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方法文章

大鼠单吻合口胃旁路术(OAGB)

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DOI:

10.3791/58776

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2018年11月10日

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本文内容

摘要

本方案介绍在大鼠上实施单吻合口胃旁路术(OAGB)的操作步骤。术者首先使用吻合器制作一个长管状胃囊,随后手工缝合完成吻合。在此动物模型中,术者需复制与人类手术相同的胆胰支与共同支长度比例,因此胆胰支长度设定为35 cm。

摘要

本实验方案的目的是建立肥胖大鼠的减重手术临床前模型,更具体地说是单吻合口胃旁路术(OAGB)。基于该临床前模型,可开展纵向研究,以增进对减重手术在人体中所观察到效果背后机制的理解。为此,大鼠在异氟烷全身麻醉下经剖腹手术进行操作。首先,外科医生创建一个长而管状的胃囊:在对胃大弯和膈裂孔进行游离后,使用钉合器切除无腺体部分的胃组织。随后,对剩余的胃组织再次进行钉合,以形成管状胃并排除胃窦部分。接下来,外科医生在距十二指肠空肠夹角35 cm处行单一切端侧胃-空肠吻合术。选择该肠段长度是为了重现人体减重手术中胆胰支(BPL)与共同支(CL)长度之间的相同比例。手术最后通过腹白线缝合及皮肤关闭完成。术后早期管理包括皮下补液、肌内注射预防性抗生素、腹壁利多卡因注射、镇痛药物给药以及逐步恢复饮食。

引言

病态性肥胖是西方世界的一个主要健康问题,其患病率正不断上升1减重手术仍是病态肥胖唯一长期有效的治疗方法2,对肥胖相关合并症具有明确益处3Roux-en-Y 胃旁路术(RYGB)仍是金标准,因其是历史最悠久的术式之一,也是全球应用最广泛、随访时间最长的手术之一。4OAGB 是一种较新的手术方式,最早由 Rutledge 于 2001 年首次描述。5它被描述为Roux-en-Y胃旁路术(RYGB)的一种有效替代方案6 并且具有一些优势。早期数据显示,在减重效果以及肥胖相关合并症的缓解方面,其疗效与RYGB相似。6,7此外,避免了RYGB中空肠-空肠吻合口狭窄或渗漏的风险,且发生内疝的风险可能低于RYGB。8.

减重手术后体重减轻的生理机制仍存在争议,在人类中研究这些机制可能较为困难9。动物模型有助于理解减重手术如何影响葡萄糖代谢、神经内分泌改变或饱腹感机制。目前尚缺乏不同手术方式之间的比....

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方案

所有动物使用均符合欧洲共同体指南,并经当地伦理委员会(Comité d'éthique en expérimentation animale N° 121)和高等教育与研究部(Ref #02285.03)批准。

1. 动物与饲料

  1. 大鼠
    1. 使用体重为 260 - 320 g 的雄性 Wistar 大鼠,从 7 周龄开始喂食高脂饮食(HFD)。
  2. 饮食
    1. 通过至少 12 周术前高脂饮食诱导饮食诱导性肥胖。大鼠可自由摄取饮水和高脂饮食。
      注:高脂饮食由一种含 45% 脂肪的纯化实验室高热量啮齿类动物饲料组成(见材料表)。
    2. 确保大鼠在手术时已处于肥胖状态,体重介于 600 - 800 g 之间。

2. 材料

  1. 手术器械
    1. 手术前对所有手术器械进行高压灭菌。
    2. 摆放好手术所需的所有器械(参见材料表)。
    3. 在放大镜下使用常规和显微外科器械进行吻合操作。
    4. 确保大鼠置于温度为....

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结果

本方案具有可重复性,并模拟了在人体中实施的OAGB手术。已发表的数据支持本方案的安全性23,24,其死亡率较低,介于12%至25%之间。研究团队中不同外科医生采用该方案操作,均取得了相似的死亡率结果。

尽管如此,学习啮齿类动物手术较为复杂,必须使用放大镜。实际上,显微吻合构建的关键步骤需要经过大约15至20次手术的操作训练,才能达到理想的熟练程度。手术缺陷可能导致吻合口漏或胃梗阻,根据我们的经验,这是主要的死亡原因。另一个成功的关键是术后营养管理;事实上,术后过早给予固体食物营养可能具有危险性。本方案还提供了一套精确的术后营养方案,已被证实是安全的。该手术在人体和大鼠中的操作概念如图1所示。动物处死后手术结果见图2。<.......

