استئصال الورم المشتق من المريض كمنصة "حية" قبل السريرية للتنبؤ بمقاومة الأدوية لدى المرضى

النباتات المشتقة من المريض هي طريقة قصيرة الأجل توفر بيانات الاستجابة الفورية للأدوية التي يمكن أن تتنبأ بدقة بنتائج المرضى. تسمح منصات PD بفحص استجابات الأدوية في سياق ثلاثي الأبعاد يعكس السمات المرضية والمعمارية للأورام الإقليمية قدر الإمكان. لدى Explants القدرة على تقديم رؤى جديدة في عملية التمثيل الغذائي وآلية عمل الدواء وتسهيل تحديد المؤشرات الحيوية الدوائية الجديدة.

قبل بدء التجربة، تنظيف جميع المعدات الجراحية مع 70٪ من محلول المشروبات الروحية الميثيلية الصناعية. ملء طبق ثقافة 10 سم مع 25 ملليلتر من المتوسط الطازج على الجليد. باستخدام ملاقط، نقل العينة على سطح شمع الأسنان واستخدام اثنين من شفرات الكسب غير المشروع الجلد لشريحة الأنسجة إلى شظايا من ما يقرب من 2-3 ملليمترات مكعبة.

نقل explants في طبق 10 سم ووضع ست إلى تسع قطع من الأنسجة في أنبوب ملليلتر واحد يحتوي على 10٪ غير العازلة حل الفورمالاتين لاحتضان 24 ساعة في درجة حرارة الغرفة. ملء العدد المطلوب من الآبار من لوحة بئر ستة مع 1.5 ملليلتر من المتوسطة الطازجة لكل بئر. ووضع ثقافة organotypic إدراج طبق في كل بئر بحيث يطفو على رأس المتوسطة.

ضع ستة إلى تسعة نباتات خارجية على كل قرص إدراج وتخزينها لاحتضان 16 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون بنسبة 5٪ للسماح بالتعافي. في اليوم التالي، إضافة متوسطة جديدة والمخدرات إلى كل بئر من لوحة جديدة. تضمين بئر للتحكم في السيارة.

عندما يتم إعداد جميع العلاجات الدوائية، استخدم الملاقط لنقل إدخال واحد إلى كل بئر من لوحة البئر الستة الجديدة لاحتضان 24 إلى 48 ساعة في حاضنة ثاني أكسيد الكربون. بعد العلاج من المخدرات، نقل الأقراص إلى ست لوحات بئر جديدة تحتوي على 10٪ الفورمالاتين. وإضافة بضع قطرات من 10٪ الفورمالين إلى الجزء العلوي من كل explant لضمان تغطية كاملة مع المثبت لمدة 24 ساعة من الحضانة في درجة حرارة الغرفة.

في اليوم التالي، نقع عدد مناسب من الإسفنج الأنسجة الصغيرة في محلول ميثيلات الصناعية 70٪. ووضع الإسفنج داخل أشرطة الأنسجة. عندما يتم وضع جميع الإسفنج، نقل جميع explants من نفس حالة العلاج من المخدرات على اسفنجة واحدة مع الجانب المعالج المخدرات من كل explant الاتصال القرص إدراجها.

وضع اسفنجة presoaked آخر على رأس كل explant وإغلاق كاسيت لتأمين explants في كاسيت. ثم غمر أشرطة في 70٪ المثيلة الصناعية الحل قبل الشروع في المعالجة النسيجية. بعد المسح الضوئي، قم بإجراء تحليل تدريبي وحمل عمليات المسح التي تحتوي على الطوابع للتدريب في برنامج التحليل المناسب.

في طريقة عرض وضع واحد، انتقل من خلال الصور وحدد عمليات المسح الضوئي لتحليل والمسح الضوئي مع مضان جوهري. مع المسح الضوئي المضان الجوهري على وجهة نظر واحدة ، انقر فوق منتقي autofluorescence لرسم جزء على مساحة من الأنسجة غير الملطخة. انقر فوق علامات تحرير والألوان وأدخل أسماء العلامات في المربع المقترن بكل فلوروفور.

