果蝇幼虫神经肌肉接头突触电位记录的电生理学方法

为了从果蝇幼虫的神经肌肉接头获得稳定的电生理记录，首先解剖幼虫以暴露体壁、肌肉和神经系统，然后进行记录。在腹神经节后方切断中枢神经系统基部的轴突。

然后将记录电极放置在目标肌肉上，将刺激电极置于支配该肌肉的运动神经元附近。将切断的运动神经元轴突吸入刺激电极尖端的微吸管中，即可记录兴奋性接头电位。

大家好，我是来自哥伦比亚大学生理学与细胞生物物理学系McCabe实验室的Wendy MLA。今天我们将向您展示一种用于测量GE幼虫神经肌肉接头处突触传递的方法。在我们的实验室中，利用该方法研究突触生理学和神经传递过程。

那么我们开始吧。实验开始时，解剖游走期三龄和四龄幼虫以暴露体壁。本方案通过使用较短的解剖针，针对电生理实验进行了改良。

这些结构长约两到四毫米，在实验过程中不太可能触及显微镜物镜或电极。暴露体壁后，用镊子夹住中枢神经系统并轻轻提起。随后切断周围神经的运动轴突，并移除脑组织。

去除脑组织后，用含1毫摩尔钙的HL 3.1缓冲液将解剖好的样本清洗两次。解剖完成后，即可对幼虫肌细胞进行细胞内记录。将解剖板置于电生理显微镜下，并用含钙的HL 3.1缓冲液浸没样本。

然后固定浴电极，使其与溶液接触。使用吸吮电极刺激支配肌肉的外周神经。首先将吸吮电极放置在培养皿中，以避免在将细胞内电极置于肌肉上时产生振动。

将电极放入培养皿后，将其置于支配第六块肌肉的运动神经元附近。在第三腹节，施加轻柔的负压，直至切断的神经进入玻璃微量移液管内。施加负压时需小心，避免拉伸神经。

将移液器略微上提，使其不接触肌肉。然后调整其位置，避免牵拉已切断的神经纤维。一旦吸电极就位，立即调整记录电极以进行细胞内记录。

使用充满 3 摩尔氯化钾的锋利微电极。将记录电极置于第六块肌肉的中心上方。调节输入偏移，使其在浴液中读数为零。

在高倍光学放大下缓慢降低电极，接近肌肉直至接触肌肉表面。为确认肌肉已被刺入，请观察示波器，静息膜电位应至少为负60毫伏。

现在应可见偶发的微小神经突触电位。待记录电极就位后，让细胞稳定一分钟。在开始记录之前，使用Axon HS-2型前置放大器和Axon Clamp 2B放大器来检测膜电位的变化。

通过将轴突钳制器B接口连接至运行P钳制软件的计算机，并利用1322A数字信号转换器对信号进行数字化处理，将膜电位记录在个人电脑上。使用X钳制软件向运动轴突施加刺激，以产生兴奋性膜电位或EJPs。

生成终板电位（ejs）后，在无刺激突触条件下记录三分钟内的微小终板电位。可使用Mini Analysis软件分析记录曲线，测定微小EJP的幅度和频率。以生成终板电位（ejs）。

使用主控八脉冲发生器刺激运动神经元的切断端。该发生器输出0.3毫秒的方波电压脉冲。刺激之间设置5秒的时间间隔，以允许突触恢复。

在神经肌肉接头处，从每块肌肉至少记录10个诱发电位，并对波幅进行平均。该图显示了从野生型黑腹果蝇三龄幼虫第六肌节记录到的典型轨迹，其中包括诱发出的兴奋性接头电位（EJP）反应以及自发的微型兴奋性接头电位（mini EJPs）。我们刚刚向您展示了如何记录果蝇幼虫神经肌肉接头的细胞电位。进行此操作时，需注意务必在3至10分钟内完成解剖，并立即开始电生理记录，以确保细胞仍处于健康且具有反应性的状态。

如果解剖耗时过长，肌细胞的静息膜电位将低于负60毫伏，此时电位过低而无法记录。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利。