小鼠神经干细胞移植手术与器官的诱向性鼠肝炎病毒感染小鼠的脊髓

该程序的总体目标是通过将神经干细胞移植到 JHMV 感染小鼠的脊髓中，促进已建立脱髓鞘的动物的髓鞘再生和临床改善。这是通过首先准备动物来完成的。手术的第二步是在胸椎进行椎板切除术。

然后将 10 个细胞注射到暴露的脊髓中。注射成功后，伤口闭合。最终，脊髓中存在小鼠神经干细胞。

实质可以通过荧光显微镜、神经干细胞移植到 JHMB 脊髓等方法进行可视化。感染小鼠可以帮助回答治疗脱髓鞘疾病的细胞替代疗法领域的关键问题，例如细胞如何迁移、增殖和分化，以及细胞如何影响中枢神经系统。如果我们能改变它们被移植的细胞或脊髓环境，以增强它们的治疗效果。

虽然这种方法可以深入了解脱髓鞘病毒模型中的细胞替代疗法，但它也可以应用于其他脱髓鞘和损伤模型，例如实验性自身免疫性脑脊髓炎、EAE 和脊髓损伤。在准备注射细胞之前，请准备所有必要的溶液。接下来，对所有设备进行清洁和消毒。

准备手术区域并设置微型纵器以准备用于移植胰蛋白酶眼的细胞，并将它们重悬于 50 毫升锥形小瓶中。在 HBSS 中洗涤要移植的细胞 3 次。在最后一次旋转之前对细胞进行计数。

最终离心后，离心倒出 HBSS，并将样品瓶倒置，以防止液滴到达沉淀。用紫外线照射的无菌 Kim 湿巾擦干内壁。不要让颗粒干燥。

缓慢而非常小心地将管子直立。将细胞重新悬浮在最终所需体积的 HBSS 的一半中。最终，细胞的浓度应为每微升 100， 000 个细胞。

通过将悬浮液移液到移液器吸头中，然后调整移液器上的刻度盘，直到整个悬浮液都在移液器吸头中，来测量总体积。这将告诉您所需浓度需要多少 HBSS。将细胞调高至所需体积。

通过添加 HBSS.您可以将细胞转移到 eph 管中。将它们放回冰上。

如果细胞必须在冰上放置超过两个小时，请检查细胞的活力。要开始外科手术，请通过脚趾捏反射确认适当的麻醉水平。使用电动剪刀将鼠标的背部从下背部剃到颈部。

剃光该区域后，涂抹一层薄薄的脱毛霜以去除任何残留的毛发。一到两分钟后，用干纱布将该区域擦拭干净，然后用肥皂水轻轻浸泡。手术区域现在应该没有毛发。

最后，用 Betadine 溶液对准备好的区域进行消毒，并在眼睛上涂抹软膏。为避免干燥，请将鼠标背面朝上。在椎板切除术部位做一个切口，从大约胸椎开始。

T 8 到 T 11。夸大脊柱的弯曲并找到 T 10。它是第一块具有扁平突起的椎骨，通常是两个椎骨喙部到脊柱曲率的顶点。

用灰色镊子牢牢固定脊柱。在 T 9 处，用手术刀在 T 10 和 T 11 的两个多刺突起之间的空间上划线。接下来，刮掉肌肉层，露出下面的骨头，确保剪刀的曲率远离绳索。

慢慢地将剪刀的一个刀片插入 T 10 和 T 11 之间。在脐带和 T 10 的椎弓根之间滑动刀片，然后剪断椎弓根 在另一侧重复。提起薄板，露出下面的绳索，然后小心地将其剪断。

确保不要留下任何游离或锯齿状的骨头碎片。清除所有骨头碎片后，用无菌棉签擦去血迹。首先，将针头与针螺母连接，准备 Hamilton 注射器。

插入柱塞并用水冲洗数次。70% 乙醇和 HBSS 清洁后。拆下柱塞并松开针形螺母。

将针头从注射器中拉出，以防止背压。加载细胞时，通过将移液器尖端紧紧压入注射器背面，将 15 μL 细胞加载到注射器中。将柱塞插入约 5 毫米，然后拧紧针形螺母。

按下柱塞，直到看到一些细胞悬液从针头中流出。确保注射器中没有气泡，并将注射器水平放置，以防止细胞在重力作用下形成梯度。回到动物身上，使用止血钳夹住 S 棘多西肌。

连接 T 8 和 T 9 的棘。将止血钳夹在左侧微型机械手臂上，使鼠标的前爪和后爪悬在空中。轻轻触摸无菌纸巾平台。

将注射器以 70 度角连接到右侧微型机械手臂上，并在夹紧前将注射器滑到尽可能低的位置。通过将鼠标的尾巴固定在纸巾上来稳定鼠标。慢慢地将针头放向脐带。

将尖端通过背中线插入对侧半球 1 毫米。针尖应在灰色垫中或靠近中央管，但不在中央管中。以每 5 秒 1 μL 的速度缓慢注入 2.5 μL 细胞。

注射细胞后，等待 10 秒并收回针头。第 10 个回合。每 10 秒以此速度缩回，直到针头从电源线中伸出。

过快地注射细胞或过快地拔出针头可能会导致细胞悬液的 flx。如果发生这种情况，请从研究中丢弃鼠标。从脐带上取下后，快速缩回针头并将注射器从微型机械手臂上拆下。

再次，将其水平放置。松开鼠标并将其转移到缝合台上。对每只小鼠重复此过程，直到注射器排空。

丢弃细胞，如果可以看到结块，则重新加载，在两次加载之间冲洗和清洁注射器。注射后，将动物转移到单独的位置进行缝合。将缝合针穿过切口两侧的浅筋膜。

将缝合线拉过，使筋膜合拢，并在去除的椎板部位覆盖暴露的脊髓。使用镊子中的持针器打结三个结，并尽可能多地修剪威胁。一次缝合通常就足够了，同时从小鼠身上拉开皮肤。

为避免缝合下面的肌肉，请用两到三个钉子闭合切口。伤口闭合后，将 0.5 毫升乳酸林格溶液皮下注射到下背部，但要远离切口。将鼠标侧卧放在笼子里，确保手术部位不接触笼子床上用品。

监测动物直到完全恢复。该图显示了 GFP 标记的小鼠神经干细胞成功移植到脊髓冠状切片中。移植后 21 天。

看完这个视频，你应该对如何将神经干细胞移植到 JHMV 感染小鼠的脊髓有一个很好的了解一旦掌握。可以在大约 3 小时内对 40 只小鼠执行这项技术。