نموذج التعلم Lateralized الرائحة في الفئران حديثي الولادة لتشريح الدارات العصبية تعزيزالأساس تشكيل الذاكرة

يقدم هذا البروتوكول تعلم تفضيل الرائحة المبكر الجانبي في الفئران باستخدام انسداد حاد واحد. يتم تحقيق ذلك عن طريق إنشاء سدادات أنف من البولي إيثيلين قابلة للإزالة. الخطوة الثانية هي حجب برج الحمل المطلوب قبل التدريب السلوكي.

بعد ذلك ، قم بإعداد الفراش المعطر ثم قم بتدريب على الفراش المعطر أثناء التمسيد بفرشاة الرسم. الخطوة الأخيرة هي اختبار تفضيل الرائحة الجانبية باستخدام جهاز اختبار ثنائي الخيار. في النهاية ، يتم استخدام الكيمياء النسيجية المناعية لبروتين ربط عنصر استجابة C amp الفسفوري أو سرير P لإثبات إسكات أحادي الجانب للنشاط العصبي بسبب العزلة الفردية وانعكاس الطريقة.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية الموجودة بين طرق مكافحة هي أننا قادرون على تقليل التباين وأعداد من خلال طبيعة تصميمنا التجريبي للتحكم داخل قبل طبقة ما بعد الولادة 11 ، بسبب عدم وجود إسقاطات MA الأمامية الناضجة ، والتي لا ترتبط نصفي الكرة الأرضية. هذا يسمح لنا بمعالجة نصف الكرة الأرضية بشكل مستقل عن الآخر من خلال انسداد التغذية الفردي. يعمل نصفي الكرة الأرضية المسدودين كعنصر تحكم داخل.

على الرغم من أن هذه التقنية تركز على التعلم الشمي في الفئران حديثي الولادة ، إلا أن الآثار المترتبة عليها ستسمح لنا بالإجابة على الأسئلة الأساسية المتعلقة بالعمليات العصبية أثناء التعلم والذاكرة ، مثل اللدونة المشبكية ، واللدونة المستنقعة ، والآليات الجزيئية الداعمة لها. يمكن تعميم الاستنتاجات المستخلصة من الدراسات التي تستخدم هذه الطريقة على المبادئ الأساسية للتعلم والذاكرة والثدييات ، خاصة خلال الفترات الحرجة بعد الولادة. سيساعدنا هذا على بناء خلفية واعدة للعلاجات المحتملة لفقدان الذاكرة المرتبطة بالحالات الفيزيولوجية المرضية.

هذه الطريقة مناسبة أيضا للعمليات الأخرى المتعلقة بحاسة الشم مثل إدراك الرائحة وطلاء الرائحة. تم تصنيع سدادة الأنف من أنابيب البولي إيثيلين 20 وثلاثة خيوط خياطة حريرية صفرية. أولا ، قم بقطع قطعة صغيرة من البولي إيثيلين من 22 إلى حوالي 0.8 سم.

ثم قم بربط خياطة الحرير من خلال الأنبوب المحضر بحيث يكون هناك خيط على جانبي قسم الأنبوب. على أحد طرفي الخيط خارج القابس ، اربط عقدة. اسحب قسم الأنبوب لأسفل فوق العقدة الموجودة في الخيط.

يجب أن تستقر العقدة داخل الأنبوب. قم بقص طرفي الخيط ، بحيث يبرز حوالي ملليمترين من الخيط من أحد طرفي الأنبوب. لبدء هذا الإجراء ، أخرج الجرو من السد وضعه في طبق آمن مغطى بفراش عادي.

باستخدام قضيب طرف قطني ، ضعي هلام مخدر موضعي ، 2٪ زيلوكائين على برج الحمل ليتم إغلاقه. دع الجرو يرتاح في الطبق لمدة ثلاث دقائق. لوسين في الجرو هو الخطوة الأكثر أهمية في هذا الإجراء.

يجب أن يؤخذ العلاج أثناء إدخال سدادة الأنف لمنع النزيف وتلف الأنسجة. بعد ذلك ، التقط الجرو وامسكه برفق ولكن بأمان في اليد غير المهيمنة باليد المهيمنة ، والتقط أنفا ، وقم بتوصيل نفس هلام التخدير الموضعي وربت عليه حول الطرف الذي لا يبرز منه الخيط. سيكون هذا بمثابة مخدر لأي ألم بسيط مرتبط بإدخال السدادة ومواد تشحيم داخل NES.

