Method Article

胰腺癌酶反应性角鲨烯-奇胺胺纳米颗粒的开发与疗效

DOI:

10.3791/69875

⸱

March 13th, 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmaceutical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 2Huzhou Institute for Food and Drug Control, 3Academy of Chinese Medical Sciences, Zhejiang Chinese Medical University, 4Institute for Innovation in Modern Traditional Chinese Medicine, The First Affiliated Hospital of Zhejiang Chinese Medical University, Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

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该方案详细介绍了叶酸修饰角鲨烯-千米聚纳米颗粒的合成与特性，评估其酶响应性药物释放及体外细胞摄取，并通过靶向递送应用提升胰腺癌治疗效果。

Abstract

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本文介绍了一种方案，旨在解决胰管腺癌（PDAC）致密细胞外基质（ECM）导致小分子药物肿瘤内穿透受限的问题。前药通过增强药物穿透性和肿瘤杀灭效能，具有克服这一挑战的巨大潜力。角鲨烯（SQ）是胆固醇生物合成的天然前体，具有优异的生物安全和生物相容性，能改善亲水性药物的膜兼容性，并在与化疗剂或生物活性小分子结合时增强其细胞吸收。在这项研究中，我们开发了一种新型亲脂性基于SQ的前药系统：亲水性抗癌药物Chidamide（CHI）通过酰胺键与SQ结合——这是一种对胰腺素和肝蛋白酶B（PDAC微环境中过度表达的关键酶）反应的连接。该结合产生了两亲性SQ-CHI前药，随后自组装成叶酸（FA）修饰纳米颗粒（FA-SQ-CHI NPs）。优化后的NP表现出均匀的流体动力直径为173.3 ± 1.5 nm，多分散指数（PDI）为0.181±0.18，药物载荷能力高达59.0%±0.77%，稳定的Zeta势为-13.10±0.86毫伏。体 外 释放研究显示，NPs在含0.25%胰腺素的条件下，72小时内累计释放率为80.2%±4.22%;而在pH调整缓冲液（pH 4.5或7.4）中，无酶的释放率仅为33%-38%。细胞摄取检测证实，FA修饰显著提高了细胞内递送效率，PDAC细胞（PSN-1和CFPAC-1）在12-24小时内的荧光强度比非靶向NP高出1.8-2.3倍。当前方案提供了综合方法学，用于合成和表征前药，体 外 评估酶响应性释放动力学，并对治疗疗效和组织穿透进行比较分析，突出纳米载体靶向递送、高药物载荷和酶触发控释的核心优势。

Introduction

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胰管腺癌（PDAC）是一种高度恶性的消化道肿瘤，发病率几乎与其死亡率相当，五年生存率仅为8%-9%。复杂肿瘤微环境（TME）是PDAC2的标志性特征。它主要由异常的细胞外基质（ECM）、活化的癌相关成纤维细胞（CAFs）以及极具免疫抑制作用的细胞环境组成。PDAC的ECM富含I型胶原蛋白。其内容改变和异常结构促进肿瘤进展，并与预后不良相关3.CAFs是最丰富的基质细胞，由功能上不同的亚型组成，如产生基质的myCAFs和表现出表型可塑性的炎症性iCAFs4。

在免疫学上，PDAC TME主要由肿瘤前髓系细胞主导。抗肿瘤淋巴细胞稀缺或功能失调。成熟的B淋巴细胞也参与免疫抑制3,4。这些组成部分共同建立了多重治疗障碍。致密的间质质，具有高间质液压力，形成显著的穿透屏障，严重阻碍治疗药物进入深部肿瘤区域，从而大大限制化疗药物的临床疗效5。因此，开发能够突破该基质屏障并深入胰腺肿瘤组织的药物递送系统至关重要。

近年来，角鲨烯（SQ）作为胆固醇生物合成的天然前体，因其卓越的生物安全性和生物相容性而受到广泛关注。由于高度疏水性，SQ可以与亲水性药物结合形成两性前药，从而提高亲水性小分子药物与细胞膜的生物相容性，并增强其细胞吸收效率7。以往研究表明，SQ可与多种化疗药物如顺铂、紫杉醇和吉西他滨共价结合，形成具有高药物载荷能力的前药纳米颗粒，从而改善对实体肿瘤的药物递送8,9。这些特性凸显了SQ在药物递送系统开发中的广泛应用潜力。

