实心板为基础的饮食限制在线虫</em

摘要

在这里，我们目前执行固体板为主的饮食限制在一个协议 C。线虫与杀害细菌。

摘要

没有营养不良或饥饿，减少食物的摄入，增加寿命和延迟发病的各种与年龄有关的疾病，在广泛的物种，包括哺乳动物。这也导致在体重和生育能力下降，以及血浆葡萄糖，胰岛素和IGF - 1在这些动物的较低水平。这种治疗方法通常被称为饮食限制（DR）或热量限制（CR）。 线虫已经成为一个重要的模式生物，研究衰老的生物学。环境和遗传操作已被用于模型的DR，并已显示出在 C的寿命延长线虫 。但是，许多报道DR 在 C的研究线虫是通过在液体介质中传播的动物，而在老龄问题领域的遗传研究的最标准在固体琼脂培养皿板。在这里，我们目前使用标准的固体NGM杀害细菌的琼脂板DR的协议。

方案

1。细菌浓度的估计建立校准曲线

本节描述为任何给定的菌种（如OP50，HT115），将作为食物来源C.限制饮食实验使用细菌浓度的估算方法线虫 。每一株用于细菌，应建立单独的校准曲线。

1. 接种单菌落的E.大肠杆菌 OP50细菌捡到3毫升的液体LB培养基中的细菌从一个新鲜的LB琼脂连胜。
2. 广场OP50文化在37℃摇床，并允许细菌的生长过夜。
3. 准备从过夜培养的菌悬液的序列的2倍稀释（2X，4X，8X，16X，32X）。
4. 一式三份分光光度计在600 nm测量吸光度（光密度），每个稀释度。
5. 进一步淡化每个菌悬液百万倍（两次稀释1000倍）。
6. 传播0.4毫升细菌悬浮液，每个稀释度100毫米的LB琼脂平板上均匀地。
7. OP50在37℃培养箱中培养18-24小时发生的LB平板。
8. 计数每盘上生长的细菌菌落的数量。用于计算每个样本菌落计数每毫升CFU（菌落形成单位）。
9. 测OD ₆₀₀值和OP50细菌浓度之间的关系可以建立绘制_外径 600细菌浓度（CFU / ml为）的功能，并执行线性回归分析（图1）。

解决方案:

....

讨论

饮食限制（DR）是已知的，以增加寿命和延迟在广泛的物种，包括哺乳动物^5-7中各种与年龄有关的的疾病的发病。已用于环境和遗传操作模式在 C DR 线虫，包括在定义一个半液体介质中^8,9，稀释^10-12日在液体介质中的细菌的食物来源和使用行为的突变体，饲料以较慢^的速率13培养蠕虫。然而，DR的遗传模拟可能产生的表型无关的DR，而在液体培养基中培养的蠕虫涉及从固体培养基平板适应大部分的蠕虫病毒实验室的条件不同的生长条件。标准固体板DR的协议将是有益的，因此已被^4,14,15几组。

在这里所描述的协议，细菌被杀死作为一种方法来控制食物摄入量的水平，通过应用两个不同的抗生素板块。然而，如紫外线照射的替代方法也可以用来抑制细菌的生长。

为了避免在SDR的实验过程中完全剥夺食物（如饥饿），蠕虫需要被转移到新鲜SDR板上面的步骤3.7中提到的每12-48小时。传输频率取决于食物浓度，每盘蠕虫数量，由.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂名称	公司	目录编号	评论
羧	Duchefa Biochemie	C0109.25	溶于水。
卡那霉素	罗氏公司	10106801001	溶于水。
细菌用的蛋白胨	流式细胞，Dickinson公司	DF0118072
细菌用的蛋白胨	流式细胞，Dickinson公司	DF0123075
细菌用的酵母提取物	流式细胞，Dickinson公司	DF0127071
洋菜	流式细胞，Dickinson公司	DF00145170
无菌培养管	美国科学	1485-0810
分光光度计	Amersham公司生物科学	基因定量亲	Amersham公司是通用电气医疗集团的一部分。
解剖显微镜	蔡司	STEMI 2000
离心分离	Beckman Coulter公司	Accuspin FR