Surface-Only Imaging with TIRF Microscopy

Total internal reflection fluorescence microscopy, or TIRF, is a microscope method used to view fluorophores near a solid surface with a higher refractive index, such as a glass coverslip. It is useful when scientists want to study signals close to the cell surface.

TIRF works when light from a m...

全内反射荧光显微镜（TIRF）可选择性地对靠近高折射率固体表面（例如玻璃盖玻片）的样品中荧光分子进行成像。

激发激光束以临界角照射到盖玻片上，导致光束发生全内反射。

反射光不会进入样品，而是形成一个狭窄的电磁场或称作隐逝波，该波仅能激发距离细胞表面100至200纳米范围内的荧光分子。

由于渐逝波在深入样品时会迅速衰减，大多数背景荧光分子不会被激发。因此，靠近固体表面的少量荧光标记蛋白所形成的图像清晰而锐利。

TIRF 常用于活细胞成像，例如研究驱动蛋白（如驱动蛋白kinesin）在附着于盖玻片的微管上的运动。