更正：利用多能干细胞生成人类神经元和少突胶质细胞以模拟神经元-少突胶质细胞相互作用

摘要

已发布以下文章的更正：  利用多能干细胞生成人类神经元和少突胶质细胞以模拟神经元-少突胶质细胞相互作用。 代表性结果部分已更新。

摘要

已发布更正： 利用多能干细胞生成人神经元和少突胶质细胞以模拟神经元-少突胶质细胞相互作用。代表性结果部分已更新。

图3已从以下内容更新：

图 3：iNs 与 iOPCs 的共培养。（A）iNs 与 iOPCs 在第 7 天共培养的代表性明场图像，显示了适合进一步成熟的细胞密度。（B）iNs 与 iOPCs 共培养 28 天的代表性免疫荧光图像。轴突标志物神经丝蛋白 NF 以绿色显示，少突胶质细胞标志物 MBP 以红色显示。右侧为被 iOL 突起（MBP+）包裹的 iN 轴突片段。（C）在培养 4 周的共培养体系中检测突触形成。细胞经 Synapsin 1（Syn1，绿色）和 MAP2（红色）染色，并通过共聚焦分析沿树突片段的密度对突触斑点进行定量，方法如前所述^17,18。（D）在我们 iNs 与 iOPCs 的共培养体系中（共培养 7 天），星形胶质细胞标志物 ALDHL1 和 GFAP 的表达极低（上图），而小胶质细胞标志物 TMEM119、TREM2 和 CD33 在 qPCR 检测中未见表达（N.D.）。因此排除了这两种胶质细胞类型的污染。请点击此处查看该图的放大版本。

至：

图3：iNs 与 iOPCs 的共培养。（A）iNs 与 iOPCs 在第7天共培养的代表性明场图像，显示了适合进一步成熟的细胞密度。（B）iNs 与 iOPCs 共培养28天的代表性免疫荧光图像。轴突标志物神经丝蛋白 NF 显示为绿色，少突胶质细胞标志物 MBP 显示为红色。右侧为被 iOL 突起（MBP+）包裹的 iN 轴突片段。（C）在培养4周的共培养体系中检测突触形成。细胞经 Synapsin 1（Syn1，绿色）和 MAP2（红色）染色，并通过共聚焦分析沿树突片段的密度来定量突触斑点，方法如文献^17,18所述。（D）在我们iNs与iOPCs的共培养体系中（共培养7天），星形胶质细胞标志物ALDHL1和GFAP的表达极低（上图），而小胶质细胞标志物TMEM119、TREM2和CD33在qPCR中未检测到（N.D.），因此排除了这两种胶质细胞类型的污染。（E）将iOPC与iN共培养可导致神经元-OPC突触的形成。仅在OPCs中表达的荧光标记的突触后标志物PSD95-mCherry在单培养中呈弥散分布（左图），而在共培养中聚集形成斑点（右图，箭头所示；Tuj1为神经元标志物）。（F）在第14天纯iOPC培养物中，表达一系列特征明确的少突胶质细胞基因，这些基因能够感知并响应神经元活动。请点击此处查看该图的放大版本。

第四段已从以下内容更新：

iNs 与 iOPCs 的共培养
本方案专为 iNs 与 iOPCs 的共培养而优化，可实现对这两种细胞类型在神经发育过程中细胞间通讯的实时监测。两种细胞的理想接种密度需通过一系列细胞数量滴定实验来确定，以实现适当的分化（图 3A）。共培养 4 周后，预期 iOPCs 能充分分化为表达特异性标志物（如 MBP）的少突胶质细胞（OLs），并延伸出突起包裹轴突（图 3B）。该共培养系统可显著增加突触数量，表明 iOPCs 通过物理接触或释放神经营养因子为神经元提供支持作用（图 3C）。共培养体系可在良好状态下维持长达 6 周，我们观察到突触数量及其他神经元特征在第 5 周左右趋于稳定。值得注意的是，本实验体系中不存在星形胶质细胞和小胶质细胞，其缺失可通过检测特异性标志物的表达加以确认（图 3D）。

至：

iNs 与 iOPCs 的共培养
本方案专门优化用于 iNs 与 iOPCs 的共培养，可实现对这两种细胞类型在神经发育过程中细胞间通讯的实时监测。两种细胞的理想接种密度需通过一系列细胞数量滴定实验来确定，以实现适当的分化（图 3A）。共培养 4 周后，预期 iOPCs 能充分分化为少突胶质细胞（OLs），表达 MBP 等特异性标志物，并延伸出突起包裹轴突（图 3B）。该共培养系统可显著增加突触数量，表明 iOPCs 可通过物理接触或释放神经营养因子为神经元提供支持作用（图 3C）。共培养体系可维持至多 6 周且细胞状态良好，突触数量及其他神经元特征通常在第 5 周左右趋于稳定。值得注意的是，本实验体系中不存在星形胶质细胞和小胶质细胞，其缺失可通过检测特异性标志物的表达加以验证（图 3D）。iOPCs 表达大量特征明确的基因，这些基因可能通过旁分泌方式（如神经营养因子和代谢物）和/或突触方式，响应并介导邻近神经元的活动依赖性信号（图 3E 和 3F）。

