使用葡聚糖硫酸钠（DSS）建立小鼠结肠炎模型

小鼠自由饮用含3% DSS的水溶液，持续四天。每天记录小鼠体重以及腹泻和粪便潜血情况，第四天后将DSS溶液更换为高压灭菌水。再饮水三天后，对小鼠实施安乐死并取出结肠。

对结肠进行测量和称重。随后将结肠制成瑞士卷状或香肠状，并在显微镜下进行观察。本视频文章将演示在结肠炎的murn模型中结肠的收获与处理过程。

该实验步骤用于范德堡大学癌症生物学系Christopher Williams博士实验室在开始葡聚糖硫酸钠处理前研究结肠炎。在整个实验过程中获取小鼠的基础体重。在对小鼠称重后，每日记录体重，并配制3%（重量/体积）的葡聚糖硫酸钠盐溶液（DSS水溶液）。

为确保该模型有效，DSS 必须为低分子量。配制足量的 DSS 溶液以填满每笼小鼠的水瓶，并使用 0.45 微米醋酸纤维素滤膜过滤溶液。将小鼠笼具中的饮用水瓶更换为含有 3% DSS 溶液的水瓶。如果您的机构使用自动化供水系统，请在供水口安装隔离帽，以确保小鼠无法接触任何其他水源。

四天后，再次称量小鼠体重，以量化结肠炎的全身性影响。严重损伤常导致体重下降，但在当天可能尚不明显，需再过数日才可观察到。第四天，将DSS溶液更换为水，持续三天，以允许结肠上皮部分恢复。

三天后，即第七天，再次称量小鼠体重。随后可按照下一节所示方法，从处死的小鼠中取出结肠。取出结肠时，应将处死的小鼠腹侧朝上暴露，以确保充分暴露腹部，便于操作。

用70%乙醇完全润湿腹部。用组织镊夹住腹部中线并提起，用尖头剪刀将皮肤撑起形成帐篷状。

切开腹部以暴露腹腔内容物。将切口向上延伸至中线的剑突尖端，然后沿两侧肋缘下方向外延伸。辨认小肠、盲肠和结肠。

仔细分离结肠与周围肠系膜。随后横断结肠，向盆腔深部延伸，将远端结肠与直肠分离。

操作时应注意避免切断任何动脉或静脉。同时需注意结肠容易撕裂，因此应轻柔地将结肠从肠系膜中分离。

在结肠吻合边缘横断结肠，游离近端结肠。使用20号喂养针头和10毫升注射器取出结肠并进行灌注，用预冷的PBS冲洗结肠，直至肠腔内完全无粪便残留。操作过程中需保持结肠的正确方向，使结肠远端始终最靠近操作者。

首先使用数显卡尺测量结肠长度。结肠长度是评估损伤严重程度的另一项指标。结肠炎会加重水肿，并导致结肠总长度缩短。

此时，收获的结肠可加工成香肠状用于宏观分析，或制成瑞士卷状用于急性结肠炎的组织学分析。我们将在后续部分演示将结肠处理为香肠状的技术。为了对整个结肠进行宏观分析，保持结肠的正确方向至关重要。因此，请将结肠的远端靠近您放置。

剪下两段不可吸收缝线，一段长约一英寸，另一段长约两英寸。使用两英寸的缝线尽可能靠近边缘结扎结肠远端，同时仍保持良好的密封。然后将含有5毫升10%磷酸盐缓冲福尔马林的20号喂养针插入结肠近端。

在喂养针头球部近端的缝线剩余部分打一个松结。现在用手在喂养针头球部处牢固握住结肠，并注入足量的福尔马林，确保结肠充分扩张。在撤出喂养针头的同时收紧缝线结，从而保留已灌注并扩张的结肠。

将结肠放入一个15毫升的锥形管中，管内预先装入10%缓冲福尔马林磷酸盐溶液，并标记管子。固定24小时后，将福尔马林倒入适当的废液容器中，更换为70%乙醇继续固定24小时。

结肠可在室温下长期保存于70%乙醇中。当准备分析结肠时，将其从锥形管中取出，用手术刀小心剪去两端的结扎线，注意不要损伤结肠组织。

请注意，远端是带有最长一段细绳的一端。从远端向近端纵向剪开结肠，使其展开成一片长条状组织。现在可在解剖显微镜下观察结肠。

沿纵轴切开结肠，并将其平铺成片状。卷制结肠需要使用两把镊子并采用双手操作技术。用镊子夹住远端结肠边缘的两侧，通过旋转并交替松开镊子，从远端向近端依次卷起结肠，从而形成具有三维结构的螺旋卷，即瑞士卷状。

如果结肠粘附在沃特曼滤纸上，用少量磷酸盐缓冲液（PBS）润湿滤纸和结肠以保持其形态。用镊子牢固夹住肠段，使用27½号针头进行横断切割。当针头穿出肠段时将其弯曲，以固定肠段卷。

现在，将组织卷放入已标记的组织包埋盒中，并将包埋盒置于盛有10%中性缓冲福尔马林磷酸盐溶液的容器内。于室温下放置24小时以固定组织。24小时后，倒去福尔马林溶液，更换为70%乙醇，继续固定额外的四小时。

结肠可在室温下于70%乙醇中无限期保存。该模型使研究人员能够获取、固定并分析结肠，从而评估结肠炎的严重程度。对于整个结肠的大体分析，可将结肠作为香肠状结构进行处理，通过灌注甲醛并使其完全扩张。

打开的肠段应平铺放置。如果肠段处理操作正确，固定的结肠将呈现扩张状态，整个黏膜表面可轻松进行操作，并可在解剖显微镜下清晰观察。对于组织学分析，结肠可按瑞士卷法（Swiss roll）进行处理。

用针固定卷状组织，并将其放入组织包埋盒中进行固定。当切片并贴片时，若卷制得当，该卷状结构应能形成代表整个结肠的切片；瑞士卷的切片可用苏木精和ASIN染色，以确定结肠损伤的程度。需注意，在载玻片上，结肠的远端位于卷状结构的中心。

在此示例中，与水处理对照组相比，DSS处理的结肠显示出明显的炎症和隐窝损伤。我们刚刚向您展示了如何从急性结肠炎小鼠模型中收获并处理结肠。在执行该操作时，重要的是在处死动物前做好充分的准备工作。

例如，小鼠的所有导管和盒式容器均需为每只小鼠贴上标签，并确保所有工具和试剂均易于取用。此外，应详细记录小鼠的体重和结肠长度。最后，确保为样品处理预留充足的时间。

初学者通常每只小鼠需要15分钟，而熟练掌握该技术者则需要6到8分钟。