作者无任何利益冲突需要披露。

生长因子包被微珠在前脑背侧外植体上的放置

本视频展示了两种制备和放置生长因子包被微珠的方法，这些微珠可应用于发育中大脑皮层的组织块上。这些微珠可用于在发育中的神经组织（如前脑组织块）上诱导空间受限的基因表达。文中提供了使用Affi-Gel微珠和肝素丙烯酰胺微珠的两种方法。

这是我将使用的第一种珠子，即蓝色凝胶珠，质地较软。因此，我需要在移液管末端使用一支汇集的玻璃移液管，将这些珠子放置在X标记处。我将要演示的第二种珠子是肝素丙烯酸珠。这类珠子质地较硬，我将使用一根钨针将这些珠子放置在X外植体上。这些是我首先会在本生灯上熔化的玻璃毛细管。然后将其拉拽以形成更细的尖端。我将毛细管置于火焰中部，并在管体熔化时不断滚动。我能感觉到它逐渐变软。我将把它从火焰中移出，然后进行拉伸。我将用这支带金刚石笔尖的笔在毛细管上划一条线，以便获得整齐的直线切割。然后我将用火焰抛光两端，使其整洁光滑。我将使毛细管穿过火焰，以熔光末端并缩小开口，从而使毛细管能够捕获微珠，而不是让微珠穿过毛细管。需要注意的是，不要将毛细管在火焰中停留过久。实际上只需快速通过一次即可，否则毛细管会封口。我通常会制作多个这样的毛细管，因为很多在火焰下尖端会被封住。这很难控制，所以只能多做几个。这是一个尖端被封住的例子。这是一个良好的移液操作示例。我已将250 µL的Agel磁珠加入到该Einor离心管中，接下来将用1 mL的PBS缓冲液清洗五次，以去除磁珠浸泡的Azi溶液。每次加入PBS后，我将等待约三分钟，使磁珠充分沉降，然后吸除多余的PBS，并重复此步骤四次。此时微珠尚未完全沉降，待微珠沉降后，我将吸除多余的 PBS，并重复此步骤四次。最后，加入 300 微升 PBS，开始对微珠进行操作。这是一支标准的口吸移液管，我将使用之前拉制的毛细管，将其插入约三分之一深度。首先，用 PBS 填充移液管。通常仅靠毛细作用即可充满。这是直径 30 毫米培养皿的皿盖，我在其中加入了一滴蓝色的微珠。旁边是一小滴 PBS。在此培养皿中是 5 µL 的蛋白质溶液液滴。本例中使用的是 B 和 P 四，但您也可以使用口吸管选择其他蛋白质。我将从这个蓝色圆圈中转移一颗小珠，先在PBS液滴中冲洗一次。然后用口吸管吸取小珠，放入蛋白溶液的液滴中，在室温下孵育约一小时，或在4摄氏度下孵育数小时。这里可以看到PBS中有一团小珠，我需要挑选出大小合适的小珠。如果它们太小，就会直接通过移液管的尖端被吸走。它们需要刚好停留在末端。现在可以看到，我选择了几颗珠子，其中较大的三颗和较小的三颗。我将在实验中使用较大的珠子。现在，我将把一个大珠子从PBS液滴转移到蛋白质溶液的液滴中。为此，我将轻轻将舌头从移液管口移开。这不是一种吸吮的动作，而只是施加一些负压。然后我会将其转移，并基本上把舌头重新放回管口。管头处不要吹气，而是施加一些正压，以将节拍从末端推出。现在，我已将五颗珠子放入蛋白质溶液液滴中，并将在4°C下孵育数小时，或者在室温下孵育半小时至一小时。这是培养皿，其中含有漂浮在培养基中的膜组织，以及我已解剖好的卵形结构。我将用移液器的尖端吸取一些培养基。在将微珠放置到X explan之前，我将仅用一滴培养基迅速冲洗微珠一次。这些是我将用来拾取和放置丙烯酸微珠的钨针。这是钨针，目前它已插入其针 holder 中。这些是精细的镊子。以45度角。我将使用镊子中的钨针从这池PBS中提起一个珠子，并将该珠子转移到一滴蛋白质溶液中。正如我处理琼脂糖珠一样。与处理琼脂糖珠相同，我已将这些丙烯酸珠在PBS中清洗了五次，并将一滴悬液转移至该培养板中。接下来，我将使用镊子夹持的钨针将一颗珠子转移至一滴蛋白液滴中，并像处理凝胶珠一样进行孵育。因此，这是一个提起小珠的操作。我将右手稳固地按在桌面上，同时用左手的食指在针进入液体时固定针头。我用针轻轻触碰一个小珠，然后缓慢地将其从小珠中提起。有时小珠会从针上掉落，此时只需重新取另一个即可。现在用我的左手持45度角镊子，镊尖朝下，将珠子和针头接触液体并使用。用镊子的尖端轻轻将其推离。现在我的蛋白质中有五个珠子。好的，我用右手持钨针插入珠子，左手用镊子，镊尖朝下的方向与之前将珠子推离时相同，对这四个珠子再重复一次操作，位置在x explan上。在37摄氏度下孵育，孵育时间取决于具体的检测方法。

growth-factor-coated-bead-placement-on-dorsal-forebrain-explants

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

Growth Factor-Coated Bead Placement on Dorsal Forebrain Explants

涂层生长因子-珠放在背的前脑植

University of California, Irvine (UCI).  该视频演示两种方法准备，并把珠，与生长因子，对发展中国家的大脑皮层的外植体，已被涂。这些珠子可用于诱导前脑植等神经组织的发展空间限制的基因表达。方法是使用阿菲 - 凝胶珠和肝素acryllic珠。

生长因子包被微珠在前脑背侧外植体上的放置

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