2006年11月30日
本视频及实验方案旨在帮助学习核移植技术。
因此我们进行核移植,因为我们的研究团队对重编程感兴趣。这是一个非常有趣的过程,其中已分化的细胞核可以被重编程回到胚胎状态。这些是试剂盒 SUM 和 HCCV,这是透明质酸酶。
首先,我准备一个培养皿,将其放入二氧化碳培养箱中进行平衡。这些是若干滴液滴,用矿物油覆盖,以校准二氧化碳环境。
现在制备一滴 HCZB,用于洗涤。该液滴在培养的第几天时制备,并再次用矿物油覆盖。
这个较高,加入透明质酸酶后会降低。这里的部分只是 HCCP 滴液,用于洗涤。
这是用于从 O 侧去除 ulu 细胞。此阶段会进行加热,因此会持续升温,直到我回来从小鼠身上获取油滴信号,并用矿物油覆盖所有内容。此处的 PVP 液滴用于清洁针头以及放置细胞,这是 HCCB 加 Cyla B。接下来我将进行操作。
好的,这是针的颜色。现在我要拉一根针。好了,现在我有了一根非常好的针,非常细。
现在这是一个微型熔炉。我需要在特定位置切断针头,以获得合适尺寸的持卵吸管。我加热玻璃球,将针头向下移动使其熔接到玻璃球上,现在针头已折断。
我将这个推离。你会看到断裂的针头是完好的。现在我来到这里下方,向上加热。
现在玻璃球会变红,会熔化,推动玻璃球,它会形成一个弯曲的形状。这样就可以了。我将其移开。
你看,然后我插入针头。我们刚刚将持卵管插入这个头部。现在将其重新插入显微镜中。
微量移液器、毛细管,以及已装入汞的部件。我将它装入此吸头中。用汞将此处的毛细管填充。
将其插入内部。将针头置于此处的头部,拧紧后拉回。
顺时针旋转此处会将汞推向前方,以便您能够看到它。现在将针尖插入油中。看到了吗?接下来我向下移动针头以调整视野。
排出一些汞滴,然后吸入一些QVP。这样就可以了。然后再将其向上移动。
我前往HCCB并沿着孔向下移动。我的头部到达P点,即小鼠移液管位置。我需要准备一根毛细管并将其插入此处。谢谢。已经完成。很好。
制作一些毛细管。好的。然后放入管道中。我是Ley。
我来自瑞士,一年前开始这项工作,来到K'S实验室学习核移植技术。这里确实是极佳的工作场所。当然,这是一项非常复杂的实验,在操作过程中可能会遇到诸多问题。
因此,当你开始操作时,可能会遇到许多细胞在诱导成核或进行转移时发生裂解的问题。或者,即使成功完成了转移,却发现细胞无法正常发育。这些情况可能由多种原因造成。
我的意思是,你可以从所有位点的培养体系开始。因此,总是需要一些对照,例如遗传对照或某些受精卵,以测试培养体系和培养箱。此外,你还需要提高显微镜操作技能。
因此,这需要大量练习,直到你能稳定地充气侧边并顺利回转。这只是一个练习的问题,可能需要几周或几个月的时间才能熟练掌握。一旦掌握,就可以进行长时间的实验了。
因此,最好预留一整天的时间来完成这项工作。此外,操作初期的一个难点是小鼠移液。为了避免产生气泡,需要很好地控制操作,防止失去视野,尤其要避免损伤克隆;因为外层的索氏囊(sonar lucita)是开放的,实际上在用口吸移时可能损伤该克隆,导致其从索氏囊中泄漏出来。
因此,在使用该嘴管时还需注意避免有油进入其中,既不能吸得过多,也不能吹得过猛,但这项技能相对容易掌握。
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本视频及实验方案旨在帮助学习核移植技术,该过程是将已分化的细胞核重编程为胚胎状态。
核移植能够将已分化的细胞核重编程至胚胎状态,为靶点验证中的表观遗传去风险化提供了一种机制性模型。该方法有助于提升对再生医学及干细胞衍生疗法相关细胞重编程策略的预测可靠性。理解核重编程的原理有助于阐明分化与衰老过程的可逆性,从而推动早期阶段的科学发现。
该方法适用于从靶点假设验证到先导化合物鉴定的整个发现流程,尤其适用于表观遗传机制验证和细胞重编程检测。