方法文章

小鼠右冠状动脉永久结扎诱导的右心室性心肌梗死的生成与表征

DOI：

10.3791/63508

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2022年2月1日

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1The First Clinical College of Dalian Medical University, 2Department of Cardiology, State Key Laboratory of Organ Failure Research, Nanfang Hospital, Southern Medical University, 3College of Pharmacy, Dalian Medical University

本文内容

摘要

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右心室和左心室之间有几个区别。然而，右心室梗死（RVI）的病理生理学尚未明确。在本方案中，引入了一种用于生成RVI小鼠模型的可重复方法，该方法可以提供解释RVI机制的方法。

摘要

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右心室梗死 （RVI） 是临床实践中的常见表现。重度 RVI 可导致致命的血流动力学功能障碍和心律失常。与广泛使用的左冠状动脉结扎生成的小鼠心肌梗死（MI）模型相比，由于与模型生成相关的困难，RVI小鼠模型很少使用。关于RVI诱导的RV重塑和功能障碍的机制和治疗的研究需要动物模型来模拟患者RVI的病理生理学。本研究介绍了在C57BL / 6J小鼠中生成RVI模型的可行程序。此外，该模型的特征基于以下内容:心肌梗死后24小时的梗死大小评估，超声心动图的心脏重塑和功能评估，左心室血流动力学评估以及RVI后4周梗死区的组织学。此外，还进行了冠状动脉系统管型，以观察RV中的冠状动脉排列。这种RVI小鼠模型将有助于右心衰竭机制的研究，并寻求RV重塑的新治疗靶点。

引言

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长期以来，右心室 （RV） 被认为是连接到肺动脉的简单管子，多年来一直被错误地忽视1。然而，最近人们对RV功能的兴趣日益浓厚，因为它在血液动力学障碍2，3 中起着至关重要的作用，并且可以作为心血管疾病的独立风险预测因子4，5，6，7。房车疾病包括心房梗死 （RVI）、肺动脉高压和瓣膜病8。与对肺动脉高压的巨大兴趣相反，RVI仍然被忽视7，9。

RVI，通常伴有下后心肌梗死10，11，由右冠状动脉 （RCA） 闭塞引起。根据临床调查，重度 RVI 可能诱发血流动力学紊乱和心律失常，例如低血压、心动过缓和房室传导阻滞，与较高的住院发病率和死亡率相关1....

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方案

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所有程序均按照美国国立卫生研究院出版的《实验动物护理和使用指南》（NIH出版物第85-23号，1996年修订）进行，并经南方医科大学南方医院动物伦理委员会（中国广州）批准。从南方医科大学动物中心获得健康的雄性C57BL / 6J小鼠（8-10周龄;体重，25-30g）。也可以使用雌性小鼠，但由于性别差异的潜在影响，不建议混合两种性别。到达后，将小鼠置于12小时/ 12小时黑暗/光照循环（每个笼子3-4只小鼠）下，随意食物和水。

1. 手术准备

  1. 手术前通过高压灭菌对手术器械进行灭菌。将加热垫调节至37°C。
  2. 通过腹腔注射50mg / kg戊巴比妥麻醉小鼠（见 材料表）以缓解手术疼痛。将小鼠放在单独的盒子中进行麻醉诱导。通过没有脚趾退缩反应来确保麻醉的深度。
    注意:还建议使用1.5%异氟醚进行吸入麻醉，因为它更适合镇痛。
  3. 将小鼠仰卧在垫子上，方法是用缝合线固定门牙，并用胶带固定四肢。通过检查反射再次确保麻醉深度。
  4. 用脱毛膏从脖子到xiphoid去除毛发。用交替使用抗菌擦洗剂和75%酒精对手术区域进行3次消毒，然后覆盖手术区域。
  5. 按照以下步骤进行插管。
    1. 用迷你呼吸机（见 材料表）将动物的呼吸频率调整为150 / min，潮气量调节至300μL。
      注意:没有....

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结果

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在这项研究中，小鼠被随机分配到RVI（n = 11）或假手术（n = 11）组。图 1A所示为2个正常小鼠心脏的冠状动脉石膏。作为对RCA结扎的反应，心电图的3号导联观察到ST段抬高（图1B）。此外，2，3，5-三苯基氯化四氮唑（TTC）染色显示，术后24 h梗死面积占房车游离壁的45%（图1C，D）。以上数据表明RVI小鼠模型的成功生成。

在手术后4周记录左心室短轴处的4室顶点视图（图2A）和2室视图以及相应的M模式超声心动图（图2B）测量，以评估RV重塑和功能。与假组相比，RVI组舒张末期RV内维（RVIDd）增加（图2C），假组增加2倍以上（图2A.......

