本实验方法的完整文字方案可在<a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0101/current/abstract" target="_blank">《细胞生物学实验指南》</a>中获取。

作者无任何利益冲突需要披露。

计数并测定培养细胞的存活率

Counting and Determining the Viability of Cultured Cells

确定培养物中的细胞数量对于标准化培养条件以及进行准确的定量实验至关重要。血细胞计数板是一种厚玻璃载片，其中央区域设计为计数室。将细胞悬液加入指定区域后进行计数，从而计算出细胞密度。

确定培养物中的细胞数量对于标准化培养条件以及进行准确的定量实验至关重要。在本视频中，我们演示如何使用血细胞计数板对细胞进行计数。

确定培养物中的细胞数量对于标准化培养条件以及进行精确的定量实验至关重要。

确定细胞数量和培养物状态对于标准化培养条件以及需要精确细胞数量的实验至关重要。本文将介绍如何使用血细胞计数板进行细胞计数，并计算悬浮液中细胞的浓度。此外，还将介绍如何通过台盼蓝活性检测法（Trian Blue Viability Assay）确定培养物中活细胞的数量。大家好，我是 Ricky，目前位于田纳西州东部分子病理学实验室网络的 Dr.LAN 实验室。今天我将向大家演示如何对悬浮液中的细胞进行计数，以及如何测定其活力。为了准备血细胞计数板以进行细胞计数，首先需要使用 70% 乙醇清洁其表面以及配套的盖玻片。盖玻片和载玻片应保持清洁、干燥，且无绒毛、指纹和水渍。接下来，用自来水稍微润湿血细胞计数板的边缘，然后将盖玻片压在上方。盖玻片应均匀地覆盖在银色计数区域上。现在我们可以开始制备用于计数的细胞悬液了。首先，如果细胞是在单层培养中生长的，则需使用胰蛋白酶将细胞从培养皿表面分离，具体操作可参考视频中关于贴壁细胞的处理方法。待细胞完全从培养皿上脱落之后，根据需要将其稀释，以获得均匀的细胞悬液。使用血细胞计数板时，务必分散悬液中的任何团块。建议每个一平方毫米区域内的细胞计数不超过20至50个细胞。当准备将细胞样品加载到血细胞计数板时，使用微量移液器将细胞悬液转移至血细胞计数板计数室的边缘。将移液枪枪头置于盖玻片下方，加入一滴悬液。悬液将通过毛细作用被吸入盖玻片下方。填充完第一个计数室后，继续填充第二个计数室，即可准备开始细胞计数。让细胞静置几分钟。待细胞沉降后，吸去多余的液体也有助于观察。可使用100倍物镜在显微镜下观察玻片。应观察到网格的中央大区域，该区域由一组三条平行线包围。中央大区域内的每个小分区也由三条平行线包围，并通过单线划分为16个更小的方格。此区域内的细胞应均匀分布，不应出现聚集现象。如果细胞分布不均匀，则需洗涤后重新加样。使用血细胞计数板时，用手持计数器计数四个角及中央方格中的细胞。计数时，仅计入压在方格上方和左侧三线中线上的细胞，不计入压在下方和右侧三线中线上的细胞。对另一个计数室进行重复计数。完成细胞计数后，可计算出每毫升的细胞数量。具体方法是：取每个方格中细胞的平均计数值，乘以稀释倍数，再乘以10,000，即可得到样品中的细胞总数。将每毫升的细胞数乘以取样细胞悬液的总体积。现在我们准备测定悬液的活力。为了测定样品中活细胞的数量，我们将使用台盼蓝：首先在小管中加入0.5毫升4%台盼蓝、0.03毫升HBSS和0.1毫升细胞悬液，充分混匀，室温静置5分钟后，再将悬液加入血细胞计数板。活细胞应不被染色，但死细胞在血细胞计数板下会呈现蓝色。计数细胞总数以及未染色的活细胞总数，并计算样品中活细胞的百分比。操作完成后，用70%乙醇冲洗血细胞计数板的盖玻片进行去污染，然后再用去离子水冲洗。让其自然晾干并储存以备后续使用。我们刚刚向您展示了如何测定培养细胞的数量和活性。以上就是全部内容。感谢观看，祝您所有实验顺利成功。

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计数和确定培养细胞的可行性

Molecular Pathology Laboratory Network, Inc.  重要的是，在培养条件的标准化和进行准确的定量实验确定文化中的细胞数量。在这段视频中，我们展示了如何使用一个hemacytometer细胞计数。

Summary

确定培养物中的细胞数量对于标准化培养条件以及进行准确的定量实验至关重要。血细胞计数板是一种厚玻璃载片，其中央区域设计为计数室。将细胞悬液加入指定区域后进行计数，从而计算出细胞密度。

计数并测定培养细胞的存活率

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