大鼠模型中深部颈淋巴管静脉吻合术的手术方案：淋巴结与淋巴管吻合

摘要

本文介绍了一种实验方案，旨在明确阐述在大鼠体内将深部颈淋巴结或其输入淋巴管与面后静脉进行吻合的各个步骤，以尽量减少其他变量的影响，并标准化基于手术的研究操作。

摘要

深部颈淋巴静脉吻合术（dcLVA）已成为阿尔茨海默病（AD）的一种有前景的治疗策略，相较于目前有限的治疗手段，可带来显著改善。然而，dcLVA的作用机制尚不明确。尽管相关临床试验正在进行中，模拟dcLVA的动物模型仍为探索其机制提供了有价值的工具。本研究旨在建立一种标准化的动物dcLVA模型制备方案，以促进基础研究并应对临床挑战。我们描述了将深部颈淋巴结（dcLN）及其传入淋巴管（ALV）与面后静脉（PFV）进行吻合的手术步骤和关键操作，并详细介绍了两种不同的手术方法：深部颈淋巴结-静脉吻合术（dcLnVA）和深部颈淋巴管-静脉吻合术（dcLaVA）。除了促进淋巴引流外，比较这两种手术方法还有助于我们理解并探索深部颈淋巴结及深部颈淋巴系统在AD发病机制中的作用。总体而言，在大鼠中完整清晰地呈现手术步骤及关键解剖标志，有助于标准化手术操作流程，从而最大限度地减少混杂因素，降低实验间变异，为深入理解相关机制奠定坚实的方法学基础。

引言

阿尔茨海默病（AD）是一种逐渐进展的神经退行性疾病，常导致认知功能下降。AD 的典型病理特征是淀粉样蛋白-β（Aβ）斑块和由异常磷酸化的 tau 蛋白形成的神经纤维缠结。近年来，关于脑淋巴系统的研究为治疗 AD 开辟了新的治疗途径。该系统通过脑膜淋巴管（mLVs）将 Aβ 从脑间质液（ISF）引流至脑脊液（CSF），并进一步输送至深颈部淋巴结¹。2024 年，谢教授团队报道了首例在接受深颈部淋巴-静脉吻合术（dcLVA）后认知功能改善的 AD 患者，并随后启动了一项临床试验（NCT06530732）²。

尽管dcLVA作为一种治疗阿尔茨海默病（AD）的新疗法，为患者带来了令人期待的前景，但其治疗作用的具体机制仍需进一步阐明³。动物模型为研究这些机制提供了不可或缺的平台。深入理解dcLVA的治疗机制，不仅有助于加深对AD发病机制的认识，还将优化手术技术、明确治疗适应证，并最终为患者带来更大的临床获益。

谢教授团队近期报道了一种深颈淋巴管-静脉吻合（dcLVA）模型，证明了将颈外静脉属支与深颈淋巴结相连的可行性⁴。然而，该模型的描述仍不充分。首先，对深颈淋巴结（dcLN）及其周围解剖结构的描述不足。其次，缺乏术后通畅性的客观定量评估。更....

方案

本研究经哈尔滨医科大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）批准（批准号：SYDW2025-037）。实验动物为雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠，体重400-500 g，年龄12-14周，由该校动物中心提供。该中心拥有特定病原体阴性（SPF）级设施，并符合国家繁殖标准。

注意：本研究主要探讨深部颈淋巴管与静脉之间的两种吻合方法。建立深部颈淋巴结（dcLN）与面后静脉（PFV）之间的外科连接，该技术称为dcLnVA；在深部颈淋巴管（dcLaV）与PFV之间创建解剖学连接，该技术称为dcLaVA。我们将详细描述这两种显微外科手术操作，包括其手术方法及吻合后的评估手段。

1. 术前准备

1. 使用异氟烷（3–5%，流速为1–2 L/min）对大鼠进行诱导麻醉。  待动物失去翻正反射后，将异氟烷浓度降低至1.5–2.5%以维持外科麻醉水平。密切监测大鼠的反应，仅在足底反射完全消失时进行下一步操作。
2. 使用钝头针在下一步操作开始前约5分钟，缓慢将伊文思蓝（EB）溶液（约60–100 µL/kg，5%）⁵注入单侧鼻腔的鼻黏膜。将大鼠置于侧卧位，注射EB的一侧朝下，以利于染料在重力作用下引流至深部颈淋巴结，同时防止EB进入对侧鼻孔或呼吸道。
3. 剃除大鼠颈部的毛发，以确保术野清晰。....

结果

dcLnVA 和 dcLaVA 的手术步骤及术后结果各以一例代表性病例进行说明。在 dcLnVA 病例中，发现并分离出位于胸锁乳突肌（SCM）外侧缘的 PFV（直径 2 mm）图1A, 图 S1A在胸锁乳突肌（SCM）与肩胛舌骨肌（STM）之间的间隙内，距穿支静脉（PFV）约4 mm内侧处，发现一枚长椭圆形的深颈淋巴结（dcLN，5 mm × 4 mm × 2 mm），并进行精细分离（图1B，C，图S1B-E）。随后，将夹闭的PFV与分离的dcLN并置图1D沿PFV侧壁做一纵向切口（1.5 mm），并用约1 mL肝素钠溶液（0.1%）冲洗管腔 (图1E- F, 图 S1F）。在dcLN处做一个切口（长2.5 .......

讨论

2012年，ILif 等人首次描述了类淋巴系统⁸2015年，Louveau 等人发现淋巴管腔内存在T细胞聚集结构，并将这些结构命名为脑膜淋巴管。他们进一步证实，脑膜淋巴管与胶淋巴系统和深颈部淋巴结（dcLN）均存在连接。综上所述，在脑淋巴系统（包括胶淋巴系统和脑膜淋巴管）的调控下，脑间质液中的Aβ被引流至脑脊液（CSF），随后进入脑膜淋巴管，最终到达深颈部淋巴结（dcLN）⁹后续的动物实验一致表明，脑膜淋巴功能受损会导致小鼠认知能力下降和Aβ沉积增加¹⁰相反，诸如近红外光照射等可增强脑膜淋巴管功能的治疗策略，已被证明可改善小鼠的认知功能并减轻阿尔茨海默病相关的病理特征。¹¹随着研究的深入，越来越多的证据表明脑脊液外流 通过 颅底部位的脑膜淋巴管在清除效率上比通过蛛网膜颗粒的传统通路更具可信度和高效性。该发现进一步凸显了脑淋巴系统在阿尔茨海默病发病机制及疾病进展中的关键作用。¹²

材料

本文使用的材料清单

姓名	公司	目录编号	评论
0.9% 无菌生理盐水溶液	山东齐都药业有限公司	R9824041307
红霉素软膏	三九药业有限公司	H34020307
伊文思蓝染料 5% (50 mL)	LEAGENE	DK0053
肝素钠溶液 0.1%	BIOSCO	BAC006
显微镊子	ANLIXIN	AT-15
微血管夹	Tigergene	TG-AC-18-Z
青霉素钠	河北远征禾木药业有限公司	JFT230602
白色凡士林	天成	20250202