أدخل سدادة الأنف برفق عن طريق إمساك الجرو بإحكام وتدوير القابس ببطء بدفعات لطيفة جدا حتى يتم إدخال القابس بالكامل ويبرز الخيط المليمترين فقط من برج الحمل. يجب ألا يكون هناك نزيف من أي من برج الحمل أثناء هذه العملية. لا يمكن استخدام الجراء المصابة بالنزيف أثناء إدخال سدادة الأنف للتجربة.

اسمح للحيوان بالراحة في الطبق لمدة خمس دقائق من أجل التعود على القابس قبل البدء في التدريب لمنع تلوث الرائحة ، قم بإعداد الفراش المعطر في غطاء الدخان وأثناء ارتداء قفازات جديدة ، ضع 500 مل من الفراش المصنوع من رقائق الخشب في كيس بلاستيكي. استخدم حقنة لسحب 0.3 مل من مستخلص النعناع ورشها على الفراش في الكيس البلاستيكي. اربط الكيس مغلقا ، ورج الكيس بقوة واترك الفراش يرتاح في الكيس لمدة خمس دقائق ، ضع الفراش المعطر في صندوق تدريب أكريليك ضحل شفاف 20 × 20 × خمسة سنتيمترات مكشوف في غطاء الدخان لمدة خمس دقائق قبل الاستخدام.

بمجرد تحضير الفراش ، تخلص من القفازات المستخدمة. لا تسمح للقفازات بالتلامس مع. ضع 500 مل من الفراش غير المعطر في صندوق تدريب أكريليك نظيف آخر وتأكد من عدم ملامسته كفراش معطر أو قفازات مستعملة.

ابدأ نموذج تكييف الرائحة بوضع الجرو المعتاد على الفراش المعطر للحصول على رائحة تجريبية. بالإضافة إلى السكتة الدماغية OS الإيجابية الجراء السكتة الدماغية الجرو لمدة 30 ثانية.

باستخدام فرشاة رسم صغيرة ، استخدم حركات دائرية سريعة بشكل أساسي حول المنطقة الخلفية من الجرو. يؤدي التمسيد إلى إطلاق النورادرينالين إلى البصلة الشمية والقشرة الشمية. هذا بمثابة حافز غير مشروط.

دع الجرو يرتاح لمدة 30 ثانية. كرر التمسيد لمدة 30 ثانية ، متبوعا ب 30 ثانية من الراحة لمدة 10 دقائق. عند اكتمال 10 أزواج من التمسيد بالإضافة إلى الرائحة ، أخرج الجرو من صندوق التكييف.

قم بإزالة سدادة الأنف ، وأعد الجرو إلى السد للتحكم. رائحة فقط الجراء السلبية لنظام التشغيل. ضع الجرو المعتاد على الفراش المعطر لمدة 10 دقائق دون أي تمسيد.

بعد 10 دقائق ، أخرج الجرو من صندوق التكييف. قم بإزالة سدادة الأنف وأعد الجرو إلى السد. يتم إجراء اختبار تفضيل الرائحة الجانبية في نقاط زمنية مختلفة بعد جلسة التدريب النهائية.

يتم إجراء الاختبار في غرفة اختبار من الفولاذ المقاوم للصدأ مقاس 30 × 20 × 18 سم توضع فوق صندوقين للتدريب من الأكريليك مفصولين بمنطقة محايدة بحجم سنتيمترين. يحتوي أحد صناديق التدريب على فراش معطر بينما يحتوي الصندوق الآخر على فراش نظيف غير معطر. قم بإعداد فراش واحد برائحة النعناع وفراش واحد غير معطر كما هو موضح سابقا ، وضع كل صندوق تحت الجانبين المتقابلين من غرفة الاختبار.

بعد سنتيمترين. ضع الشبكة البلاستيكية على أرضية الشبكة المعدنية لغرفة الاختبار. قم بإزالة P من السد وضع قطعة صلبة من شحم السيليكون عديم الرائحة على برج الحمل المسدود.