为增强肿瘤靶向，本研究采用叶酸（FA）作为靶向配体。FA是一种水溶性维生素，对单碳代谢、生物合成10、氧化还原稳态11和甲基化反应12至关重要。FA通过羧基结合到纳米载体，使得叶酸受体（FR）被特异性识别和结合，随后发生受体介导的内吞作用13。Zheng 等人利用肿瘤细胞增强的通透性和保留效果，利用西方 墨迹法和免疫组化分析了叶酸受体α（FRα）在胰腺癌、正常胰腺、邻近组织及慢性胰腺炎中的表达，并分析其与临床病理特征的相关性。FRα在94.7%（72/76）的胰腺癌病例中表达，与转移相关，但在正常胰腺组织中缺失。FA修饰的纳米颗粒可以选择性地在FR阳性组织中积累，从而实现分子靶向治疗。

Chidamide（CHI）是一种新型组蛋白脱乙酰化酶抑制剂。临床前研究表明，它对胰腺癌和乳腺癌等实体肿瘤具有强效的抗肿瘤活性，并能逆转肿瘤细胞中的耐药性（15,16）。然而，其强烈的亲水性与进入肿瘤微环境的效率低以及在实体肿瘤组织中的分布不均有关，这严重限制了其在胰腺癌的临床治疗潜力5。本研究以chidamide（CHI）为模型药物，提出通过CHI与SQ结合并随后用FA修饰，制备自组装纳米颗粒。该策略旨在通过克服CHI在肿瘤微环境中渗透能力差和在实体肿瘤组织中分布不佳的问题，提升CHI对胰腺癌的抗肿瘤疗效。此外，通过评估CHI在胰腺癌细胞系中的体外疗效，该方法有望显著提升CHI在胰腺肿瘤微环境中的渗透力和细胞毒性效果，从而为指导基于CHI治疗的过程提供实验基础。

我们的研究详细介绍了用于胰腺癌治疗的CHI-SQ-PEG-FA自组装前药纳米颗粒的实验程序。具体来说，我们描述了CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒制备过程的优化与表征，以及体 外 药物释放研究。该过程包括：首先，采用单因子实验方法优化制剂，确定最佳颗粒大小和药物载荷;第二，利用UPLC和MTS测定对纳米颗粒进行表征;最后，建立了 体外 共培养的肿瘤球状模型。利用香豆素-6（C6）作为靶向纳米颗粒的荧光探针，我们进一步验证了纳米颗粒在三维肿瘤球体中的穿透和分布，并获得相关数据。

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Protocol

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1. SQ-CHI和SQ-PEG-FA的合成

  1. SQ-CHI合成：称重120.4毫克（0.3毫米摩尔）的1,1'，2-三角鲨烯酸，溶解于1毫升N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。依次加入NHS（46毫克，0.4毫米摩尔）和EDCI（72毫克，0.38毫米摩尔），并在氮保护下使反应进行90分钟。
  2. 将chidamide（58.56毫克，0.15毫莫尔）溶解于1毫升DMF中，滴入反应混合物中。在室温下、氮气氛围下搅拌72小时。
  3. 完成后，在5-15 kPa的减压下蒸发溶剂，得到原油产物。通过闪光柱色谱法，利用DCM/MeOH（99：1、99：5、85：5）梯度洗脱来纯化粗产物。
  4. SQ-CHI结构验证：将合成的SQ-CHI产物放入玻璃瓶中，并在干燥器真空中干燥24小时。将产物溶解于约1毫升氘氯仿（CDCl 3），并转移到核磁共振（NMR）样品管中。进行 1氢核磁共振分析以确认产物的化学结构17.
  5. 合成SQ-PEG-FA：将41.12毫克1,1'，2-三角鲨烯酸溶解于35微升DMF中。依次加入N-羟琥珀酰亚胺（NHS，15.71毫克）和1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺（EDCI，24.59毫克）到该溶液中。
  6. 让反应在氮气氛围下进行90分钟。将20毫克FA-PEG-NH2 溶解在35微升DMF中，滴入反应混合物中。
  7. 将所得混合物在室温下氮气搅拌72小时。用3千达达MWCO超滤离心管在5,200 x g 下纯化原油，30分钟以去除未反应的游离酸。将纯化后的SQ-PEG-FA复合水溶液放入玻璃瓶中，预冷冻至-50°C。 将预冻溶液在冻干机中液溶干，获得以冻干粉末形式形成的SQ-PEG-FA复合物。

