跨物种移植神经嵴迁移和分化的分析

该程序的总体目标是将鹌鹑胚胎的背神经管外侧移植到分阶段匹配的鸡胚胎中，以追踪神经嵴细胞的迁移和命运。这是通过首先在宿主鸡胚胎的 IGN 膜上撕开一个小孔以进入神经管来实现的。然后将供体鹌鹑胚胎从卵子中取出，为移植物切除做准备。

在下一步中，从宿主胚胎的神经管中切除感兴趣的区域。然后从供体神经管中切除一个类似的区域进行移植。接下来，将供体神经管移植到宿主神经管中。

最后，将嵌合胚胎孵育至所需阶段，以检测所选器官中到达的神经嵴细胞。最终，可以通过免疫荧光显微镜观察供体来源的神经嵴细胞向宿主胚胎中不同位置的迁移和分化。这种方法的视觉演示至关重要，因为显微解剖和嫁接步骤需要非常精细的运动技能，因此难以学习。

首先用温水清洗雏鸡蛋中的所有碎屑。将鸡蛋水平排列在托盘上，然后用铅笔标记正面朝上的侧面，以表示胚胎将定位的区域。对于供体胚胎的 X 卵制备，孵育鹌鹑腿的钝侧。

接下来，将鸡蛋放入 38 摄氏度的加湿培养箱中，并打开摇晃功能。种蛋完成后，孵化 用 70% 乙醇喷洒顶部，然后用 kim 湿巾快速擦去 为避免通过种蛋吸收，将每个灭菌的种蛋放在一个单独的蛋架上，类似于这里看到的衬有折叠 Kim 湿巾的培养皿。然后使用消毒的 AA 镊子，在鸡蛋尖头的蛋壳上表面敲一个小孔。

为一个 5 毫升注射器配备一个 18 号半规格的皮下注射针头。然后，将斜面朝向鸡蛋的尖头，将针头垂直插入蛋壳的孔中。为避免因吸力意外损坏蛋黄，请像以前一样用 70% 乙醇清洁孔，并用透明胶带密封孔。

然后用双 A 镊子，在水平腿的标记上表面敲击另一个孔，不完全在顶点。接下来，将弯曲的虹膜镊子的一侧插入与鸡蛋平行的孔中。然后，Shell 向下捏住 Shell 并以圆周运动进行工作。

破开一扇直径两厘米的窗户，把鸡蛋壳扔掉。胚胎应该在蛋黄顶部显示为不透明的圆盘。丢弃任何未受精的鸡蛋，这些鸡蛋由蛋黄表面的小白点或没有 blaster derm 来识别。

现在，在佩戴适当的护目镜的同时，从针头底部开始，将 26 号半规格的皮下注射针头弯曲 45 度角。将弯曲的针头斜面向上连接到 1 毫升注射器后，用稀释的印度墨水填充针头。刺穿冲击波周边外的蛋黄膜，然后将针尖滑到胚胎下方，靠近蛋黄表面，但不在胚胎层中。

然后注入足够的墨水来勾勒胚胎的轮廓，避免注射任何气泡。小心地拔出针头。现在使用体视显微镜和热负荷有限的光源，例如此处所示的光纤鹅颈灯。

根据 Hamburger 和 Hamilton 对胚胎进行分期。在蛋壳上记录阶段。然后将两到三滴温热的无菌林格溶液滴在胚胎表面，以防止脱水和污染。

然后在鸡蛋表面拉伸对开膜以暂时密封窗户。接下来，准备用于移植的鹌鹑蛋。在从孵化器中取出鸡蛋之前，在培养皿中加入林格溶液。

然后用弯曲的镊子打开钝面的鸡蛋，露出胚胎。使用解剖剪刀，在胚胎外的 vili 膜和 blaster derm 上做四个方形的切口，确保所有切口都相遇。然后使用弯曲的虹膜镊子，轻轻抓住一个切边，将胚胎从鸡蛋中提起，并将其转移到准备好的培养皿中。

最后，用 5 号镊子轻轻去除卵黄膜，然后在解剖显微镜下对胚胎进行分期。从宿主雏鸡胚胎中取出封口膜。然后使用锋利的钨针，在 VII 膜的神经管所需区域撕开一个小孔。

向胚胎中加入一滴林格溶液。接下来，对于单侧移植物，如本视频中进行的移植物，使用倒入的玻璃针小心地在神经管的中脑区域做横向喙和绳索切口，不要延伸到管腔之外。然后在背神经管和副中胚层之间双侧切割。

最后，小心地将切除的 ex ex解释与神经管分开，然后将其吸入玻璃微量移液器中，将其从胚胎中取出。首先，使用阶段匹配的鹌鹑胚胎。然后，如刚才所示，切除相似大小的神经管区域，并将供体 X 解释吸出到含有林格溶液的玻璃微量移液器中。

转移与雏鸡宿主的切除区域相邻的 X 解释。然后使用拉出的玻璃针，将解释方向轻轻引导至消融区域。小心地向胚胎中加入几滴林格液以防止脱水。

最后，用包装胶带密封窗口，确保胶带密封开窗鸡蛋的整个区域，将鸡蛋放回孵化器直到所需的阶段，在孵化 kyira 时关闭摇摆功能，X 可以每天用手轻轻转动两次以增加它们的生存能力。如果针对发育的后期阶段，则重新孵育至 HH 11 6 小时后神经管移植区域的代表性图像显示了移植的鹌鹑供体组织预期掺入宿主雏鸡神经管。这个穿过 HH 11 接枝区域的横截面显示了用 hnk 标记的神经嵴细胞，一个从神经管横向迁移。

有助于神经嵴细胞迁移流和神经管的鹌鹑细胞用 QCPN 明确标记。在后期阶段，鹌鹑神经嵴细胞衍生的细胞可以追溯到其最终靶组织。从这张图中可以看出，QCPN 标记的细胞散布在上颌突的鸡胚 meen chi 内 E 5 时，QCPN 抗体可以很容易地与其他抗体结合，以检查鹌鹑来源的神经嵴细胞的分化。

在主机环境中。如图所示，鹌鹑神经嵴细胞来源的三叉神经感觉神经元被 QCPN 和 T UJ one 抗体标记。在此程序之后，可以执行其他方法，如免疫组织化学和原位杂交，以回答其他问题，例如神经嵴细胞产生哪些组织，以及神经嵴细胞在分化成各种组织时表达哪些基因。