本视频介绍了从胚胎小鼠发育中的大脑皮层分离神经前体细胞的方法。展示了从子宫中取出胚胎、解剖皮层组织以及消化分离出的大脑皮层的操作过程。
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摘要
摘要
原代神经干细胞培养可用于研究中枢神经系统发育背后的机制。干细胞研究将增进我们对神经系统的理解，并可能帮助我们开发出针对目前无法治愈的脑部疾病和损伤的治疗方法。此外，干细胞还可用于旨在深入研究神经分化与转分化机制，以及调控细胞特化为特定细胞类型的遗传与环境信号的干细胞研究。本视频展示了一种从胚胎期12.5天（E12.5）小鼠前脑背侧分离细胞的技术。解剖过程包括从子宫中取出E12.5小鼠胚胎，用精细解剖镊去除“皮肤”，最终分离出大脑皮层组织片段。解剖完成后，组织经消化并进行机械性解离。将重悬的解离细胞接种于有利于神经干细胞生长的“干细胞”培养基中进行培养。
关键词：原代培养，神经干细胞，中枢神经系统发育，神经分化，转分化，遗传信号，环境信号，胚胎期12.5天，小鼠，前脑背侧，大脑皮层，组织解离，机械解离，干细胞培养基
方案
- 从小鼠 E12.5 胚胎皮层中分离神经前体细胞（NPCs）。
- 从解剖得到的端脑泡中去除皮肤和间充质层。
- 将脑泡置于含 0.05% 胰蛋白酶、0.02% EDTA 和 0.2% BSA 的 HBSS 中，37°C 下孵育 20 分钟。
- 加入等体积含 1 mg/ml 大豆胰蛋白酶抑制剂（Sigma #T6522）的 HBSS 终止消化反应。
- 使用火焰抛光的巴斯德移液管反复吹打，使组织充分解离。
- 细胞用含 0.2% BSA 的 HBSS 洗涤一次，然后以每毫升 50,000 个细胞的密度接种于经层粘连蛋白包被的盖玻片上，培养基中添加 20 ng/ml EGF、10 ng/ml FGF2（R&D Systems 或 Peprotech）和 2 ug/ml 肝素（Sigma）。
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讨论
通过获取、分离和培养胚胎神经干细胞，我们对中枢神经系统发育和干细胞生物学的理解取得了巨大进展。本视频展示了E12.5小鼠大脑皮层的解剖操作，以及随后的组织分散和胚胎神经干细胞的培养过程。其他研究者也已成功采用了许多类似的实验方法。
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材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 | |
|---|---|---|---|---|
| 直虹膜剪刀 | 工具 | Fine Science Tools | 14060-11 | |
| 中号剪刀 | 工具 | Fine Science Tools | 15024-10 | |
| 微型剪刀 | 工具 | Fine Science Tools | 15002-08 | |
| 弯头镊子 | 工具 | Fine Science Tools | 11251-35 |
参考文献
- Currle, D., Cheng, X., Hsu, C., Monuki, E. Direct and indirect roles of CNS dorsal midline cells in choroid plexus epithelial formation. Development. 132 (15), 3549-3559 (2005).
- Flanagan, L., Rebaza, L., Derzic, S., Schwartz, P., Monuki, E. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J Neurosci Res. 83, 845-856 (2006).
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