2. SQ-PEG-FA的结构验证

  1. 将冻干的SQ-PEG-FA复合物放入2毫升离心管中，并在真空干燥器中进一步干燥24小时。将产物溶解于约1毫升氘化二甲基亚砜（DMSO-d 6）中，并转移到核磁共振样品管中。进行 1氢核磁共振分析以确认复合物的化学结构。
  2. SQ-CHI-PEG-FA 名义点的制备和表征优化
  3. 称重6.64毫克SQ-CHI，溶解于2毫升绝对乙醇中，制备3.32毫克/毫升（4.3微米）的液料溶液。
  4. 将SQ-CHI乙醇溶液（1、0.2、0.1或0.05毫升）滴入1毫升去离子水中搅拌。搅拌5分钟，然后通过减压蒸发去除乙醇。对所得混合物进行超声处理30分钟，获得CHI-SQ纳米颗粒悬浮液。用Zetasizer测量纳米颗粒的流体动力直径和多分散指数（PDI），以确定最佳配方18。
  5. 在不同的搅拌时间（0、5、10或20分钟）后，滴入0.1毫升SQ-CHI乙醇浓汤溶液中加入1毫升去离子水。在相应搅拌期结束后，通过减压蒸发去除乙醇，随后进行30分钟超声波处理，以获得CHI-SQ纳米颗粒悬浮液。测量流体动力直径和PDI以确定最佳搅拌时间。
  6. 将0.1毫升SQ-CHI乙醇浓汤滴入1毫升去离子水中，搅拌5分钟。搅拌后，通过减压蒸发去除乙醇。对所得混合物进行声波处理，进行不同持续时间（0、5、20或30分钟）以获得CHI-SQ纳米颗粒悬浮液。测量流体动力学直径和PDI以确定最佳超声时间。
  7. 根据上述结果确认最佳条件。这里，得到的水与存液体积比=10：1，搅拌时间=5分钟，超声波处理时间=30分钟。所有实验应独立三份重复，以确保可靠性。
  8. 使用单因素方法，同时保持其他参数不变。依次调整以下因素，以评估其对纳米颗粒颗粒粒径分布和Zeta势能的影响：组分质量比（SQ-CHI：SQ-PEG-FA = 1：0,1：0.05,1：0.5,1：0.7），相体积比（水相：有机相=1：1,1：5,1：10,1：20）和超声波时间（5、15、30、45分钟）。
  9. 根据优化方案，按确定比例混合SQ-CHI和SQ-PEG-FA库存溶液。将这种混合物滴入去离子水中，持续搅拌。继续搅拌5分钟以确保充分搅拌。通过减压蒸发去除乙醇，随后进行探针超声波30分钟，以获得最终的CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒悬浮液。
  10. 利用激光粒子尺寸分析仪，利用动态光散射测量纳米粒子的流体动力直径、尺寸分布（PDI）和Zeta势能。通过透射电子显微镜（TEM，150,000倍放大）和扫描电子显微镜（SEM，80,000倍放大）观察纳米颗粒的形态。
  11. 通过超高性能液相色谱（UPLC）测定药物载荷含量
  12. 色谱条件设置如下：C18柱（2.1毫米 x 50毫米，1.7微米）;流动相：0.1% 甲酸水溶液 - 乙腈（75：25，V/V）;探测波长：258 nm;流量：0.2毫升/分钟;柱温：23°C;注射体积：5微升;片长：10分钟。
  13. 重建CHI-SQ-PEG-FA NP悬浮液，并以7,500 x g 离心30分钟。收集上清液并通过0.22微米微孔膜过滤。使用所得的过滤液作为测试溶液。在指定的色谱条件下注入并分析测试溶液。根据滤液中测得的CHI浓度计算纳米颗粒的药物负载含量。