方案

已发布更正： 利用多能干细胞生成人神经元和少突胶质细胞以模拟神经元-少突胶质细胞相互作用。代表性结果部分已更新。

图3已从以下内容更新：

图 3：iNs 与 iOPCs 的共培养。（A）iNs 与 iOPCs 在共培养第 7 天的代表性明场图像，显示细胞密度适宜进一步成熟。（B）iNs 与 iOPCs 共培养 28 天后的代表性免疫荧光图像。轴突标志物神经丝蛋白（NF）呈绿色，少突胶质细胞标志物 MBP 呈红色。右侧为被 iOL 突起（MBP+）包绕的 iN 轴突片段。（C）在培养 4 周的共培养体系中检测突触形成。细胞经 Synapsin 1（Syn1，绿色）和 MAP2（红色）染色，并通过共聚焦显微镜分析树突片段上的突触斑点密度进行定量，方法如文献^17,18所述。（D）在我们 iNs 与 iOPCs 的共培养体系中（共培养 7 天），星形胶质细胞标志物 ALDH1L1 和 GFAP 的表达极低（上图），而小胶质细胞标志物 TMEM119、TREM2 和 CD33 在 qPCR 检测中未见表达（N.D.）。因此，可排除这两类胶质细胞的污染。请点击此处查看该图的放大版本。

至：

图3：iNs 与 iOPCs 的共培养。（A）iNs 与 iOPCs 在第7天共培养的代表性明场图像，显示细胞密度适宜，可用于进一步成熟。（B）iNs 与 iOPCs 共培养28天的代表性免疫荧光图像。轴突标志物神经丝蛋白 NF 显示为绿色，少突胶质细胞标志物 MBP 显示为红色。右侧为被 iOL 突起（MBP+）包裹的 iN 轴突片段。（C）在培养4周的共培养体系中检测突触形成。细胞经 Synapsin 1（Syn1，绿色）和 MAP2（红色）染色，并通过共聚焦显微镜分析树突片段上突触斑点的密度进行定量，方法如文献^17,18所述。（D）在我们iNs与iOPCs的共培养体系中（共培养7天），星形胶质细胞标志物 ALDH1L1 和 GFAP 的表达极低（上图），而小胶质细胞标志物 TMEM119、TREM2 和 CD33 在 qPCR 检测中未见表达（N.D.）。因此，这两种胶质细胞类型的污染可被排除。（E）将 iOPC 与 iN 共培养可导致神经元-OPC 突触的形成。仅在 OPCs 中表达的荧光标记的突触后标志物 PSD95-mCherry，在单培养中呈弥散分布（左图），而在共培养中则聚集形成斑点状结构（右图，箭头所示；Tuj1 为神经元标志物）。（F）在第14天纯 iOPC 培养物中，表达一系列已被充分表征的少突胶质细胞基因，这些基因能够感知并响应神经元活动。请点击此处查看该图的放大版本。

第四段已从以下内容更新：

iNs 与 iOPCs 的共培养
本方案专门优化用于 iNs 与 iOPCs 的共培养，可实现对这两种细胞类型在神经发育过程中细胞间通讯的实时监测。两种细胞的理想接种密度需通过一系列细胞数量滴定实验确定，以实现适当的分化（图 3A）。共培养 4 周后，预期 iOPCs 能充分分化为少突胶质细胞（OLs），表达 MBP 等特异性标志物，并延伸出突起包裹轴突（图 3B）。该共培养系统可显著增加突触数量，表明 iOPCs 可通过物理接触或释放神经营养因子为神经元提供支持（图 3C）。共培养体系可维持至多 6 周，且处于可接受的健康状态；我们观察到突触数量及其他神经元特征在第 5 周左右趋于稳定。值得注意的是，本实验体系中不存在星形胶质细胞和小胶质细胞，其缺失可通过检测特异性标志物的表达加以证实（图 3D）。

至：

iNs 与 iOPCs 的共培养
本方案专门优化用于 iNs 与 iOPCs 的共培养，可实现对这两种细胞类型在神经发育过程中细胞间通讯的实时监测。两种细胞的理想接种密度需通过一系列细胞数量滴定实验来确定，以实现适当的分化（图 3A）。共培养 4 周后，iOPCs 应能充分分化为少突胶质细胞（OLs），表达 MBP 等特异性标志物，并延伸出突起包裹轴突（图 3B）。该共培养系统可显著增加突触数量，表明 iOPCs 可通过物理接触或释放神经营养因子为神经元提供支持作用（图 3C）。共培养体系可维持至多 6 周且状态良好，突触数量及其他神经元特征通常在第 5 周左右趋于稳定。值得注意的是，本实验体系中不存在星形胶质细胞和小胶质细胞，其缺失可通过检测特异性标志物的表达加以验证（图 3D）。iOPCs 表达大量特征明确的基因，这些基因可能通过旁分泌方式（如神经营养因子和代谢物）和/或突触方式，响应并介导邻近神经元的活动依赖性信号（图 3E 和 3F）。