يناير 17, 2016
الهدف العام لطريقة Rotifer Polyculture هو تسخير الإنتاجية الطبيعية والخصائص البيولوجية لأسماك المياه المالحة لخلق بيئة تعزز النمو السريع ، وأقصى قدر من البقاء على قيد الحياة ليرقات الزرد التي تتغذى أولا. الميزة الأساسية لهذه التقنية هي أنها تقلل بشكل كبير من مقدار الوقت والمساحة اللازمين لتربية أعداد كبيرة من يرقات الزرد بنجاح لاستخدامها في التجارب البحثية. ابدأ صيانة استزراع الروتيفر عن طريق ملء وعاء استزراع التغذية ، أو FCV ، إلى سعة 90 في المائة بمياه عذبة نظيفة منزوعة الكلور بجرعات 10 جرامات لكل لتر من أملاح أحواض السمك.
تأكد من خلط الماء جيدا وأن كل الملح قد تم إذابته تماما. ثم اضبط تدفق الهواء في الوعاء بحيث يحافظ على درجة الغليان. قم بقياس ملوحة السائل باستخدام مقياس الانكسار.
بعد ذلك ، قم بأخذ عينات من الروتيفر في وعاء الاستزراع ، أو CV ، تأكد من خلط المزرعة جيدا. بعد ذلك، اجمع ثلاث عينات من اثنين إلى ثلاثة مليلتر باستخدام ماصة نقل من أجزاء مختلفة من المزرعة وقم بدمج العينات في أنبوب. انقل ملليلترا إلى ملليلترين من العينة المدمجة إلى طبق بتري.
تصور العينة تحت مجهر تشريح ، وتحقق من جودة الثقافة. أضف 100 ميكرولتر من محلول اليود 50 في المائة من Lugol إلى العينة لشل حركة الروتيفر وعدها. خذ على الفور عينة فرعية سعة ملليلتر باستخدام ماصة بلاستيكية وقم بتوزيع مليلتر واحد في شريحة عد Sedgewick Rafter.
باستخدام مجهر التشريح ، احسب مساحة الشريحة حسب الضرورة لحساب ما يصل إلى 100 روتيفر سليم والعدد الإجمالي للبيضات المرتبطة بالروتيفر. ثم احسب عدد الروتيفر لكل مليلتر لاستخدامه لاحقا. ابدأ الحصاد عن طريق إزالة إمداد الهواء ومرشح الخيط.
افتح الصمام الموجود أسفل السيرة الذاتية ببطء واترك الماء يتدفق برفق إلى مجمع العوالق بشاشة شبكية 53 ميكرون. اجمع المياه المتدفقة من قاع المجمع بعد التصفية في دلو أو تصريفها. بعد ذلك ، املأ زجاجة ب 10 إلى 15 جراما لكل لتر من الماء المالح النظيف.
اقلب الشاشة فوق FCV واغسل الدوارات في FCV بتيار لطيف من الماء المالح. ابدأ مؤقت القياس القابل للبرمجة أو PMT لتوصيل التغذية إلى FCV. بعد ذلك ، افرك الجزء الداخلي بالكامل من السيرة الذاتية باستخدام وسادة فرك نظيفة.
قم بإنشاء مزيج جديد سعة 15 جراما لكل لتر في دلو سعة خمسة جالون لتعويض حجم الماء المفقود أثناء الحصاد. قلب المحلول بقوة حتى يذوب الخليط تماما. ثم أضف المحلول إلى السيرة الذاتية.بعد ذلك ، اشطف مرشح الخيط برذاذ عالي الضغط.
عندما يكون مرشح الخيط خاليا من الحطام ، قم بإعادته إلى السيرة الذاتية.اضبط معدلات تغذية الطحالب التي يتم تسليمها إلى السيرة الذاتية عن طريق تغيير مدة كل حدث جرعة. بعد 24 ساعة ، كرر العملية ، وابدأ حصاد الروتيفر المتبقي في FCV. ركز الروتيفر في لترين من الماء العذب والنظيف منزوع الكلور مع خمسة جرامات لكل لتر من الملح.
يمكن تخزينها عند أربع درجات مئوية كإمداد احتياطي ، أو استخدامها لإطعام مراحل لاحقة من الأسماك بما يتجاوز ما هو موصوف في هذا البروتوكول. اجمع أجنة الزرد من حدث التفريخ عن طريق صب الأجنة المتولدة من خلال مصفاة الشاي. وبعد ذلك ، شطف بلطف بماء السمك المعقم من زجاجة غسيل في أطباق بتري.
