作者无任何利益冲突需要披露。

解剖3龄黑腹果蝇幼虫的成虫盘

Dissection of Imaginal Discs from 3rd Instar Drosophila Larvae

本实验方案演示了从三龄幼虫阶段的果蝇幼虫中分离成虫盘的解剖技术。在解剖后，直接在显微镜载玻片上对组织进行固定，并展示去除翅、腿和眼成虫盘的方法，以便后续观察。

今天我将向您展示如何解剖三龄黑腹果蝇幼虫的成虫盘。三龄幼虫的成虫盘可用于研究多种发育过程。在我们的实验室中，我们利用它们来观察细胞凋亡过程，但您也可以在其中表达各种蛋白质，通过这种方式研究并观察成虫盘内发生的多种发育事件。为此，我将使用几种非常重要的工具。首先是挑虫针，用于将幼虫从培养皿中取出。接下来非常重要的是解剖镊子，其刃口必须极为锋利，以确保解剖过程顺利进行。然后我们将使用11号手术刀片从头部切下圆盘组织。接着将这些圆盘置于载玻片上，并加入适量的Vector Shield封片剂作为封固介质。因此，我们首先要收集一些三龄及星形游走期的三龄及星形幼虫。我在这里使用挑针将它们从离心管壁上轻轻撬下来。有时将挑针稍微沾湿会更有帮助，然后将幼虫放入一滴 PBS 中。好的，现在我们得到了第三龄幼虫。由于我是右撇子，我会将他的头部转向我的右侧，并利用几个解剖标志来指导我们如何抓握。首先是此处和此处的气管主干部分，然后在靠近头部的方向有一个较小的横截面。首先，我将从头部往下约三分之二处轻轻抓住幼虫的身体。然后，用右手在此处横杆后方几毫米处抓紧，尽量抓在幼虫体宽的中间位置。这样抓握就比较理想了。可以看到我已经进行到一半左右了。接下来，我将用右手轻轻向前拉，看到所有肠道都随之移出。好。现在可以丢弃身体的主要部分了。这里我们得到了头部，其中包含附着在口器上的成虫盘。因此，我将抓住它的口器部分，以避免压碎任何成虫盘，并将其移至一滴新鲜的PBS中。现在我们就得到了固定好的幼虫头部。我们将去除所有多余的组织，然后像之前一样用镊子夹住幼虫的口器，或者用镊子将其压在解剖板上。口器现在位于左侧。好的，这里我们看到的是肠道，这是不需要的，而旁边有一个唾液腺。有一些脂肪体或脂肪组织，继续将其剥离，尤其是脂肪，因为它可能会干扰某些检测和染色，影响你不希望被染色的部位。现在我们得到了清理干净的幼虫头部。现在，我们已获得幼虫头部，这些头部已从身体上解剖下来，经过固定和清洗，去除了多余组织，并根据需要进行了相应处理，例如在C2隧道或其他功能染色中使用抗体染色。现在，我们将它们放置在载玻片上，准备将实际的成虫盘从头部解剖下来，包括口器部分。好的，这次我们的口器部分位于左侧。我将用镊子轻轻将其压在载玻片上。右手持11号手术刀片，这是一种更为精细的工具，用于解剖操作。首先，我将去除中枢神经系统和视叶。可以看到，这里是中枢神经系统，两侧是两个视叶，而眼-触角原基盘附着在它们上面。因此，如果我将刀片插入视叶与眼原基盘之间并缓慢拉动，就可以移除中枢神经系统，此时眼原基盘会被逐渐拉伸开来。好的，现在我们有了中枢神经系统和视叶。接下来，我们有两个已经从中枢神经系统上分离下来的眼原基。现在我将通过在基部轻轻剪切并拉动，将其从口器部分移开。好的，这里有一个眼-触角盘，另一个是眼-触角盘。好的。现在我们可以看到翅盘从这里伸出来。我将再次轻轻地找到基部切口并进行拉取。这样我们就得到了一个附着有腿节盘的翅节盘，以及少量的气管。好的，这就是你们的翅节盘，上面附着有腿节盘，显然这里还有多个腿节盘。因此，我们可以在这里稍微仔细搜寻一下，通过轻轻用刀片探查，就能找到更多的节盘。这就是我们在本次能找到的所有圆盘。还有几个腿部圆盘。

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Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

从3龄果蝇幼虫的成虫光盘夹层

University of California, Irvine (UCI).  此协议表明解剖技术，用于隔离从果蝇幼虫在3龄阶段成虫光盘。组织和修复后说，删除的翅膀，腿和眼睛光盘的方法是直接在随后的可视化的显微镜幻灯片展示。

解剖3龄黑腹果蝇幼虫的成虫盘

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