小鼠的艾灸策略

Summary

本方案描述了一种小鼠的艾灸应用方法，其优点是减少小鼠的恐惧，保证它们的福利，并提高研究人员的效率。

Abstract

艾灸研究领域不断扩大，近年来出版物迅速增加。艾灸是一种点燃人体皮肤上的艾灸疗法，周围皮肤温度升高和局部发红。在这种治疗过程中，受者必须保持静止以防止烫伤并暴露干预部位以便于作;然而，在艾灸过程中保持固定的姿势对动物来说是一个很大的挑战。因此，纵小动物（如小鼠）的艾灸可能会给研究人员带来一些困难。此外，动物不舒服的姿势会导致对艾灸的恐惧和抵抗、受伤风险增加、动物福利降低和研究数据有效性降低。需要一种高效、舒适的艾灸方法来保护动物福利并最大限度地减少对实验结果的不利影响。然而，艾灸方法变化很大，疗效往往有限。更重要的是，不舒服的艾灸姿势可能会导致压力反应，例如观察到的焦虑、恐惧和愤怒，这可能会影响研究数据。因此，需要在干预期间对动物艾灸造成尽可能小的伤害。该方案引入了一种小鼠栓系方法进行艾灸干预，最大限度地减少了小鼠的不适，提高了研究效率。重点介绍了栓系小鼠的基本策略和艾灸的应用，并描述了栓系仪器的结构。

Introduction

艾灸是中医中使用的一种外用疗法¹.几个世纪以来，它一直被广泛用作保持健康、预防和治疗疾病的手段 ^2,3。然而，艾灸的机制仍有待阐明;因此，随着研究人员探索其影响和生物学机制，这一研究领域近年来得到了扩展。

在艾灸过程中，受体必须保持静止才能获得最佳效果⁴。艾灸治疗通常持续 15-30 分钟 ^5,6。正因为如此，对动物，特别是小鼠、大鼠等小动物的艾灸作（有利于用于动物实验）成为研究人员面临的一大挑战。大多数艾灸仪适合临床使用，不能用于动物，尤其是小鼠等小动物 ^7,8,9。除此之外，与人类不同，动物几乎无法服从命令并在一段时间内保持稳定。动物固定且不舒服的姿势会导致被动情绪，包括焦虑、恐惧、愤怒、紧张和对治疗的抵抗，增加受伤的风险，减少动物福利，并导致研究数据的有效性降低

Protocol

所有实验均按照《美国国立卫生研究院实验动物护理和使用指南》进行，并得到成都中医药大学机构动物护理和使用委员会的批准。实验室中动物的护理和维护按照参考文献^14,15 进行。采用体重 20-25 g 的成年雄性 C57BL/6J 小鼠进行试验。所有小鼠均在 24 °C 和 40%-50% 湿度下保持 12 小时的光照/黑暗循环，可自由获取食物和水。以下方案描述了典型实验室外壳条件下的艾灸程序。

1. 设备的准备

1. 鼠标网络共享
   1. 准备一个鼠标拴绳装置，由垂直板、垂直板底座和木头支架组成。
      1. 使用直木夹板（长:30 cm x 宽:3 cm x 高:3 cm）构建固定体，并连接固定魔术贴带（由两侧组成:钩面 （4 cm x 3 cm） 和环侧 （10 cm x 3 cm））以允许在保持灵活性的同时拴系小鼠身体（参见 材料表）。
      2. 用胶枪将钩面固定在木夹板的右侧，并将环侧的 1/4 长度连接到左侧。
   2. 将鼠标放在固定床上，并使用固定的魔术贴带拴住鼠标的躯干。
      注意: 确保系绳带不够紧，不会对心脏施加....

Results

表 1 总结了影响艾灸反应的不同因素。小鼠艾灸的积极结果已通过小鼠福利和积极影响的多种指标表明。

接下来，概述了艾灸技术与完整的弗氏佐剂 （CFA） 诱导的注射程序配对时获得的结果的具体示例。采用热撤退阈值 （TWL） 试验评价艾灸缓解疼痛的疗效¹⁶。

在 24 °C、40%-50% 湿度下以 12 h 光照/黑暗循环适应性饲喂 1 周后，约束小鼠并给予 CFA 注射液 （20 μL，包括 CFA 诱导的模型组和CFA 诱导的艾灸组，CFA+MOXI） 或生理盐水注射。建立了 CFA 诱导的炎症性疼痛模型¹⁷.在每组建立之前和之后 3 天应用 TWL 测试以评估建模。在 CFA 诱导的炎症性疼痛模型和艾灸后，应用 ST36 （图 4）。

老鼠俯卧在床上，它们的鼻子用魔术贴带固定。老鼠的.......

Discussion

艾灸技术对许多疾病有效，如疲劳、失眠、腹泻和疼痛综合征 20,21,22,23,24,25,26。由于艾灸治疗多种疾病的好处，该技术的机制引起了研究人员的注意。艾灸在动物身上的应用对于研究艾灸的分子机制是必要的。为了分析艾灸的机制，研究人员面临的最大挑战之一是决定如何将动物拴在合适的位置，这将使它们保持稳定而不会感到不适，并允许在一段时间内进行治疗。为了克服这个问题，已经进行了许多研究来麻醉动物^{27,28<.......}

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
完成弗洛伊德佐剂 （CFA）	Sigma-Aldrich	SF588102
胶枪	得利集团有限公司	DL5041
实验室手套	博慈股份有限公司	53625130323
磁性金属矩形（厚度：0.2 cm）	西太文具有限公司	1007908729
艾灸棒	汉义爱荣工厂	5613
钢板	日展金属材料有限公司	1108
注射器 （1000 mL）	新民福达有限公司
Timer	Bevoza Co.， Ltd	KT003
魔术贴带	明尼苏达矿业制造有限公司	3MSJ3550
木方	创兴木片有限公司	2581457A
木夹板	庄兴木片有限公司	3410968M
木棍	庄兴木片有限公司	2785476M
木条	创兴木片有限公司	2374652S