小鼠缺血性卒中激光多普勒血流仪引导下经腔内大脑中动脉阻塞（MCAO）模型

摘要

大脑中动脉闭塞（MCAO）的管腔内模型是实验性缺血性卒中模型中最常用的模型。本文将结合激光多普勒血流仪的引导，详细演示该模型的全部操作步骤及其典型结果。

摘要

脑卒中是全球第三大死因，也是致残的首要原因，仅2009年在美国的估计费用就接近700亿美元^1,2。1986年，Koizumi⁴建立了大脑中动脉栓塞（MCAO）的血管内模型，以在大鼠中模拟这种具有重大影响的人类疾病。随后，Longa³对该MCAO方法进行了改良。这两种技术已被广泛用于研究缺血性脑卒中导致的脑损伤分子机制以及潜在的治疗手段⁵。这种在大鼠中相对非侵入性的方法后来被扩展应用于小鼠，以便利用转基因和基因敲除品系^6,7。为了模拟局灶性脑缺血，通过颈内动脉插入血管内缝线，以阻塞大脑中动脉（MCA）的起始部。在设定的时间后撤回缝线可模拟自发再灌注，但缝线也可永久保留。本视频将逐步演示在小鼠中实施血管内MCAO手术的两种主要方法，并提供有关潜在缺陷和注意事项的见解。随后将采用2,3,5-三苯基氯化四氮唑（TTC）对缺血脑组织进行染色，以评估脑梗死的范围⁸。

方案

本方案已获得佛罗里达大学机构动物照护与使用委员会（IACUC）的批准，并符合《实验动物照护原则》（NIH 出版物第 86-23 号，1985 年修订版）。

1. 材料

1. 动物：雄性 C57BL/6 小鼠（Harlan Laboratories，Indianapolis，IN，USA），手术时体重为 20–26 克。
2. 麻醉：
   1. 麻醉机：VetEquip 吸入式麻醉系统（VetEquip Inc.，Pleasanton，CA，USA）。
   2. 吸入麻醉剂：异氟烷（Isoflurane，Baxter Pharmaceutics，Deerfield，IL）。
3. 手术器械：SuperCut 虹膜剪刀，直型（World Precision Instruments, Inc.，Sarasota，FL，USA）；Vannas 显微剪刀，直型（World Precision Instruments, Inc.，Sarasota，FL，USA）；Dumont 镊子（细尖，45° 弯头，World Precision Instruments, Inc.，Sarasota，FL，USA）；双极电凝装置（高频电凝器 900，World Precision Instruments, Inc.，Sarasota，FL，USA）；微血管夹（World Precision ....

讨论

大脑中动脉阻塞（MCAO）模型是一种已建立的、用于在小鼠中复制脑缺血的模型。该模型最初在大鼠中使用，随后被改进并应用于小鼠。该技术的一个优势是避免开颅手术，从而消除手术操作对血脑屏障通透性和颅内压的影响。然而，许多变量，如品系差异¹⁰、缝线尖端大小¹¹、阻塞持续时间⁶、体温¹²、麻醉方式¹³以及其他因素，可能导致该模型中梗死体积的不一致。
以下是一些需要特别指出的技术细节：

1. 对缝线末端进行包被处理，可获得更光滑且易于操作的缝线，用于闭塞大脑中动脉（MCA），从而降低穿孔风险。
2. 精细分离并固定迷走神经，使其远离邻近动脉，避免在套扎缝合时意外受压。务必使用两道套扎缝线，以防止在推送闭塞缝线过程中经切口发生逆行出血；结扎时应轻柔操作，避免损伤动脉管壁。
3. 翼腭动脉在颈总动脉（CCA）分叉后从颈内动脉（ICA）分出。为避免上升中的缝线尖端误入翼腭动脉而非进入ICA，应调整手术平台，使小鼠头部与颈部保持直线方向。此类偏差在Koizumi法和Longa法中均较常见，因此.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
雄性 C57BL/6 小鼠	动物	Harlan Laboratories		20–26 克
解剖显微镜	显微镜	Leica Microsystems		6.3:1 变焦
光纤照明器	照明器	TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA	FO1–-150
异氟烷	麻醉剂	Baxter Internationl Inc.	1001936060
SuperCut 直头虹膜剪	手术工具	World Precision Instruments, Inc.	14218
Vannas 微型直头剪	手术工具	World Precision Instruments, Inc.	14003
Dumont 精细尖镊子	手术工具	World Precision Instruments, Inc.	503290
血管夹	手术工具	World Precision Instruments, Inc.	14120
高频电凝器 900	手术工具	World Precision Instruments, Inc.	500397
7-0 外科尼龙单丝缝线	缝线	Ethicon Inc.	1647G	用于闭塞的缝线
7-0 外科丝线缝线	缝线	Ethicon Inc.	7733G	用于结扎的缝线
硅酮 RTV 粘合剂	硅橡胶	World Precision Instruments, Inc.	1571
Vetbond	组织粘合剂	3M	70200746587
Puralube Vet 软膏	眼膏	Pharmaderm Animal Health
盐酸丁丙诺啡	镇痛药	Hospira Inc.	NDC 0409-2012-32
热凝装置		World Precision Instruments, Inc.	501292
PeriFlux System 5000	经颅多普勒血流测量仪	Perimed
BAT-12	直肠温度计	World Precision Instruments, Inc.	BAT-12R
T/PUMP, TP600	加热毯	Gaymar Industries
2,3,5-三苯基四氮唑氯化物	试剂	Sigma-Aldrich	T8877
小鼠脑组织切片模具	脑切片器	Zivic Instruments	BSMAS001-1