أثناء التدريب ، يمكن إعادة تطبيق الشحوم خلال إجراء الاختبار الأول حسب الحاجة. ضع الجرو في المنطقة المحايدة لغرفة الاختبار. اسمح للجرو باستكشاف الغرفة لمدة دقيقة واحدة لتسجيل المدة التي قضاها الجرو على جانبي الغرفة ، أي على النعناع أو الفراش المعطر بشكل محايد.

انقل الجرو إلى غرفة تخزين بلاستيكية مغطاة واتركه يرتاح لمدة دقيقة واحدة. كرر تجارب الاختبار لمدة 10 دقائق ، مع تبديل الاتجاه الأولي للجرو في الغرفة من أجل التحكم في تفضيلات الاتجاه. مباشرة بعد الاختبار ، امسح الشحوم من برج الحمل.

أدخل سدادة أنف من البولي إيثيلين في برج الحمل المقابل ، باتباع نفس إجراء عزل RY الموضح سابقا ، واترك يرتاح لمدة 10 دقائق. بعد ذلك ، يتم إجراء اختبار تفضيل الرائحة الجانبية على الجرو. مرة أخرى. عند الانتهاء من الاختبار ، قم بإزالة القابس وأعد الجرو إلى السد.

العزلة الضيقة الفردية أثناء التدريب على الرائحة بالإضافة إلى التمسيد إلى ذاكرة رائحة جانبية تقتصر على الهنود المقيمين الذين تم إنقاذهم. عندما يتم اختبار الجراء بحثا عن تفضيل الرائحة بنفس المنعزلة كما هو الحال أثناء التدريب ، فإنها تظهر تفضيلا للرائحة المكيفة. لم يلاحظ هذا عندما تم إجراء الاختبار مع المعزول المعاكس.

في المقابل ، لا تظهر مجموعات التحكم في الرائحة فقط تفضيل الرائحة بغض النظر عن الرائحة المسدودة. أثناء الاختبار ، ينتج عن تدريب الرائحة الجانبية التنشيط الجانبي للنظام الشمي أثناء التعرض للرائحة ، وأظهرت الكيمياء المناعية للبصلة الشمية أو OB والقشرة الكمثرية الأمامية أو الكمبيوتر الشخصي أقل بكثير من الفسفورة في نصف الكرة الأرضية المغلق بعد التعرض للرائحة مقارنة بنصف الكرة الأرضية المقابل. يوضح تلطيخ نيسيل أجساما خلوية مماثلة في طبقة الخلية التاجية في OB وفي طبقة الخلية الهرمية للكمبيوتر الشخصي في نصفي الكرة الأرضية.

بعد 24 ساعة من إزالة سدادة الأنف تعبير سلطعون البازلاء بعد التعرض للرائحة في الخلايا التاجية للOB والخلايا الهرمية في الكمبيوتر الشخصي قابلة للمقارنة بين نصفي الكرة الأرضية المسدودة والمحفوظة. يشير هذا إلى أن تأثير عزلة تجربة واحدة عابر وقابل للعكس ولا يؤدي إلى تلف عصبي مرئي طويل الأمد يمكن أن يؤثر على إدراك الرائحة وتنشيط الخلايا العصبية للروائح أثناء الاختبار. بمجرد إتقان ، يمكن إجراء انسداد NA في أقل من خمس دقائق إذا تم إجراؤه بشكل صحيح.

أثناء محاولة هذا الإجراء ، من المهم توخي الحذر الشديد عند سد فتحة الأنف. يمكن أن تسبب أي قوة مفرطة أو تقنية غير مناسبة نزيفا وبالتالي تلف فتحة الأنف بعد هذا الإجراء. يمكن استخدام طرق أخرى مثل الفيزيولوجيا الكهربية خارج الجسم الحي والتقنيات الجزيئية للإجابة على أسئلة إضافية تتعلق باللدونة المتشابكة.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استخدام الانسدادات الضيقة المؤقتة من جانب واحد من أجل إضفاء الطابع الجانبي على تعلم الرائحة وتشريح الدوائر العصبية التي تقوم عليها تكوين الذاكرة.