本研究介绍了一种简化的手术方法和技术，通过使用硅胶粘合剂分离神经-电极复合体并进行阴茎海绵体内压力测量，以实现海绵体神经刺激。
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摘要
摘要
阴部海绵体神经（CN）的刺激及海绵体内压（ICP）的测量已被广泛用于阴茎勃起功能障碍治疗策略的测试与评估。然而，不同实验室所采用的方法存在差异，且仍存在一些技术缺陷。本研究旨在描述一种可提供可靠且可重复性模型的手术技术。通过暴露坐骨结节处的坐骨海绵体肌止点，可在最大程度减少对参与勃起功能结构的解剖损伤的前提下，实现对阴茎脚的插管。采用直径125 µm的双极银电极并结合生物相容性硅胶对电极-神经复合体进行隔离，可实现对CN的重复刺激，且无需反复抬起或干燥神经。该方法通过减少神经的牵拉与干燥，避免了神经暂时性功能障碍，同时实现了神经的完全隔离，有效防止电流泄漏并避免对其他通路的刺激。
引言
对实验动物阴茎勃起功能的体内研究始于1863年，由Eckhard开创性的实验工作启动1。当时通过电刺激盆腔神经以诱导犬类体内阴茎海绵体内压（ICP）升高。在整个20世纪，类似的实验方案被应用于狗、猴、猫和兔等较大的动物。1989年，Quinlan 等首次建立了在大鼠中评估勃起功能的方法2。此后，多个研究团队对该方法进行了改进和优化34。如今，大鼠已成为研究勃起功能障碍病理机制及评估新兴治疗手段最广泛使用的动物模型。该实验的主要步骤包括：通过颈动脉插管记录全身血压，对阴茎脚进行插管以测量阴茎海绵体内压（ICP），以及刺激阴茎海绵体神经（CN）以诱导ICP升高。尽管已有多个研究者对该模型进行了精细化改进，但其可重复性仍存在问题，不同实验室报告的结果存在差异。目前仍存在若干技术难点。
往期文章5,6,7,8,9
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方案
动物饲养于南丹麦大学动物护理中心，遵循机构制定的指导原则。所有动物实验均按照美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》进行。本实验为急性非存活性手术操作。
1. 手术所需导管、电极及器械的准备
- 使用以下显微外科器械：手术剪、弯头显微剪、组织镊、Dumont #7 和 #5 弯曲显微镊、显微持针器以及牵开器。
注意： 由于这是急性实验操作，器械无需灭菌。使用后用 70% 乙醇清洁并擦拭尖端。 - 将导管浸泡在 70% 乙醇中，然后在使用前用含 100 U/mL 肝素的无菌 0.9% NaCl 冲洗。保持导管充满液体，以避免向系统中引入气泡。
- 截取一段 20–30 cm 长的聚乙烯（PE）-50 导管，用于制作颅内压（ICP）测量用导管。应确保导管尽可能短，以减少压力信号的衰减。
- 将一支无菌 24G 针头左右反复弯折，直至其中部断裂。将带有斜面的一端连接至 PE 导管远端，用于插入阴茎脚；将另一段插入针座，用于连接压力传感器。用肝素化生理盐水（100 U/mL）充满整个系统。
- 制作双极聚四氟乙烯（Teflon）涂层电极时，将两根 125 µm 的银丝剪成等长。用胶带将银丝固定在桌边并使其并列排列，随后将电极固定在黑色板上。
- 在聚四氟乙烯涂层上做一小切口，使用 #5 显微镊剥离电极尖端 4–5 mm 长....
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结果
采用本方案并按照推荐的刺激参数，在吸入式异氟烷麻醉（2.0%异氟烷，氧气流速0.8 L/min）条件下操作，应获得如图11和图12所示的结果，其中在75–80 mm Hg范围内出现多个连续的刺激反应。图13显示在持续20分钟的刺激过程中反应稳定，压力维持在73–77 mm Hg。通过冲洗导管并对阴茎脚轻敲（图9）来检测颅内压（ICP）测量导管的通畅性，快速恢复至基线水平是导管位置良好的标志。若白膜结构完整性受损，则冲洗和轻敲后的测试将表现为峰值压力降低、返回基线的速度变慢，且在刺激时反应减弱（图14）。此外，在冲洗时会出现肝素化NaCl溶液渗漏，刺激过程中亦可能发生出血。
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讨论
本研究的主要目的是描述一种简化的阴茎脚插管手术技术，用于记录阴茎海绵体内压（ICP）以及分离阴部神经（CN）以进行电刺激。我们对海绵体的解剖方法进行了改良，以简化手术操作，并在刺激阴部神经时获得可重复的阴茎海绵体内压升高记录。通过在阴茎基底部外侧作1 cm的垂直皮肤切口，并以可触及的坐骨结节作为定位指引，能够良好暴露坐骨海绵体肌和白膜。该手术操作比文献中报道的方法更快速（耗时少于15分钟），且对组织的损伤最小2,3,4。
目前使用的面神经（CN）刺激技术包括在每次电刺激前钩住、提起并干燥面神经10。该技术无法保证每次刺激的条件保持一致。此外，提起神经需要使用显微操作器，并反复牵拉和释放神经，可能导致神经失用性损伤。与当前的面神经刺激技术相比，使用生物相容性硅胶隔离神经-电极复合体可将神经牵拉次数减少至两次：第一次是在神经周围放置双极电极时，第二次是使.......
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披露
作者无任何利益冲突需要披露。
材料
| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 阿德森镊子 | Fine Science Tool | 11006-12 | |
| 杜蒙特 #7 镊子 | Fine Science Tool | 11271-30 | |
| 杜蒙特 #5 镊子 | Fine Science Tool | 11273-20 | |
| ToughCut Mayo 剪刀 | Fine Science Tool | 14110-15 | |
| 微型 Vannas 弹簧剪刀 | Fine Science Tool | 15006-09 | |
| 超细止血钳 | Fine Science Tool | 13020-12 | |
| 克里尔止血钳 | Fine Science Tool | 13004-14 | |
| Kwik-Sil 粘合剂 | World Precision Instruments | KWIK-SIL | |
| 特氟龙涂层银丝 0.125 mm | World Precision Instruments | AGT0510 | |
| 弹性导线牵开器 | 定制 | ||
| 手术刀片 | Fine Science Tool | 10023-00 | |
| PE-50 管 | Warner Instruments | 64-0753 | |
| 23 G 针头 | Kruuse | 121272 | |
| SD-9 方波脉冲刺激器 | Somatco | 1077/183 | |
| 血压换能器及电缆 | World Precision Instruments | BLPR2 | |
| Raucotupf 棉签 | Lohmann-Raucher | 11966 | |
| Pro-ophta 眼科棉棒 | Lohmann-Raucher | 16515 | |
| 0.9% 氯化钠溶液 100 mL | 本地药房 | ||
| 肝素 | 本地药房 | ||
| 25 mL 注射器 | 欧登塞大学医院 | ||
| 兽用眼膏 - Viscotears | 本地药房 | ||
| 银丝 | Science Products GmbH, Heidelberg, Germany | ||
| 硅胶粘合剂 | Kwik-Sil, World Precision Instruments, Sarasota, FL, USA |
参考文献
- Eckhard, C. Untersuchungen über die Erektion des Hundes In: Beiträge zur Anatomie und Physiologie. , Vol. Band III Giessen: Ferber 123-166 (1863).
- Quinlan, D. M., Nelson, R. J., Partin, A. W., Mostwin, J. L., Walsh, P. C. The rat as a model for the study of penile erection. J Urol. ....
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