小鼠胰岛分离

方案

胶原酶的制备

1. 称取胶原酶放入50 ml锥形管中，加入分离缓冲液，配制成下表所示的终浓度。通过涡旋振荡溶解胶原酶。
   
   
   （12只小鼠 + 2只备用小鼠 = 14只小鼠 × 5 ml/只 = 总共70 ml胶原酶溶液）
   
   
   （70 ml × 0.5 mg/ml 或 0.3 mg/ml = 总共35 mg 或 21 mg胶原酶P）
   
   
   

   品系	年龄	胶原酶P (mg/ml)

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
二苯硫腙	试剂			将5 mg二苯硫腙溶解于5 ml DMSO中，置于50 ml锥形管内。加入45 ml生理盐水，轻轻混匀。使用60 cc注射器和0.22 "m注射器滤器过滤至新的50 ml离心管中。4 °C保存备用。使用时，每35 mm计数网格板中加入1 ml。
PBS	缓冲液
HBSS	缓冲液
分离液	缓冲液			含10 mM HEPES、1 mM MgCl₂、5 mM葡萄糖、pH 7.4的HBSS
洗涤液	缓冲液			含1 mM CaCl₂的分离缓冲液
胶原酶P		Boehringer Ingeheim	1213873
解剖工具				止血钳（n=2）、镊子（n=2）、剪刀（用于皮肤切口及分离胰腺周围组织）
注射器				无菌，5 ml，每只小鼠1支
30 G针头				无菌，每支注射器1个
带聚四氟乙烯盖的硅化玻璃小瓶		Fisher Scientific	213-018-54	无菌，每只小鼠1个
大号水槽滤网				无菌
1000 ml烧杯				无菌
纱布垫				4×4，每只小鼠2块
塑料滴管				无菌
小鼠	动物