بمجرد جمع جميع الأجنة ، احتضنها. ابدأ مرحلة الزراعة المتعددة عندما يسبح أكثر من 90 في المائة من اليرقات المفرغة بنشاط في عمود الماء. أضف 500 مل من ثقافة الروتيفر مباشرة من FCV إلى خزان حضانة سعة 3.5 لتر.
بعد ذلك ، اسكب اليرقات برفق من طبق بتري واحد في خزان الحضانة. تأكد من عدم بقاء اليرقات في الطبق. أضف 500 مل من مياه السمك النظيفة والمكيفة من مصدر مياه مخصص إلى الخزان إلى الحجم النهائي البالغ لتر واحد ، و 5 غرامات لكل لتر من الملوحة النهائية.
يجب مراقبة حوض الاستزراع المتعدد مرة واحدة على الأقل يوميا للتأكد من وجود الروتيفر والأسماك ونموها. تأكد من أن الدوارات مرئية في جميع أنحاء عمود الماء. تأكد من أن الأسماك مرئية أيضا داخل عمود الماء وأنها تسبح بين الدوارات.
من الأهمية بمكان تقييم حالة كل خزان على أساس يومي للتأكد من أنها على قيد الحياة وتسبح مع الروتيفر المتاحة لجميع يرقات الأسماك. عند التأمين على نمو الروتيفر والأسماك ، ابدأ التدفق الطبيعي للمياه عبر الخزان. أخيرا ، ضع حاجزا فوق منفذ التصريف للتأكد من عدم إخراج اليرقات من الخزان.
تمت مراقبة الأداء النموذجي للاستزراع الروتيفر على مدى 30 يوما ، وأسفرت عن متوسط كثافة مزرعة 932 روتيفر لكل مليلتر. وبحد أقصى 1 ، 330 روتيفر لكل مليلتر. يبلغ متوسط كثافة الروتيفر في حوض الاستزراع متعدد الزرد 589.4 روتيفر لكل مليلتر.
الحد الأدنى لقيمة 481 روتيفر لكل مليلتر أفضل ب 10 مرات من العمل المنشور سابقا. أظهرت أسماك الزرد نموا مطردا كل يوم خلال فترة الخمسة أيام من متوسط طول إجمالي يبلغ 3.9 ملم إلى 5.4 ملم. بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية استزراع الروتيفر لاستخدامه في نظام الاستزراع متعدد الأشكال الذي تم تصميمه لتلبية المتطلبات الغذائية لأسماك الزرد التي تتغذى أولا.
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية
تعتمد طريقة الزراعة المختلطة للروتيفير على استخدام روتيفير المياه المالحة لتعزيز نمو وبقاء يرقات سمك الزيبرا في مرحلة التغذية الأولى. وتساهم هذه التقنية في تقليل الموارد اللازمة لتربية كميات كبيرة من يرقات سمك الزيبرا لأغراض البحث العلمي بشكل كبير.
تعد التربية الفعالة لأسماك الزيبرا (zebrafish) في مرحلة التغذية الأولى أمراً بالغ الأهمية للفحص عالي الإنتاجية في الجسم الحي (in vivo) والتحقق من الأهداف في المراحل المبكرة ضمن عمليات البحث والتطوير في مجال الأدوية الحيوية. تتيح طريقة الزراعة المختلطة للروتيفير (Rotifer Polyculture Method) إنتاجاً قابلاً للتوسع والتكرار ليرقات أسماك الزيبرا السليمة، مما يدعم نشر أنظمة نماذج قوية لسير عمل الاكتشاف والدراسات قبل السريرية. ويقلل هذا النهج من قيود الموارد ويعزز الموثوقية التجريبية عبر البرامج المحفظية التي تستخدم أسماك الزيبرا كنظام ذي صلة بالأمراض.
تتكامل هذه الطريقة عند الواجهة الفاصلة بين مرحلتي الاكتشاف المبكر وتحديد المركبات الرائدة، مما يوفر إمداداً موثوقاً من يرقات zebrafish لإجراء عمليات الفحص اللاحقة والدراسات الميكانيكية.