Chemical Cleavage DNA Sequencing

Chemical cleavage DNA sequencing uses specific chemicals to cut DNA at known sites. Allan Maxam and Walter Gilbert described this method in the same year that the Sanger sequencing method was discovered. It reads the DNA sequence by breaking purified DNA into fragments and then studying the fragment pattern.

在Maxam-Gilbert（化学裂解法）中，首先将模板DNA变性，并在5'端用磷-32进行放射性标记。 

测序反应在四个不同的反应管中进行，每个反应管中含有四种不同的化学物质，这些化学物质能够修饰DNA中的不同核苷酸。 

例如，甲酸仅攻击嘌呤类碱基，即腺嘌呤或鸟嘌呤，而肼仅攻击嘧啶类碱基——胞嘧啶或胸腺嘧啶。类似地，二甲基硫酸酯等化学试剂仅攻击单个核苷酸。

然后使用哌啶在修饰的碱基处切断DNA，产生不同长度的放射性标记DNA片段。

随后将四个反应在凝胶上平行电泳，并通过放射自显影进行可视化。通过从下至上读取放射自显影图像，即可 decipher 模板DNA的序列。