小鼠肾上腺嗜铬细胞分离

摘要

肾上腺髓质嗜铬细胞培养系统对于在体外研究兴奋-分泌耦联极为有用。本方案展示了如何解剖肾上腺，并通过剥离肾上腺皮质来分离髓质区域。随后演示了将髓质组织消化为单个嗜铬细胞的过程。

摘要

肾上腺髓质嗜铬细胞培养系统在体外研究兴奋-分泌耦联机制方面具有重要价值。本方案介绍了分离肾上腺并去除肾上腺皮质以获取髓质区域的操作方法。随后展示了将髓质组织消化为单个嗜铬细胞的过程。

方案

缩写：
ACCs - 肾上腺嗜铬细胞，E.Soln - 酶溶液，E.DMEM - 改良杜尔贝科必需培养基（含添加成分）

1. 准备
   1. 将木瓜蛋白酶加入所需体积的 E. Soln. 中（每 1 ml E. Soln. 加入 40 单位木瓜蛋白酶）。
   2. 在冰上用碳酰气活化木瓜蛋白酶约15分钟。 将Locke缓冲液置于冰上并通氧。
      
2. 解剖
   1. 使用8-10周龄小鼠。
   2. 消化前，去除含氧的Locke's缓冲液，并将样本置于冰上。
   3. 参见视频了解解剖步骤。
   4. 切除后，将腺体置于充氧的Locke's缓冲液中。
      
3. 腺体的制备
   1. 去除腺体中的脂肪组织。
   2. 剥离腺体的皮质部分。
      
4. 酶解消化
   1. 无菌滤膜过滤的含氧木瓜蛋白酶。
   2. 在培养皿上制备四份含氧的木瓜蛋白酶溶液。
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