3. 体外 药物释放研究

  1. 准确地移液将2 mL的新鲜CHI稀溶液或CHI-SQ-PEG-FA纳米颗粒悬浮液移液移液，注入分子量截止值为3 kDa的透析袋中。
  2. 将透析袋浸入含有不同胰腺素浓度（0%、0.05%、0.1%、0.25%）的释放液中。在预定时间间隔（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72小时）从释放液中取出1毫升样本，并立即用等量预热的新鲜培养基替换，以维持沉积条件。
  3. 使用UPLC方法（第3节规定的色谱条件）确定所有样品中CHI的浓度，并计算累计药物释放量。
  4. 使用醋酸铵缓冲液（pH值4.5）作为释放介质。准确地将2毫升纳米颗粒悬浮液移液器移入透析袋（3千达）。将不同的活性单位（0、0.7、1.4、2.8 U）的Cathepsin B直接加入透析袋中。将袋子浸入40毫升释放液中，并在恒温摇杯中孵育，温度为37±0.5°C，转速75转/分钟。在预定时间点（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72小时）取出1毫升样品，并立即用等量的新鲜预热培养基替换，保持系统平衡。
  5. 将采集的样品过滤至0.22微米微孔膜。用UPLC分析滤液以确定药物浓度。计算CHI的累计释放百分比并绘制药物释放曲线。
  6. 准确移液器将2毫升的CHI液或CHI-SQ-PEG-FA NP悬浮液移液至透析袋（3千道达MWCO）。将透析袋浸入含有不同胰腺素浓度（0%、0.05%、0.1%、0.25%）的释放液中。在预定时间点（0.1、0.5、1、2、4、6、8、10、12、24、30、36、48、72小时）取出1毫升样品，并立即用等量的新鲜预热释放液替换，以维持汇内条件。
  7. 通过UPLC定量样品中的药物浓度。计算累计药物释放量并生成释放曲线。
  8. PBS中纳米颗粒稳定性的评估
  9. 将CHI-SQ-PEG-FA NPs与PBS（pH 7.4）混合，比例为1：20（v/v）。将混合物置于恒温摇床中，温度为37 ± 0.5 °C，转速100 rpm。在1、3、6、12、18、24、30、36、42、48、72、96小时取样，以测量流体动力直径和Zeta势。
  10. MTS方法的细胞增殖测定
  11. PSN-1胰腺癌细胞在完整的RPMI-1640培养基中培养。处于对数生长阶段的细胞通过消化，含0.25%胰蛋白酶，在37°C下提取，并重新悬浮至4-6 x 104细胞/ mL的密度，置于全培养基中。悬浮液以每孔100微升的剂量播种到96孔板中，并在37°C、5%CO2 培养箱中预培养2小时，以实现细胞完全粘附。
  12. 吸入原始培养基。建立对照组（空白培养基）和多个浓度梯度的chidamide基团（0.2、2、8、10、20、80 pM），每组有三个重复孔。在每个孔中加入100微升空白或含药物培养基，然后将细胞板转移到培养箱继续培养。用100微升新鲜培养基处理实验组，培养基浓度不同（0.2、2、8、10、20、80 pM）的SQ-PEG、游离CHI、CHI-SQ-PEG或CHI-SQ-PEG-FA非物质，而对照组则接收等量的空白培养基。进一步潜伏96小时后，从每个井中取出含药培养基。
  13. 每孔加入20微升MTS工作液，随后培养4小时。摇晃96孔板15秒以确保均匀性，并立即使用微板读器测量每个孔在490 nm波长下的吸收率（A值）。计算细胞增殖率：用药物治疗组的OD值减去空白组的OD，再除以空白培养基组OD值与空白组OD值的差值，然后乘以100。
  14. 建立 体外 共培养肿瘤球体模型
  15. 将处于对数生长阶段的PSN-1细胞与HPSC细胞以2：7比例混合，并以每孔5,000个细胞密度播种到超低附着的96孔板中。肿瘤球体形成后，用不同的纳米制剂（含香豆素6标记的CHI-SQ-PEG/C6 NPs和CHI-SQ-PEG-FA/C6 NPs）或DMSO作为对照处理球体，并共孵育48、96和144小时以评估药物疗效。
  16. 孵育后，向每个孔加入等量的细胞活化测定试剂。将平板放在轨道摇匀器上摇晃15分钟以确保完全裂解，随后在室温下黑暗中孵育30分钟。
  17. 将细胞裂解液转移到黑色96孔板上。使用多功能微板读取器测量562纳米波长的化学发光信号，以量化细胞的存活能力。
  18. 纳米颗粒细胞吸收的研究
  19. 制备靶向纳米颗粒（CHI-SQ-PEG-FA/C6 NPs）和非靶向纳米颗粒（CHI-SQ-PEG/C6 NPs），并结合香豆素-6（C6）作为荧光探针。常规培养处于对数生长阶段的PSN-1细胞24小时，形成单层。将香豆素6溶解于乙醇中，制备200 μg/mL的库存溶液。将10微升溶液与SQ-CHI和SQ-PEG-FA（或SQ-PEG）以1：0.7比例混合，然后滴入去离子水中搅拌。搅拌5分钟，蒸发去除乙醇，然后进行30分钟超声波处理。最后，通过超滤（3千道达，12,000转/分钟，20分钟）进行纯化，以获得这些物质。
  20. 对细胞的处理方式如下：实验组接受含游离C6、CHI-SQ-PEG/C6 NPs或CHI-SQ-PEG-FA/C6 NPs（最终CHI浓度为5 μmol/L，C6浓度为2.6 μmol/L）的无血清培养基，而对照组则获得等量的空白培养基。
  21. 潜伏4小时、12小时和24小时后，抽取含药培养基。使用4'，6-二胺二酰胺-2-苯吲哆酮（DAPI）19染色细胞核。
  22. 在荧光显微镜下进行观测（40倍，激发波长Ex=360 nm，发射波长Em=477 nm）。通过测量香豆素-6的荧光强度来评估纳米颗粒的细胞吸收情况。

