بعد ذلك، اشطف الأنسجة مرة واحدة باستخدام الإيثانول بتركيز 50% واغمرها في حمام من صبغة سودان.

ثالثاً، يُوضع محلول الصبغ لمدة 15 دقيقة تقريباً. بعد الصبغ، يُشطف النسيج بسرعة باستخدام ethanol بتركيز 50% لبضع ثوانٍ لإزالة فائض صبغة Sudan فقط؛ حيث إن الإفراط في الشطف سيؤدي إلى إزالة قدر كبير من الصبغة، ثم يُشطف النسيج فوراً بالماء المقطر ويتم الانتقال إلى التصوير. بالنسبة لنموذج فرط تنسج الغلالة العضلية الباطنية، تم استئصال الشرايين الأبهرية للفئران بعد إزالة الخلايا المبطنة، ثم غُمرت في البارافين وصُبغت بـ chrome. حُسبت نسب Im من خلال قياس سمك الغلالة الباطنية والغلالة المتوسطة في مقاطع صبغة tri chrome.

باستخدام التحليل الحاسوبي المتبوع بحساب النسبة، تم قياس أقصى سمك للويحة باعتباره أقصى سمك للطبقة الباطنة في اللمعة بواسطة برنامج Computer Morpho Tree. كما تم حساب النسبة المئوية لانسداد اللمعة كنسبة بين اللمعة الداخلية الجديدة واللمعة السابقة. وحُسبت مساحة اللويحة بطرح اللمعة الداخلية الجديدة من اللمعة السابقة.

أُجريت التحليلات ذاتها على مقاطع عرضية مصبوغة بصبغة التراي كروم (tri chrome) لنموذج تصلب الشرايين عند الصمام الأبهري، والقوس الأبهري، والشريان الأبهري النازل لنموذج تصلب الشرايين فقط. فُتح الشريان الأبهري النازل طولياً وصُبغ بصبغة سودان الأحمر (Sudan red). وقِيسَت مساحة اللويحات ومساحة الشريان الأبهري الإجمالية بمساعدة الكمبيوتر لتحليل كلا النموذجين.

يمكن إجراء طرق أخرى مثل التشريح المرضي النسيجي ومجهر الفلورة المناعية البؤري للإجابة على تساؤلات مثل استئصال التجويف، والشكل المورفولوجي، والكثافة الخلوية. شكراً لكم على المشاهدة وتمنياتنا لكم بالتوفيق في تجاربكم.