本实验方案介绍了一种用于小鼠的艾灸施用方法，该方法可减少小鼠的恐惧感，保障其福利，并提高研究人员的操作效率。
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本实验方案介绍了一种用于小鼠的艾灸施用方法，该方法可减少小鼠的恐惧感，保障其福利，并提高研究人员的操作效率。
艾灸研究领域正在不断扩展，近年来相关出版物数量迅速增加。艾灸是一种将艾绒在人体皮肤上点燃的疗法，可导致外周皮肤温度升高并出现局部发红现象。在治疗过程中，受试者必须保持静止，以防止烫伤，并暴露干预部位以便于操作；然而，对于动物而言，在艾灸过程中维持固定体位是一个巨大挑战。因此，在小动物（如小鼠）身上实施艾灸操作会给研究人员带来诸多困难。此外，不舒适的体位可能引起动物恐惧和对艾灸的抗拒，增加受伤风险，降低动物福利，并导致研究数据的有效性下降。迫切需要一种高效且舒适的艾灸方法，以保护动物福利并尽量减少对实验结果的不利影响。然而，目前的艾灸方法差异较大，且常常疗效有限。更重要的是，不舒适的艾灸体位可能引发应激反应，例如焦虑、恐惧和愤怒等情绪反应，这些都可能影响研究数据的准确性。因此，有必要制定在干预过程中对动物造成最小伤害的动物艾灸策略。本方案介绍了一种用于小鼠艾灸干预的固定方法，旨在最大限度地减少小鼠的不适感，并提高研究效率。文中重点阐述了小鼠固定的关键策略及艾灸操作方法，并描述了固定装置的结构。
艾灸是中医使用的一种外部疗法1。数百年来，艾灸被广泛应用于保健以及疾病预防与治疗2,3。然而，艾灸的作用机制尚未完全阐明；因此，近年来随着研究人员对其效应及生物学机制的深入探索，该领域的研究不断拓展。
进行艾灸时，受试者必须保持静止，以达到最佳效果4。艾灸治疗通常持续15-30分钟5,6。因此，对动物（尤其是适合用于动物实验的小型动物，如小鼠和大鼠）实施艾灸操作已成为研究人员面临的一大挑战。大多数艾灸设备适用于临床，无法用于动物，特别是小鼠等小型动物7,8,9。此外，与人类不同，动物几乎无法遵从指令，难以在一段时间内保持稳定。动物长时间处于固定且不适的体位，可能引发焦虑、恐惧、愤怒、紧张以及对治疗的抗拒等负面情绪，增加受伤风险，降低动物福利，并导致研究数据的有效性下降10。为解决这一问题，在以往的研究中，针对涉及针灸、....
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所有实验均遵循美国国立卫生研究院《实验动物护理和使用指南》进行，并经成都中医药大学实验动物管理和使用委员会批准。实验动物的饲养与管理参照文献14,15执行。实验选用成年雄性C57BL/6J小鼠，体重为20-25 g。所有小鼠均在12小时光照/12小时黑暗循环、温度24 °C、湿度40%-50%的环境中饲养，自由摄食和饮水。以下方案描述了在典型实验室饲养条件下进行的艾灸操作步骤。
1. 仪器设备的准备
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表1总结了影响艾灸反应的各种因素。小鼠艾灸的积极效果已通过多项小鼠福利指标和积极效应得到证实。
接下来，将具体阐述采用艾灸技术结合完全弗氏佐剂（CFA）诱导注射方法所获得的结果。通过热缩足反应阈值（TWL）实验评估艾灸在缓解疼痛中的有效性16。
小鼠在24 °C、40%-50%湿度条件下，适应性饲养于12小时光照/12小时黑暗循环环境中一周后，分别进行束缚并注射CFA（20 µL，包括CFA诱导模型组、CFA诱导联合艾灸组，CFA+MOXI）或生理盐水。CFA诱导的炎症性疼痛模型已建立17。在各组模型建立前后均进行TWL实验，以评估造模效果。在建立CFA诱导的炎症性疼痛模型后以及进行艾灸干预后，对ST36穴位进行处理（图4）。
小鼠俯卧于固定板上，躯干用魔术贴带固定。小鼠的后肢和尾巴贴.......
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艾灸技术对多种疾病具有疗效，例如疲劳、失眠、腹泻和疼痛综合征20,21,22,23,24,25,26。由于艾灸治疗在多种疾病中的优势，其作用机制已引起研究人员的关注。在动物模型上应用艾灸对于研究其分子机制至关重要。为了分析艾灸的作用机制，研究人员面临的主要挑战之一是如何将动物固定在合适的位置，使其保持稳定且无不适感，同时能够持续接受一段时间的治疗。为解决这一问题，许多研究采用麻醉动物的方法27,28。然而，即使少量麻醉也可能抑制神经传导，从而可能干扰实验数据的准.......
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作者声明无任何利益冲突。
本工作得到了中国国家自然科学基金（81704187，8210152562）、四川省科技计划项目（2019YJ0587，2018JY0482，2019YJ0329）、四川省医学科学院及四川省人民医院研究基金（2018ZX05）、成都中医药大学杏林学者科研基金（QNXZ2019034）的资助。
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| 姓名 | 公司 | 目录编号 | 评论 |
|---|---|---|---|
| 完全弗氏佐剂（CFA） | Sigma-Aldrich | SF588102 | |
| 胶枪 | Deli 集团有限公司 | DL5041 | |
| 实验室手套 | 博奇 有限公司 | 53625130323 | |
| 磁性金属矩形片（厚度：0.2 cm） | Sitoo Stationery Co., Ltd | 1007908729 | |
| 艾条 | Hanyi Airong 工厂 | 5613 | |
| 钢板 | Rizhan金属材料有限公司 | 1108 | |
| 注射器（1000 mL） | 新民福达有限公司 | 796341 | |
| 计时器 | Bevoza Co., Ltd | KT003 | |
| 魔术贴腰带 | 明尼苏达矿业制造有限公司 | 3MSJ3550 | |
| 木块 | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2581457A | |
| 木条 | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 3410968M | |
| 木棒 | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2785476M | |
| 木条 | Chuang Hing Wood Chip Co., Ltd | 2374652S |
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