4. 统计分析

  1. 所有实验至少重复3次，以获得本研究中呈现的数据。使用GraphPad棱镜软件分析统计数据。将实验数据呈现为均值±均值标准误（SD），并在适当情况下使用学生t检验、单向方差分析或Wilcoxon检验进行组间比较。统计显著性阈值设为P < 0.05。

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Results

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本研究成功设计并系统评估了一种新型靶向纳米药物递送系统——基于Chidamide Squalenylation Prodrug的自组装纳米颗粒（CHI-SQ-PEG-FA NPs; 图1）。我们合成了CHI-SQ-PEG-FA NPs（图2），并系统评估了包括油水相比（图3A）、搅拌时间（图3B）和超声波条件（图3C）等多个参数对其颗粒大小和多重分散指数（PDI）的影响。此外，在显微镜下观察到了CHI-SQ-PEG-缺血符和CHI-SQ-PEG-FA NP的形态特征（见图4）。该系统在物理特性、药物释放行为（图5）、三维肿瘤模型中的疗效（

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Discussion

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本研究提供了基于纳米颗粒自组装的低腰系统实施的实用逐步指南。本研究获得的自组装纳米颗粒表现出规则球形、良好色散、颗粒大小均匀、高药物负载和封装效率，并表现出令人满意的稳定性21。采用三维肿瘤球体共培养模型（PSN-1/HPSC）评估纳米颗粒穿透性，发现叶酸修饰的CHI-SQ-PEG-FA NPs更有效地穿透肿瘤球体核心。此外，肿瘤球体内的保留时间显著延长。这种增强的保留性可归因于CHI在角鲨烯酰化为纳米颗粒后显著提升的脂溶性。这些纳米颗粒通过肿瘤细胞内吞和细胞间运输促进细胞摄取。因此，它们能够深入肿瘤微环境22。同时，叶酸靶向基团的表面修饰通过叶酸受体介导的胞吞作用进一步增强胰腺癌细胞对纳米颗粒的内吞。该通路由细胞表面叶酸受体的高表达促进，最终提升 体内 药物疗效24。

自组装纳米颗粒具有高药物载荷能力、低毒...

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Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

作者声明不存在利益冲突。

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

这项工作得到了浙江省自然科学基金会（LZ23H290001、LY19H280001年）资助;中国国家自然科学基金资助（82474338和82274364）;浙江省三乡九方农业科技合作项目（2025SNJF075）;以及湖州科技大学院公共福利研究项目（2021GZ261）;以及浙江省教育厅综合科研项目（Y202456442,2025YKJ10）。

