新生鼠中脑多巴胺能细胞原代分离培养

摘要

原代分离的中脑多巴胺细胞培养可用于研究多巴胺神经元的突触前特性。这些培养细胞可用于实时监测多巴胺释放动力学，以及多巴胺胞吐作用调控因子的蛋白质/mRNA水平。本文中，我们将展示如何从啮齿类动物新生个体中建立此类细胞培养。

摘要

建立多巴胺能神经元的原代细胞培养体系，可使研究者在排除脑内其他系统性输入干扰的情况下，独立研究多巴胺能神经元的突触前特性。在本实验室中，我们利用这些神经元通过碳纤维安培法评估多巴胺释放动力学，并通过定量PCR和免疫细胞化学方法检测与多巴胺相关的基因和蛋白质表达水平。在本视频中，我们将向您展示如何从啮齿类动物新生个体中建立此类细胞培养体系。

该过程包括多个步骤，如皮层胶质星形细胞的铺板、胶质基质对神经元细胞培养基的条件化处理、新生幼鼠中脑的解剖、多巴胺能神经元的消化、提取与铺板，以及添加神经营养因子以确保细胞存活。

适用于此类制备的应用包括电生理学、免疫细胞化学、定量PCR、视频显微镜（例如，囊泡与质膜实时融合的观察）、细胞活力检测以及其他毒理学筛选。

方案

培养前的准备工作

注意：** 胶质细胞必须提前足够时间接种，以便有充足时间增殖并覆盖培养皿底部  培养皿。对于具有非典型或实验性遗传背景的小鼠，需确保胶质细胞与神经元培养物在基因型上相匹配。

注意：** 在解剖前 1-7 天，准备新鲜的神经元培养基，并用 2 ml 更换培养皿中的胶质细胞培养基。

注意：** 在解剖前一天，以下物品需在紫外线下照射过夜：

• 4 个解剖用培养皿
• 2 个含微型磁力搅拌子的分离管
• 2 个管盖（顶部扎两个小孔）
• 展开载玻片环（并用 70% 乙醇涂布）——同时保持包装盒打开
• 至少 2 整盒黄色（10–200 μL）移液器吸头
• 1 盒蓝色（100–1000 μL）移液器吸头

培养当天

注意：* 切勿触碰任何经紫外线过夜照射的物品！

在超净台内维持无菌环境非常重要。

1）准备工作：

注意：....

讨论

本文所述方法能够精细解析中枢多巴胺神经元的形态学和神经化学特征，而这些特征在系统性或体内研究方法中通常无法获得。

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材料

本文使用的材料清单

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材料已包含在实验方案正文中。