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讨论

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来自法国的Sicard及其同事于2019年首次报道了RVI的小鼠模型，该模型描述了手术过程，并专注于RVI9后LV和RV之间的相互作用。然而，迄今为止，还没有研究报告使用这种模型进行进一步的研究。更详细的程序将有助于研究人员使用RVI的小鼠模型进行调查。与Sicard等人9的报告相比，我们提供了模型生成和质量控制策略的分步信息，并进一步评估了RCA的解剖分布，RV血流动力学以及梗死区心肌细胞的存活率。最近的一份报告表明，梗死区域的心肌细胞在心肌再生中起着至关重要的作用23。RVI患者的RV功能将在3-12个月内自发恢复，即使没有再灌注16，24。这些发现表明，小鼠RVI模型将有助于寻找右心衰竭或心脏再生的潜在治疗靶点。因此，有必要推广该模型。

由于RCA的隐蔽性和RCA分布的变化，初级运营商很难生成具有稳定梗塞大小的RVI模.......

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披露

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作者没有什么可透露的。

致谢

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这项工作得到了国家自然科学基金（82073851至孙）和国家博士后科学基金（2021M690074至Lin）的资助。

....

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材料

本文使用的材料清单
姓名公司目录编号评论
2,3,5-三苯基四唑氯化物SigmaT8877用于 TTC 染色
动物迷你呼吸机Havard型 845用于人工通气
超声系统 VEVO2100普勒流速和 AS 斑块视觉声波VEVO2100
Batson's #17 解剖腐蚀套件Polyscience Inc7349用于脉管系统铸造
丁丙诺啡Isoreag1134630-70-8用于减轻小鼠术后的疼痛
C57BL/6J 小鼠 + D29A1A2：D27南方医科大学动物中心-用于小鼠 RVI 模型的生成
相机Sangnond用于拍照
冷光照明器OlympusILD-2手术灯
仪ADI 仪器ADAS1000记录心电图
脱毛膏Reckitt BenchiserRQ/B 33 Type 2去除小鼠毛
发 热垫-恒温手术系统 （ALC-HTP-S1）上海奥尔科特生物技术公司ALC-HTP-S1加热
苏木精-伊红染料LeageneDH0003苏木精-伊红染色
肝素钠盐MacklinH837056用于肝分离
异氟醚RWD 生命科学R510-22吸入麻醉剂
实验室制作的刮刀用作喉镜
实验室制造的气管插管用于插管
Matrx VIP 3000异呋喃烷蒸发器Midmark CorporationVIP 3000麻醉医用
尼龙缝合线 （5-0）宁波医用针头有限公司5-0用于胸部闭合
显微外科肘部镊子RWD 生命科学F11021-11用于手术
显微外科剪刀NAPOXMB-54-1用于动脉切开
Millar 导管AD Instruments，上海1.0F压力梯度测量
MS400D 超声探头Visual SonicMS400D多普勒血流测量Velocity and AS 斑块
针镊Visual SonicF31006-12手术用
硝酸甘油北京一民医药股份有限公司用于扩张冠状动脉
眼科剪刀RWD 生命科学S11022-14手术用
戊巴比妥钠盐默克25MG麻醉
PowerLab 多向生理记录系统上海 AD Instruments4/35压力记录
精密电子天平丹佛仪器TB-114体重秤
丝线缝合线 （8-0）宁波医用针有限公司6-0冠状动脉结扎
小动物显微外科设备NapoxMA-65手术器械
组织钳Visual SonicF-12007-10手术
用组织剪刀Visual SonicS13052-12血流动力学测量用开胸
传输凝胶光功牌250ML制剂超声心动图测量
血管夹Visual SonicR31005-06用于阻塞主动脉血液
动物 多的测量心电图术 术

参考文献

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  1. Rallidis, L. S., Makavos, G., Nihoyannopoulos, P. Right ventricular involvement in coronary artery disease: role of echocardiography for diagnosis and prognosis. Journal of the American Society of Echocardiography: Official Publication of the American Society of Echocardiography. 27 (3), 223-229 (2014).
  2. Frangogiann....

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