Method Article

电生理方法记录从果蝇幼虫NMJ突触潜力

DOI:

10.3791/1109

⸱

February 6th, 2009

 , 
1Department of Physiology and Cellular Biophysics, Columbia University College of Physicians and Surgeons

In This Article

Summary

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在这里，我们描述了测量在果蝇幼虫神经肌肉接头处突触传递的电生理方法。发起人为诱发释放刺激运动神经元轴突，并通过NMJ传输，可在肌肉引起突触后反应测量。

Abstract

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在这个视频中，我们描述记录果蝇幼虫神经肌肉接头处（NMJ）突触传递的电生理方法。幼虫神经肌肉系统是一个模型突触，突触生理学和神经递质的研究，是一个有价值的研究工具，已定义遗传学和实验操作。幼虫可解剖体壁肌肉，中枢神经系统，以及末梢神经暴露。果蝇的肌肉和他们的神经支配模式是很好的特点，很容易和肌肉细胞内记录访问。单独的肌肉可以识别8腹节安排在A2段重复的模式，每30肌肉内的位置和方向 - A7。解剖果蝇幼虫薄和个人肌肉的运动神经元轴突束可以透可视化

Protocol

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在开始之前准备:

  • 流浪yhird龄果蝇幼虫
  • HL3.1（修改血淋巴样）解决方案
  • Sylgard（透明硅橡胶）夹层板准备在小（35 × 10毫米）的塑料培养皿使用布伦特和麦凯布（2008年）3描述的方法菜肴。
  • 削减夹层引脚短
  • 刺激电极移液器
  • 夏普录音移液器

HL3解决方案:

  1. 在解剖和电生理实验，幼虫都沉浸在HL3.1解决方案，其中包含（毫米）:70氯化钠，氯化钾，氯化镁2，10 4碳酸氢钠3，5海藻糖，115蔗糖，5 HEPES，pH值7.2。
  2. 氯化钙的浓度添加到HL3.1解决方案提供所需的细胞外Ca 2 +浓度。
    • 幼虫解剖是在低Ca 2 +浓度（以避免肌肉收缩）使用HL3.1 + 0.25毫米氯化钙2，放在冰上。
    • 电生理实验通常在HL3.1 + 1毫米氯化钙2，但是这可以从0.4调整- 1毫米的Ca 2 +的要求。
  3. HL3.1的解决办法是在使用前过滤消毒，并保存在4˚C。

刺激和记录的吸液管....

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Discussion

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这里所描述的方法提供了一个相对快速和广泛的方式来检测在NMJ突触功能的改变。执行，使用完整的动物体内电生理记录，并执行遗传或药理操作的能力，使果蝇神经递质的生理和遗传方面的调查的一个理想的动物模型。

由于肌肉细胞是非常大的的，有些人可能希望添加一个额外的步骤，为两个电极电压钳（TEVC）记录本议定书。这可以执行相同的幼虫准备在细胞内的电极，通过对细胞定位的电流通过电极。一旦细胞足够的电压钳位，可以记录当前的响应。

虽然肌肉6电录音中使用最常用的为7和12，肌肉也可以使用。

这里所描述的方法显示Drosophophila NMJ电 - 在1976年首次月和1月的技术要领，并从此成为突触生理学研究的模型系统。

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
小培养皿（35 x 10 mm）BD Biosciences1008
SYLGARD 182 有机硅弹性体套件Dow Corning3097366-1004
解剖显微镜Carl Zeiss， Inc.475002-9902
显微镜灯Schott AGKLI500
解剖针精细科学工具26002-10
pClamp 9 软件分子设备PCLAMP 9 标准
解剖剪刀：3mm Vannas 弹簧剪刀精细科学工具15000-0
Dumont SS 镊子精细科学工具11200-33
Dumont #5 镊子精细科学工具11252-20
薄壁硼硅酸盐玻璃毛细管，带细丝（1.0 毫米，4 英寸）World Precision Instruments， Inc.TW100F-4
硼硅酸盐玻璃毛细管，带细丝（1.2 mm，4 英寸）World Precision Instruments， Inc.1B120F-4
Sutter P-2000 激光微量移液器拉拔器 Sutter Instrument Co.P-2000
型移液器抛光机Narishige InternationalMF-83
Axon HS-2A 头部平台Molecular DevicesHS-2A
型显微作器Sutter Instrument Co.MP-85
Axoclamp 2B 放大器Molecular DevicesAXOCLAMP 2B
Clampex 软件Molecular Devicesv 8.2.0.235
迷你分析软件。v 6.0.3Synaptosoft
Brownlee 精密放大器Brownlee型号 410
NaClBaker/VWR4058-01
KClSigma-Aldrichp-9333
NaHCO3Sigma-Aldrichs6297-1kg
TrelahoseSigma-AldrichTO167
蔗糖费舍尔科学bp220-212
HEPESSigma-Aldrichh-3375
MgCl-6H2OSigma-Aldrichm2670-1kg
CaCl2Fisher Scientificc79-500
Master-8 脉冲发生器A.M.P.I
电生理振动台成立技术制造公司
法拉第笼

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Atwood, H. L., Govind, C. K., Wu, C. F. Differential ultrastructure of synaptic terminals on ventral longitudinal abdominal muscles in Drosophila larvae. J. Neurobiol. 24 (8), 1008-1024 (1993).
  2. Feng, Y., Ueda, A., Wu, C. F.

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Drosophila LarvaeNeuromuscular JunctionElectrophysiological RecordingExcitatory Junction PotentialMiniature Excitatory Junction PotentialIntracellular ElectrodeSuction ElectrodeHL3 BufferAction Potential StimulationQuantal Content Analysis

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