体外肠道模型评估细菌黏附与内化

从含有上皮细胞和杯状样细胞共培养物的Transwell小室开始。

上皮细胞形成紧密连接，而杯状细胞则产生黏液，从而模拟体内肠道上皮屏障。

取经模拟肠液处理以模拟小肠消化的口腔菌群悬液。

用细菌悬液替换上室中的培养基。

振荡孵育以促进细菌黏附和内化。

收集上层腔室中含有非黏附细菌的培养基，用于后续的活力检测。

加入黏液溶解液并孵育，以溶解黏液并释放黏附的细菌。

收集溶液，用于进一步分析细菌的活性和黏附能力。

用缓冲液洗涤细胞，并加入去污剂以使细胞脱落。

收集细胞悬液。

涡旋悬浮液以裂解细胞并释放内化细菌。

离心并分别收集上清液和细胞碎片，用于后续分析。

根据文本方案洗涤并调整小肠消化物的细胞密度后，移除Transwell系统中的顶侧培养基，并加入1.5毫升细菌悬液。

在常规细胞培养条件下共培养系统2小时。加入0.5毫升含10毫摩尔浓度N-乙酰半胱氨酸的HBSS，以溶解HT29-MTX细胞产生的黏液，并回收黏附的细菌。

将培养板在37摄氏度下振荡孵育1小时。收集NAC-HBSS至微量离心管中，用1毫升DPBS洗涤细胞两次。在单层细胞上加入0.5毫升0.5%的Triton X-100，通过移液吹打裂解细胞。

然后迅速用涡旋振荡器重悬液体1分钟。速度至关重要，以避免洗涤剂对细菌细胞造成损伤。根据文本方案分析样品。