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
0.25% 胰蛋白酶-EDTAGibco（美国）25200072
1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）碳二亚胺盐酸盐（EDCI）Sigma-Aldrich（美国）E6383
2毫升低温小瓶康宁（美国）430488
96孔细胞培养板康宁（美国）3598
绝对乙醇中国药品集团有限公司（国药）100092680
丙酮中国药品集团有限公司（国药）32201-2.5L
丙酮腈Tedia（美国）A998-4高效液相色谱级
醋酸铵中国药品集团有限公司（国药）10002861
无水硫酸钠Sigma-Aldrich（美国）31481
生物安全柜美国，Thermo Fisher Scientific公司1380, 1332, 1356
细胞培养瓶康宁（美国）CLS430372
细胞培养箱美国，Thermo Fisher Scientific公司HERA51901126
奇达米德（CHI）深圳微芯生物技术有限公司（中国）纯度>95%
Cytation 5多模式微板读取器BioTek，美国CYT5MV
东风-101S恒温磁加热搅拌器郑州克昌仪器有限公司，中国
二氯甲烷中国药品集团有限公司（国药）80047318
二甲基亚硫酸二甲酯（DMSO）Sigma-Aldrich（美国）D2650
二恶烷阿拉丁（中国）D116156-5毫升
DMEM介质Gibco（美国）12100046
杜尔贝科磷酸盐缓冲盐水（DPBS）Gibco（美国）14040141
乙酸乙酯中国药品集团有限公司（国药）10009460
乙醚中国药品集团有限公司（国药）
FA2004B 电子天平上海天美天秤仪器有限公司，中国FA2004B
胎儿牛血清（FBS）Gibco（美国）10099141C
叶酸-聚乙二醇-胺（FA-PEG-NH亚<亚>22）上海鹏舒生物技术有限公司（中国）PS2-NFA-2000
甲酸阿拉丁（中国）F112034高效液相色谱级
冻干机美国，Thermo Fisher Scientific公司
人类卡特普酶BSigma-Aldrich（美国）SRP0289
人类胰腺癌细胞系（PSN-1，CFPAC-1）美国类型培养收藏（ATCC）CRL-3211，CRL-1918
人类胰腺星状细胞（HPaStec，HPSC）美国类型培养收藏（ATCC）
人类胰蛋白酶Sigma-Aldrich（美国）
盐酸中国药品集团有限公司（国药）CFSR-10011008
倒置显微镜日本奥林匹斯IX83
伊斯科夫改良杜尔贝科介质（IMDM）Gibco（美国）12440053
IX 1000 漩涡混合器 杭州瑞成仪器有限公司，中国第九千年
甲醇中国药品集团有限公司（国药）M433287-10L
甲醇 Tedia（美国）MS1922-001高效液相色谱级
微型离心管（1.5/2.0 mL）Axygen（美国）MCT-150-C
微量移液器（20、100和1000 & mu;L)美国，Thermo Fisher Scientific公司4642050, 4642070, 4642090
Mill-Q水净化系统 美国米利波尔ZR0Q00800
 MTS测定套件（3-（4,5-二甲基噻唑-2-基）-5-（3-羧甲氧基苯基）-2-（4-磺苯基）-2H-四唑）Promega（美国）G3582
N，N-二甲基甲酰甲酰胺（DMF）阿拉丁（中国）
正义乙琥珀酰胺（NBS）Sigma-Aldrich（美国）B81255
N-羟琥珀酰亚胺（NHS）Sigma-Aldrich（美国）56480
Optima Max超速离心机及nbsp;贝克曼，美国393490
青霉素/链霉素溶液Gibco（美国）15140-122
周期酸Sigma-Aldrich（美国）P7875
石油醚中国药品集团有限公司（国药）
苯甲酸甲硫酸（PMS）Sigma-Aldrich（美国）3180806
磷酸盐缓冲盐水（PBS）Gibco（美国）70011069
聚乙二醇-胺（PEG-NHs<>2）上海鹏舒生物技术有限公司（中国）PG2-AM-20k
RPMI-1640 中型Gibco（美国）31800022
硅胶粉末Sigma-Aldrich（美国）53698300网格
碳酸氢钠Sigma-Aldrich（美国）401676
氯化钠中国药品集团有限公司（国药）10019318
二铬酸钠二水合物Sigma-Aldrich（美国）1.93689
角鲨烯Sigma-Aldrich（美国）Y0002131
无菌离心管（15 和 50 mL）康宁（美国）430791, 430828
硫酸中国药品集团有限公司（国药）10021618
四氢呋喃中国药品集团有限公司（国药）34865-4X4L分析等级
超滤离心管（分子量截止：3.5 kDa）贝克曼，美国344088

References

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