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第1部分:损伤修复结肠炎模型
- 基线体重应获得每个鼠标之前开始直接资助的治疗。
- 设为3%(W / V)葡聚糖在水硫酸钠盐溶液,并用0.45μm的醋酸纤维素过滤器的过滤器。
- 四天的3%DSS解决方案,更换鼠笼的饮用水。这些老鼠不应该有任何其他来源的水(即排除放置在自动浇水系统的提示)。
- 第四天,一个额外的三天更换水DSS解决方案,允许一些结肠上皮复苏。 4天小鼠应权衡利弊,以量化结肠炎的系统性后果。减肥是常见的严重伤害。
- 第7天,权衡和牺牲的老鼠。小鼠可吸入过量的异氟醚,或其他制度上安乐死,IACUC批准的方法。
第2部分:剖检和科隆收获
- 揭露鼠标和安全的腿腹端,腹部,以确保通畅的访问。完全用70%乙醇湿腹部。
- 抓住组织钳腹部中线,从而延长向上露营的皮肤。使用细尖的剪刀切开腹部暴露腹腔内容。延长切口的xyphoid过程中提示在中线,然后沿伪劣方面的双边沿海的利润率延长。
- 确定小肠,盲肠和结肠。仔细解剖/挑逗从周围的肠系膜结肠。断面结肠深藏在骨盆免费的远端结肠和直肠。在colonocecal距断面免费近端结肠的结肠。必须小心,在此过程中,不损害结肠清洗结肠,将是有问题的的,如果发生穿孔。
- 使用20G喂养的针头和10 ml注射器,插管和冰冷PBS冲洗大肠,直到洗脱液是完全明确的大便。
- 在这一点上,如果想要的宏观分析,在解剖显微镜,冒号,可以固定为"香肠"。如果病理分析只需要进行第4部分"急性结肠炎组织学分析制作的瑞士卷"。
第3部分:处理整个结肠的宏观分析"香肠"
- 重要的是结肠保持正确的方向,因此,保持最接近运营商结肠远端。切两片非吸收缝合线(SP116 1.5公吨编织丝绸),一个约1英寸长,其他的2英寸。
- 使用2英寸片缝合,以配合末端接近尽可能的保证金,同时仍保持良好的密封。
- 放置一个20G的喂养针含5毫升10%福尔马林磷酸盐缓冲到近端的结肠。松散的领带喂养针灯泡立即近端缝合,其余部分。牢牢把握冒号在喂养针灯泡和注入福尔马林,直到结肠扩大。在缝合拧紧结,你退出喂养针,从而使作为"香肠"的注入,扩大结肠。
- 填写一个15毫升的锥形管,用10%福尔马林磷酸盐,并将其放置在管在结肠。修正为24小时。
- 倒入福尔马林和一个额外的24小时用70%乙醇代替。 (冒号可以存储在70%乙醇在室温下无限期。)
- 从锥形管中取出结肠和削减每年年底的字符串,用手术刀小心不要破坏结肠。请记住,末端的字符串最长的那块。削减纵向从远端到近端结肠,使之形成一个长表。此时,冒号可以被看作在解剖显微镜下。
第4部分:急性结肠炎的组织学分析的瑞士卷
- 重要的是结肠保持正确的方向,因此,保持最接近运营商结肠远端。
- 测量结肠长度。该指标损伤的严重程度的另一个指标。结肠炎增加水肿,并缩短整体结肠长度。
- 用细尖的剪刀,切割纵向从远端到近端结肠。用细尖镊子把握要么切口的边缘和横向打开远端,近端自己的方式工作,从而为平板显示结肠。
- 滚动结肠需要一个钳和一双双手技术。把握要么钳远端缘的边缘。顺序辊旋转并释放钳继续向近侧缘结肠。从而产生了第三个维度或"瑞士卷"的一个螺旋。要保持卷的形式,牢牢把握辊钳和断面与27G1 / 2针。安全针,弯针,因为它退出卷筒。
- 放置在一个适当的标记组织的录音带和一罐10%的轧辊,缓冲福尔马林磷酸盐在室温为24小时,以确保组织固定。
- 倒入福尔马林和一个额外的24小时用70%乙醇代替。 (冒号可以存储在70%乙醇在室温下无限期。)
- 一旦样品已被固定,石蜡包埋,切片和病理分析的幻灯片上。
第5部分:代表结果
急性结肠炎的DSS模型允许研究者获取,修复,和分析一个冒号,急性结肠炎模型。瑞士卷被切断,安装时,应该形成一个代表整个结肠切片,如果推出正确(图1)。安装成卷,可与H&E染色,以确定损害程度的结肠,从远端(内)结束的近端(外)结束(图2)。也可进行免疫组织化学瑞士卷,以确定和量化炎症浸润。如果香肠的方法已被正确地执行,将固定结肠扩张,整个粘膜表面,可以轻松地操纵下的解剖显微镜(图3)观察。
图1,正确执行的"瑞士卷"。 (一)结肠推出从远端到近端,用针横断和弯针年底固定。它,然后放置在一个固定的组织卡带。 (二)H&E染色5微米的鼠标与决策支持系统(D =远端结肠P =近端结肠)治疗结肠作出了瑞士卷部分。
图2:决策支持系统治疗冒号显示急性结肠炎的迹象。炎症和隐窝损伤DSS治疗结肠水治疗控制比较明显。
图3。"香肠"的一个例子。香肠用福尔马林注入完全展开。一个很小的角度,将目前中学的自然弧度的结肠。打开香肠应平放。