التقديم ثلاثي الأبعاد وتحليل إيمونولابيليد، أوضح البشري شبكات الأوعية الدموية فيلوس المشيمية

الهدف العام من هذا الإجراء هو إنشاء عروض ثلاثية الأبعاد لشظايا الأشجار الزغابية المشيمية المناسبة لتحليل شبكات الأوعية الدموية الموجودة فيها. يمكن أن تساعدنا هذه الطريقة في الإجابة على الأسئلة الرئيسية في مجالنا ، مثل سبب تقييد نمو الطفل أو ما هو الإجهاد ومدى شدة التوتر الذي قد يؤدي إلى الولادة المبكرة. الميزة الرئيسية لإجراءنا هي أننا الآن في وضع يسمح لنا بتسمية مناعية لأنسجة الأشجار الزغابية المشيمية ثم تصور شبكات الأوعية الدموية الخاصة بهم واستخدام تلك التصورات لتوصيف وتحليل شبكات الأوعية الدموية هذه.

يمكن أن تمتد الآثار المترتبة على هذه التقنية إلى العديد من التشخيصات والعلاجات لأن معظم علوم الحياة تعتمد على التوصيف النسيجي ثنائي الأبعاد. ستظهر الإجراء السيدة فاليري شوينك التي ستقوم بوضع العلامات المناعية وإزالة أنسجة المشيمة ، ثم سيقوم السيد فيليب نيكيز بتشريح أنسجة المشيمة والقيام أيضا بالتطهير العكسي للأنسجة. للتحضير لتشريح شجرة الزغب ، اشطف أولا أنسجة المشيمة الرسمية والثابتة بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات.

ثم ضعه في طبق بتري على مسرح مجهر التشريح. لتحديد موقع الشجرة الزغبية ، استخدم المشرط والملقط الناعم لتمزيق أنسجة المشيمة. بعد ذلك ، قم بتشريح قطع من الشجرة الزغبية التي يبلغ طولها حوالي خمسة ملليمترات ونقلها إلى أنبوب دقيق يحتوي على مليلتر واحد من محلول ملحي مخزن بالفوسفات.

استبدل المحلول الملحي المخزن بالفوسفات بملح جديد وانتظر لمدة 10 دقائق مع الدوران العرضي. بعد ذلك ، استبدل المحلول الملحي المخزن بالفوسفات بمخزن مؤقت نفاذي لاختراق الأنسجة ومنع الارتباط غير المحدد للأجسام المضادة الثانوية. ثم احتضن لمدة 30 دقيقة.

بعد ذلك ، استبدل المخزن المؤقت المتنفذ بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات يحتوي على اثنين بالمائة من مصل الماعز بمضاد أحادي النسيلة للفأر CD31 والأرانب المضاد ل CK7. اترك الأنسجة عند أربع درجات مئوية طوال الليل. في اليوم التالي ، قم بإزالة الأجسام المضادة المتبقية بغسلات إضافية بمحلول ملحي مخزن بالفوسفات مع مصل الماعز بنسبة 2 بالمائة.

بعد ذلك ، قم بإزالة المحلول الملحي المخزن بالفوسفات مع مصل الماعز بنسبة اثنين بالمائة وأضف نفس المخزن المؤقت ، مع استكمال الغلوبولين المناعي G المضاد للفأر للماعز إلى جانب فلوروفور أخضر والغلوبولين المناعي المضاد للأرانب G إلى جانب فلوروفور الأشعة تحت الحمراء. احتضن لمدة 30 دقيقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة. بعد ذلك ، اغسل المنديل مرة واحدة باستخدام PBS-GS وقم بتخزين الأنسجة الملصقة في الظلام في درجة حرارة الغرفة حتى يتم تطهيرها.

اغسل العينات ثلاث مرات باستخدام PBS كل 10 دقائق. لتجفيف الأنسجة ، قم بإزالة المحلول الملحي المخزن بالفوسفات وأضف 50٪ من الإيثانول إلى الأنسجة واحتضانه لمدة 10 دقائق. بعد الحضانة ، تخلص من الإيثانول ثم اغسلها ثلاث مرات بنسبة 70٪ من الإيثانول على فترات 10 دقائق متبوعة بثلاث غسلات بنسبة 100٪ من الإيثانول كل 15 دقيقة.

بعد ذلك ، استخدم ملقطا ناعما لنقل الأنسجة إلى أنبوب دقيق مملوء بملليلتر واحد من المحلول لمدة أربع ساعات. بعد أربع ساعات ، انقل الأنسجة إلى أنبوب دقيق مملوء بالمحلول الثاني واحتضانه لمدة أربع ساعات أخرى. لتركيب الأنسجة في غرفة سايكس مور ، استخدم ملقطا ناعما لوضع زلة غطاء دائرية مقاس 25 ملم على قاعدة الغرفة.

مرة أخرى ، استخدم الملقط ذو الرؤوس الدقيقة لوضع حشية مطاطية في القاعدة على زلة الغطاء. قم بإزالة المنديل المغمور في المحلول الثاني وضعه في منتصف زلة الغطاء. ثم أضف قطرة من المحلول اثنين ، حوالي 40 ميكرولتر ، على الأنسجة.