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讨论

该方案的优势在于能够模拟在人类中常规实施的OAGB手术。其在大鼠中的安全性和可重复性已通过临床和代谢结果得到证实。

本方案中的吻合操作具有技术难度,是主要的关键步骤。为此,必须使用特定的显微外科工具,例如显微外科持针器或放大镜。为了实现无狭窄的密闭吻合,需在吻合口两侧各进行至少七到八针的紧密缝合,并避免在任何一针中缝及黏膜,以防其被包埋于缝合线内。必须有效管理疼痛和动物福利,并按照前述方法进行渐进式的术后营养支持。

然而,该方案存在一些局限性。首先,由于动物体型较小,手术采用开腹方式而非腹腔镜手术。胃囊右侧未进行分割,这一选择是出于技术原因。尽管如此,在术后15周内未观察到胃囊再通现象。此外,在维持 随意摄取 获取食物的机会。动物可能会增加口服摄入的频率,以抵消胃囊限制作用的影响22,24此外,人类外科手术中不存在胃部切除,而大鼠的无腺胃若不进行切除,则已知具有显著的扩张能力。

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披露

作者无任何利益冲突需要披露。

致谢

作者谨此感谢 Jean Pierre Marmuse 一贯的帮助与支持;感谢 Eglantine Voitellier、Jean-Baptiste Cavin 和 Houneyda El Jindi 在模型构建与图示绘制方面的贡献;感谢 Anne-Charlotte Jarry 和 Andreia Goncalves 在视频制作方面的协助;感谢 Sara J. Zaat 对英文文本的编辑。Matthieu A. Siebert 和 Lara Ribeiro-Parenti 曾获得法国医学研究基金会(Fondation pour la recherche médicale, FRM)和法国外科协会(Association française de chirurgie, AFC)的资助。

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
高脂饮食,45% 脂肪 Genestil,法国 RoyaucourtC 1090-45http://www.genestil.com/
梅岑鲍姆剪刀World Precision Instruments,美国萨拉索塔501739https://www.wpi-europe.com
杜蒙镊子World Precision Instruments,美国萨拉索塔14098https://www.wpi-europe.com
虹膜钳World Precision Instruments,美国萨拉索塔15915https://www.wpi-europe.com
10 cm 虹膜剪刀World Precision Instruments,美国萨拉索塔14218https://www.wpi-europe.com
持针器World Precision Instruments,美国萨拉索塔14110https://www.wpi-europe.com
Alm 自持式牵开器World Precision Instruments,美国萨拉索塔14240https://www.wpi-europe.com
婴儿型 Mixter 止血钳,直角 World Precision Instruments,美国萨拉索塔501240https://www.wpi-europe.com
无纺布无菌棉签LCH Medical Products,法国巴黎SN40-0755www.lch-medical.com
伽利略式双目放大镜,2.5 倍World Precision Instruments,美国萨拉索塔504056https://www.wpi-europe.com
消化道缝线:等规聚丙烯,单股 Prolene 7-0 Ethicon,法国伊西莱穆利诺 EH7813Ewww.ethicon.com
腹膜缝线:涂层编织聚酯,Ti-Cron 2-0Covidien,美国马萨诸塞州曼斯菲尔德3003-52www.covidien.com
皮肤缝线:聚乳酸-乙醇酸共聚物,VICRYL RAPIDE 4-0 Ethicon,法国伊西莱穆利诺 VR3100www.ethicon.com
ETS-Flex 35 mm 吻合器Ethicon,法国伊西莱穆利诺 ATS45www.ethicon.com
可重复装钉吻合器 ProximateEthicon,法国伊西莱穆利诺 XR30Vwww.ethicon.com
TA-DST 30 mm-3.5 mmEthicon,法国伊西莱穆利诺 TX30Bwww.ethicon.com
5% 酒精性聚维酮碘MEDA Pharma,法国梅里尼亚克41085www.medapharma.fr
利多卡因 AGUETTANT 20 mg/mlAGUETTANT 实验室,法国里昂3400940000000.0https://www.aguettant.fr
青霉素 G 500 万单位Panpharma,法国吕特尔3.40E+12https://www.panpharma.eu/fr
Bionolyte G5;氯化钠 0.4%,葡萄糖 5%,氯化钾 0.2%Baxter,法国莫雷帕斯
液体饮食Genestil,法国 RoyaucourtC-0200Thttp://www.genestil.com/
异氟烷 100%Centravet,法国普朗科埃ISO007http://cooperative.centravet.net

参考文献

  1. Ogden, C. L., et al. Prevalence of overweight and obesity in the United States, 1999-2004. Journal of American Medical Association. 295, 1549-1555 (2006).
  2. Buchwald, H.

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