小鼠结肠炎模型使用葡聚糖硫酸钠（DSS）

小鼠在时给予 3% DSS，持续 4 天。虽然每天记录体重和腹泻和粪便血的存在，但第 4 天后用高压灭菌水代替 TSS。在水中放置三天后，对小鼠实施安乐死并切除其结肠。

测量和称重结肠。然后将结肠制成瑞士卷或香肠，并在显微镜下检查。本视频文章将演示结肠炎 murn 模型中结肠的收获和处理。

在开始硫酸糊精钠治疗之前，该程序用于在范德堡大学癌症生物学系的 Christopher Williams 博士的实验室中研究结肠炎。在整个实验过程中获得基线权重。称量小鼠后取每日重量，每体积重量为 3%，硫酸糊精钠盐溶液或 DSS 在水中。

DSS 必须具有低分子量才能使该模型有效，制备足够的 DSS 溶液以填充每个笼子小鼠的水瓶，并用 0.45 微米醋酸纤维素过滤器过滤溶液。将小鼠笼中的饮水瓶更换为含有 3%DSS 溶液的瓶子。如果您的机构使用自动浇水系统，请在浇水口上放置排除提示，以确保老鼠无法获得任何其他水源。

四天后，再次称重小鼠以量化结肠炎的全身后果。体重减轻在严重损伤中很常见，但在同一天多几天内可能并不明显。第 4 天，用水更换 DSS 溶液再放置 3 天，以允许一些结肠上皮恢复。

三天后，第七天，再次称重小鼠。然后可以从安乐死的小鼠中收获结肠，如下一节所示。要收获结肠，请暴露安乐死小鼠的腹侧，以确保畅通无阻地进入腹部。

用 70% 乙醇完全润湿腹部。用组织镊子抓住腹部中线并抬高。因此，使用细尖剪刀在皮肤上搭帐篷。

切开腹部，露出腹内容物。在中线处将切口延伸到剑突的尖端，然后沿着肋缘的下侧向双侧延伸。识别小肠盲肠和结肠。

仔细解剖、切割、从周围的肠系膜挑逗结肠。之后，横切结肠，加深骨盆以释放。直肠的远端结肠。

应小心，以免割断动脉或静脉。另外，请注意结肠很容易撕裂。因此，轻轻地从肠系膜中取出结肠。

在 Colona 后遗症边缘横切结肠以释放近端结肠。使用 20 号饲针和 10 毫升注射器插管取出结肠和总结肠，并用冰冷的 PBS 冲洗结肠，直到 EIT 完全清除粪便。通过保持结肠的远端最靠近您来保持结肠的正确方向非常重要。

首先使用数字卡尺测量结肠长度。结肠长度是损伤严重程度的另一个指标。结肠炎会增加水肿并缩短整个结肠长度。

此时，收获的结肠可以加工成香肠进行宏观分析，也可以制成瑞士卷用于急性结肠炎的组织学分析。我们将在以下部分中演示这些技术，将结肠加工成香肠 对于整个结肠的宏观分析，保持结肠的正确方向很重要。因此，请保持结肠的远端最靠近您。

剪下两根不可吸收的缝合线，一根长约 1 英寸，另一根长约 2 英寸。使用两英寸的缝合线将结肠的远端尽可能靠近边缘系紧，同时仍保持良好的密封。然后将含有 5 毫升 10% 缓冲福尔马林磷酸盐的 20 号饲针放入结肠近端。

剩余的缝合线松散地系在紧邻喂食针球的近端。现在牢牢抓住结肠的喂食针球，并注入足量的福尔马林，确保结肠扩张。在抽出喂食针头时收紧缝合线中的结，从而留下输注的扩张结肠。

作为香肠，在 15 毫升锥形管中加入 10% 缓冲、甲醛和磷酸盐，并在管中贴上标签。将结肠放入试管中并固定 24 小时。24 小时后，将福尔明倒入适当的废液容器中，并用 70% 乙醇替换再 24 小时。

结肠可以在室温下无限期地储存在 70% 乙醇中。当您准备好分析结肠时，请将其从锥形管中取出。用手术刀剪断每一端的绳子，小心不要损坏结肠。

请记住，远端有最长的绳子。从远端到近端纵向切开结肠，使其形成长片。现在可以在解剖显微镜下观察结肠。

纵向切开结肠，将结肠铺成平板。滚动结肠需要两对镊子和双手技术。用镊子抓住远端结肠边缘的两个外侧边缘，通过旋转和释放镊子到近端边缘，依次滚动结肠，从而产生具有第三维或瑞士卷的螺旋。

如果结肠粘附在 watman 纸上，请用少量 PBS 润湿纸和结肠以保持形状。用镊子牢牢抓住卷，并用 27 号半号的针头横切。在针离开卷时弯曲针以固定卷。

现在，将卷放入贴有标签的组织盒中，并将盒放入装有 10% 缓冲福尔马林磷酸盐的罐子中。将其在室温下放置 24 小时以固定组织。24 小时后，倒出福尔马林并用 70% 乙醇替换再 4 小时。

结肠可以在室温下无限期地储存在 70% 乙醇中。该模型允许研究人员获取、修复和分析结肠，从而允许分析结肠炎的严重程度。对于整个结肠的宏观分析，结肠可以加工成注入福尔马林并完全膨胀的香肠。

打开的香肠应该平放。如果正确执行了香肠方法，固定的结肠将被扩张，并且整个粘膜表面可以很容易地作和在解剖显微镜下观察。对于组织学分析，结肠可以处理成瑞士卷。

用针头固定卷筒并放入组织盒中进行固定。当卷被切割和安装时，如果卷得当，它应该形成整个结肠的代表性切片，瑞士卷的部分可以用血红素和 ASIN 染色，以确定结肠损伤的程度。记住结肠的远端位于载玻片上卷的中心。

在这个例子中，与水处理的对照相比，DSS 处理的结肠中的炎症和隐窝损伤很明显。我们刚刚向您展示了如何从急性结肠炎的小鼠模型中收集和处理结肠。执行此程序时，请务必在牺牲之前组织良好。

例如，小鼠为每只小鼠标记了所有试管和盒，并且所有工具和试剂都已准备就绪。此外，保留小鼠体重和结肠长度的详细记录。最后，确保您已分配足够的时间进行处理。

对于新手来说，每只鼠标通常需要 15 分钟，对于对这项技术更有经验的人来说，每只鼠标需要 6 到 8 分钟。