ثم خذ زلة غطاء ثانية وضعها فوق الحشية. بعد ذلك ، قم بضغط زلة الغطاء والحشية بإحكام عن طريق ربط حلقة قفل في الجزء العلوي من القاعدة. بعد ذلك ، أدخل إبرة قياس 25 من خلال الحشية في المنفذ الموجود على القاعدة.

بعد ذلك ، املأ حقنة سعة ثلاثة ملليلتر بنقطة واحدة وخمسة ملليلتر من المحلول الثاني. بعد ذلك ، قم بتركيب إبرة قياس 25 على المحقنة وأدخل الإبرة في المنفذ المقابل من خلال الحشية. بعد ذلك ، ابدأ في حقن الغرفة بالمحلول الثاني وتأكد من أن الهواء داخل الغرفة ينفث من خلال إبرة قياس 25 الأخرى.

عندما تمتلئ الغرفة ، قم بإزالة الإبرة والحقنة وضع حامل غرفة سايكس مور على مرحلة المجهر متحد البؤر. استخدم هدفا 10X لتركيز الأنسجة الموضوعة على الغرفة. بعد ذلك ، قم بتعيين نقطة مرجعية للمرحلة وحرك مرحلة المجهر لأعلى ولأسفل عبر المستوى البؤري لتحديد وضبط الجزء العلوي والسفلي من الأنسجة.

اضبط حجم الخطوة على نقطتين وخمسة ميكرومترات واجمع ملف صورة متحد البؤر يحتوي على مجموعة من صور الأنسجة من أعلى إلى أسفل. بعد ذلك ، انقل الأنسجة إلى أنبوب دقيق يحتوي على أكثر من 20 ضعف حجم 100٪ من الإيثانول لعكس التطهير. ثم ، بعد كل ساعة واحدة ، استبدل ب 70 والتالي ب 50٪ من الإيثانول وأخيرا محلول ملحي مخزن بالفوسفات.

يحفظ على حرارة أربع درجات مئوية في الظلام حتى يتضمن. هنا ، لإظهار شبكة الأوعية الدموية المشيمية ، تم الحصول على صور مجهرية ومتحدة البؤر للمشيمة البشرية. تظهر هذه الصور المجهرية للمشيمة الشجرة الزغبية المشعة التي اخترقت حمة المشيمة.

تظهر هذه الصور المجهرية وجود جزء بعيد من قطع الأشجار الزغبية تنتهي في مجموعة الزغابات. بعد ذلك ، لإظهار طبقة الأرومة الغاذية من الزغابات ، تم تسمية الجزء البعيد من شجرة الزغب بالمناعة. في الصورة ، تظهر طبقة الأرومة الغاذية الخارجية باللون الأخضر وتظهر الشعيرات الدموية باللون الأحمر.

بعد ذلك ، لفحص أنسجة المشيمة قبل وبعد مسح الصور متحد البؤر لأنسجة المشيمة غير المقاصة والنظيفة. تظهر الصور أنه بالنسبة للأنسجة غير المطهرة ، يمكن التقاط التألق المناعي على عمق 100 ميكرومتر أو أقل من الأنسجة. على العكس من ذلك ، يمكن التقاط التألق المناعي لأنسجة المشيمة التي تم تطهيرها على عمق أعلى بكثير.

علاوة على ذلك ، لمقارنة الأنسجة التقليدية بالأقسام الشفافة المعكوسة ، تم تجفيف الأنسجة التي تم تطهيرها في عملية عكسية مع الإيثانول. يظهر التلوين الكيميائي المناعي لأنسجة المشيمة بمضاد CK7 قبل وبعد التطهير عدم وجود تغيير كبير في مورفولوجيا الأنسجة بسبب التطهير. تظهر الرسوم المتحركة أن الأنسجة الزغابية الملطخة بالمناعة موزعة على طول عمق حجم الأنسجة بالكامل.

بمجرد أن تشعر بالراحة في إجراء العملية ، يمكنك توقع أن يستغرق حوالي 18 ساعة ، مقسمة على ثلاثة أيام. عند محاولة القيام بهذا الإجراء ، من المهم أن تتذكر أنه يتطلب عدة مجموعات مهارات مختلفة. يحتاج المرء إلى أن يكون قادرا على القيام بأمراض المشيمة والفحص المجهري متحد البؤر.

يجب أن تكون قادرا على إنشاء عروض ثلاثية الأبعاد للتصوير ، ويجب أن تكون قادرا على أن تكون على دراية بالمعالجة المناعية وتحليلها. باتباع هذا الإجراء ، يمكن إجراء طرق أخرى مثل علم الأنسجة التقليدي أو صفحة STS أو maldi. مع تطورها ، تمهد هذه التقنية الطريق في مجال طب الأم والجنين وطب حديثي الولادة وبيولوجيا الأرومة الغاذية لاستكشاف الأسباب الجذرية الكامنة وراء تسمم الحمل وضعف نمو الجنين وضيق الجنين.

بعد مشاهدة هذا الفيديو ، يجب أن يكون لديك فهم جيد لكيفية تنظيف أنسجة الأشجار الزغابية المشيمية وعرضها وتحليلها. شكرا جزيلا لمشاهدة الفيديو ونتمنى لك التوفيق في تجاربك.