睾丸被膜内畸胎瘤生成

本实验的总体目标是通过将人多能干细胞（H PSCs）注射到免疫缺陷小鼠的睾丸被膜下以形成畸胎瘤，从而检测细胞的多能性。首先，收集待检测多能性的疑似 H PSCs 细胞培养物。随后进行手术暴露小鼠睾丸，并将细胞注射至睾丸被膜内。

将睾丸放回其原始位置，并在六到十二周后手术缝合小鼠背部，通过组织学检查所形成的肿瘤，观察是否存在来自三个胚层的细胞。最终，通过证明该 HPSC 细胞系能够在免疫缺陷小鼠体内分化为来自全部三个胚层的细胞，即可证实其具有真正的多能性。尽管近期已有新方法被报道用于验证人类干细胞的多能性，畸胎瘤实验仍是该领域的金标准。本实验操作由本实验室高级技术员 Tron 演示。

将人多能干细胞培养至汇合，然后使用Accutase消化H PSEs，计数细胞并重悬，每注射含有100万个HPC。首先，使用剃毛器剃除6周龄雄性免疫缺陷小鼠腹部的毛发。用聚维酮碘溶液清洁小鼠腹部前壁，从腹部中心开始，顺时针方向向外擦拭。

然后用70%乙醇擦拭剃毛区域。重复此过程三次，每次更换棉签。进行手术操作时，将动物转移至无菌操作台内的加热垫上，并使用无菌手术剪。

用镊子夹住腹膜，在髋关节下方水平处的皮肤和腹膜上做一个一厘米长的纵向切口。用另一把无菌镊子伸向右侧髋部，将白色脂肪组织连同附着的睾丸一起拉出。现在用一支1毫升结核菌素注射器吸取待注射的hPSCs，缓慢地将20至30微升的hPSCs注入睾丸白膜的中心部位，避开任何主要血管。

使用镊子缓慢拔出针头，以避免细胞回流。将睾丸和脂肪组织移回腹腔内的原始位置。用两到三根可吸收缝线缝合腹膜，并用自动夹闭器关闭皮肤。

术后根据需要每天给予两次镇痛处理。在6至12周内监测动物是否有可触及的肿瘤生长。当肿瘤直径达到约5毫米时，处死小鼠并取出肿瘤进行记录。

拍摄肿瘤照片并测量其大小和重量。然后将肿瘤切成小块，置于4%多聚甲醛溶液中固定，用于组织病理学分析。通常在6至12周后可观察到畸胎瘤。

在此示例中，将一百万个WA oh九人源多能干细胞注射到免疫缺陷小鼠的睾丸被膜内。对畸胎瘤进行仔细观察，可见其具有异质性，并存在多个附着的囊肿。结果符合预期。

组织病理学分析表明存在来自三个胚层的细胞。在进行该实验操作时，重要的是要包含一个已知具有较强分化潜能的阳性对照细胞系，以确保实验操作正确无误。观看本视频后，您应能够清楚地了解如何判断一个人类干细胞系是否具有多能性。