انقر فوق إعداد الصور للسماح للبرنامج بطرح كثافة الفلورسينس الجوهري من جميع الصور التي تم تحميلها. انقر فوق خطوة أنسجة الشريحة أعلى الشاشة لفتح نافذة التدريب على تقسيم الأنسجة. في لوحة فئات الأنسجة، أدخل اسم كل فئة نسيج ليتم تقسيمها.

انقر فوق رسم، لرسم المناطق حول مجموعات من الخلايا في فئة الأنسجة ذات الاهتمام. ثم انتقل إلى فئة الأنسجة التالية ورسم مناطق جديدة. عندما يتم تحديد جميع مناطق التدريب، استخدم مقسم أنسجة القطار، وانتظر حتى تستقر دقة التدريب.

ربما إلى قيمة قريبة من 100٪ انقر فوق الجزء كله لتقسيم الأنسجة. بعد التحقق من جودة تجزئة الأنسجة، انقر فوق تقسيم الخلية وحدد المقصورات الخلوية لتقسيمها. لتكوين المكون النووي، استخدم شريط التمرير النموذجي للكثافة لضبط العتبة المستخدمة للكشف عن وحدات البكسل النووية.

يتم توفير الملاحظات المباشرة من خلال نافذة المعاينة. لتقسيم مجموعات من بكسل النووية، في لوحة تقسيم المكونات النووية، حدد الزر الذي يصف أفضل نوعية تلطيخ من النوى واستخدام شريط التمرير لضبط حساسية تقسيم. ثم انقر فوق مقطع الكل لتقسيم كافة الصور.

عندما يتم تقسيم جميع الصور، في لوحة الأنماط الظاهرية، أضف قائمة الأنماط الظاهرية ليتم اكتشافها وأدخل اسم الأنماط الظاهرية في مربع النص المقابل. انقر فوق تحرير الأنماط الظاهرية لتحديد خلية معينة وحدد النمط الظاهري المطابق في القائمة المنسدلة. بعد الانتهاء من اختيار للتدريب، انقر فوق المصنف القطار لتقييم نتيجة كل النمط الظاهري.

المضي قدما مع النمط الظاهري جميع، حفظ المشروع وانقر فوق التصدير. حدد علامة التبويب تحليل الدفعة ثم قم بتحميل المشروع في خوارزمية الدفعة أو مربع المشروع. لتصدير الصور والجداول، حدد كافة المربعات في خيارات التصدير، وانقر فوق إضافة شرائح وتحميل كافة الصور التي تحتوي على الطوابع للدفعات المعدة مسبقا.

ثم انقر فوق تشغيل إلى تحليل دفعة البدء من طابع واحد وتصدير البيانات المقابلة عندما تم الحصول عليها. التصوير متعدد الأطياف من الأنسجة EXPLANT NSCLC ملطخة لعلامات صلاحية الخلية، ويسمح لتحديد وphenotyping من مجموعات الخلايا الفردية، فضلا عن تحديد مكونات الورم والسترومال داخل البيئة المجهرية الورم explant. الأنسجة وتجزئة الخلايا من بقع علامة صلاحية الخلية صور متعددة الأطياف كما هو موضح، يمكن استخدامها لقياس موت الخلايا وانتشارها في explants المشتقة من المريض تعامل مع الأدوية ذات الأهمية.

على سبيل المثال، في هذا التحليل، في عينات الأنسجة من الأورام المعالجة مع نيفولوماب، تم تحديد عدد أكبر من الخلايا المحتضرة مقارنة بعينات الورم المعالجة للتحكم. وبالإضافة إلى ذلك، كما هو موضح، فإن القدرة على استخراج المعلومات المكانية من التشريح الملون، تسمح بحساب المسافات بين الخلايا. يمكن أيضا استخدام النباتات السابقة في التنميط المكاني الواسع النطاق أو القياس الخلوي الشامل ، والذي يسمح بتصنيف مئات المؤشرات الحيوية في وقت واحد بدقة فرعية مع الحفاظ على البنية ثلاثية الأبعاد للعينة.

يمكن أن تتنبأ أجهزة المساعدين الطبيين بفعالية العلاج المناعي. فعلى سبيل المثال، يمكن التمييز بين الحالات الحساسة أو المقاومة ومثبطات نقاط التفتيش المناعية والتحقيق في الآليات التي يقوم عليها هذا التمييز.