对检测方法果蝇行为

摘要

果蝇是一种基因和行为听话的模型系统已用于了解一个多世纪^1的基础上的许多重要的生物过程的分子和细胞， 果蝇已经得到了很好的利用获得到飞行为的遗传基础的见解。

摘要

果蝇 ，果蝇，已用于研究的范围广泛的人类疾病，如癌症，心血管疾病及各种神经系统疾病的分子机制。我们已经优化了简单和强大的行为分析，确定幼虫的运动，成年的爬坡能力（环法），对果蝇的求偶行为。这些行为的分析是研究遗传和环境因素对飞行为的作用，广泛适用。幼虫爬行能力，能可靠地用于确定在果蝇幼虫爬行能力的早期阶段的变化，并检查他们的运动，药物或人类疾病基因的影响（转基因果蝇）。幼虫爬行检测变得更适用，如果一个基因的表达或取消导致蛹或成人阶段的杀伤力，因为这些苍蝇不活到成年，他们可以评估。这基本也可用于ssay配合明亮的光线或应力研究果蝇幼虫额外的行为反应。求偶行为已被广泛用于研究遗传基础的性行为，也可用于检查活动和协调，以及学习和记忆。 果蝇求偶行为涉及的各种感官刺激，包括视觉，听觉和化学感应信号交换之间的男性和女性，导致一系列复杂的特点以及电机最终成功交配行为。传统的成人攀岩检测（负geotaxis），单调乏味，劳动密集，耗时^2-4不同试验之间的显着变化，。快速迭代⁵负geotaxis（环）法有许多优势，更广泛采用的协议，提供了一个重复性好，灵敏度高，高通量的方法来量化成人运动和消极geotaxis behaviors。在环法，几个基因型或药物治疗，可以同时使用大量的动物测试，高通量的方法筛选试验更适合。

方案

A.幼虫爬行法

1。幼虫收集

1. 成立8盎司一瓶苍蝇（10-15男性10-15女性）。
2. 让苍蝇奠定24小时的卵子，然后明确瓶苍蝇。 （转移到​​一个新瓶的成年人，并在必要时重复）。
3. 孵育瓶为3-4天，或直至三龄幼虫均可见。
4. 添加50 - 100毫升20％的蔗糖与幼虫的瓶子，让坐了20分钟。幼虫会浮到顶端。
5. 收集的幼虫用25毫升血清吸管尖端切断，成网状篮子的地方。
6. 洗两次去离子H _{2 O}幼虫在网篮幼虫为实验做好准备。

2。治疗药物的幼虫

1. 用刷子刷到5毫升的烧杯中含有一种解决方案蔗糖5％+药物输送所需数量的幼虫。
2. 让至少15分钟的幼虫饲料。
3. 网状筐倒入药物治疗的幼虫和冲洗。他们现在已经准备好使用。

3。运动检测（测量总距离行驶或体壁收缩）

1. 用刷子个别运输幼虫到:
   1. 15厘米的培养皿中含有超过0.2厘米²格方格纸，2％琼脂糖（以前浇，并允许变硬）。
      1. 计数在1分钟内越过网格线的数目。
   2. 良好的玻璃夹层菜含有稀释的酵母膏溶液。
      1. 解剖显微镜下观察，计数在一....

讨论

果蝇的行为是严格受遗传和环境因素。我们和其他人，以前使用这里描述的实验，收集数据，检查飞的行为，并在果蝇 ^5-19仿照人类神经退行性疾病相关的基因。 ^第三龄幼虫爬行分析，慎重选择是关键的一步。如果用药物治疗，它会采取10-15分钟（或更取决于药物的类型和性质），以达到最大的效果，如果有良好的溶解性。因此，我们经常喂药物飞行15分钟，然后等待一个额外的15分钟前测试。然而，重要的是，保持在溶液中的药物浓度，治疗组之间的曝光时间，准确的比较。中枢神经系统活性药物通常都会有一个最大的效果持久〜45分钟。应洗好后，选择（或挖喂养）消除苍蝇食品和幼虫1分钟前开始爬行法允许水土不服。琼脂平板应保持在室温（〜22℃），一个小时，低温可以影响幼虫爬行能力。虽然幼虫爬行检测，可以提供重要的信息，有关活动水平，这是不适合的微妙协调财政赤字的分析。因此，作为一个筛选平台，它是最适当的检查活动的赤字总额的第一个通。

一个成年人的行为，涉及精细动作的协调是求偶和交配。这种行为已被用于研究人类疾病有关的行为的各个方面，涉及处理感.......

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
试剂名称	公司	目录编号
蔗糖	Fisher Scientific则	S5-500
琼脂糖	Invitrogen公司	16500-500
6盎司果蝇瓶	杰纳西科学	32-130
油漆刷（＃1）	特德·佩拉，公司	11859
飞食品组件
棒子面	Fisher Scientific则	NC9109741
洋菜	杰纳西科学	66-104
糖蜜	Fisher Scientific则	NC9349176
丙酸	阿库罗斯福冈	14930-0010
tegosept	顶点	20-258
乙醇	费舍尔科学的	BP2818-4
酵母	杰纳西科学	62-107