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DOI: 10.3791/3769-v
Adem Can*1, David T. Dao*1,2, Chantelle E. Terrillion3, Sean C. Piantadosi1, Shambhu Bhat1, Todd D. Gould1,3,4
1Department of Psychiatry,University of Maryland School of Medicine, 2Tulane University School of Medicine, 3The Program in Neuroscience,University of Maryland , 4Department of Pharmacology and Experimental Therapeutics,University of Maryland School of Medicine
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
尾部悬吊试验验证实验程序,以评估对小鼠的抗抑郁药物治疗的疗效。小鼠暂停六分钟,它们的尾巴逃生相关的行为进行评估。我们描述进行悬尾实验中使用的程序。
尾悬试验是一种常见的行为试验,用于预测各种实验作的抗抑郁疗效。该影片演示了此测试的过程。尾部悬吊试验已针对小鼠进行了验证,不建议用于大型啮齿动物。
在尾部悬吊测试中,小鼠被尾巴悬挂。鼠标将保持暂停状态 6 分钟。在此期间,将记录主体的行为。
在 6 分钟的测试期结束时,从受试者的尾巴上取下胶带。测试完成后,视频记录将传输到计算机或视频监视器。为了进行分析,观察者测量了鼠标在整个 6 分钟的会话中挣扎的时间。
具有抗抑郁特性的化合物会增加我花在挣扎上的时间。这反映在较短的静止时间上。例如,我们已经报道了临床上可用作辅助抗抑郁药物的情绪稳定药物锂减少了悬尾试验中的不动时间。
您好,我叫 Sean,来自巴尔的摩马里兰大学医学院精神病学系 Todd Gould 博士的实验室。嗨,我是来自同一个实验室的 Chantel。在本视频中,我们将向您展示如何执行尾部悬架测试并对其进行评分。
Tail Suspension 测试用于评估抗抑郁药治疗的潜在疗效。因此,让我们去实验室,向您展示如何运行实验。虽然不是必需的,但我们使用专门设计的尾部悬架箱。
对于此测试。我们的尾巴悬挂盒分为四个隔间,每个隔间为一只鼠标保留。隔板可防止小鼠在测试过程中相互观察。
但是,可以使用架子或其他结构来悬挂鼠标。选择尾部悬架测试箱的尺寸以防止小鼠触及并抓住边缘。在开始实验之前,剪下足够的胶带碎片并标记将用于粘附到尾部的片段。
在我们的实验室中,我们将使用 17 厘米的磁带片段。应在距该胶带碎片末端两厘米处做标记,并用于粘附在尾部。我们将尾巴放在这两厘米部分的中间。
放置尾部悬架测试箱和摄像机。在引入动物之前,应用消毒液彻底清洁盒子,以中和之前受试者留下的气味。在我们的实验室中,我们使用两个不同的尾悬架箱,除了颜色外,每个方面都相同。
对于白化病小鼠,深灰色框为视频录制提供了良好的对比度。对于颜色较深的小鼠品系,白色框是合适的。启动白噪声机器。
它应该掩盖任何间歇性的声音。将小鼠带入手术室以适应。房间内的条件应保持恒定,没有噪音、光线水平变化和其他可能的干扰。
此时间段通常至少为 1 小时。一旦驯化期结束,就可以继续进行测试,以防止某些小鼠品系爬上它们的尾巴。在尾部悬架测试期间,我们使用放置在尾部上的塑料圆柱体。
在测试过程中,这些圆柱体位于其尾巴的底部。在我们的实验室中,我们使用长 4 厘米、直径 1 厘米、重 1.5 克的塑料圆柱体。如果使用塑料圆柱体来防止攀爬,则应在贴胶带之前将其放在尾部。
我们将胶带贴在尾巴的最末端,尾巴的 2 到 3 毫米保持在胶带之外。将胶带粘在老鼠家笼中的老鼠尾巴上。使用胶带的标记端,确保胶带粘在尾部,然后粘在自身上。
贴上胶带后,将每只鼠标固定在笼子的墙壁上,以防止贴在不同动物身上的胶带缠结。快速完成此过程。否则,小鼠将承受不必要的压力。
记录应在动物暂停之前开始。通过将胶带的自由端放在悬吊杆上,以治疗组之间平衡的顺序和不妨碍相机视图的方式暂停动物。因为老鼠是一只一只地悬浮的,所以每只动物的测试开始时间略有不同。
确保在暂停期开始时开始对每只鼠标进行评分。不遮挡摄像机视图很重要。由于整个尾部暂停会话将被 obstructing 评分,因此相机视图可能会导致数据缺失。
确保所有胶带末端都垂直于具有相同松弛长度的悬挂杆。对于每个主题,启动计时器。尾部悬架测试为 6 分钟。
六分钟的测试期过后,撕下每条尾巴末端的胶带,将小鼠放回它们的家笼中。在测试结束时,应将主题信息录制成视频。将小鼠送回集落室后,应彻底清洁测试箱并用灭菌液擦拭。
现在我们已经完成了测试,我们将讨论对行为进行评分。在对尾部悬吊测试进行评分时,通常评估的唯一变量是动物不动的时间 为了获得不动时间,我们将测量小鼠移动的时间,并从 6 分钟的测试时间中减去该时间。我们将在测试的整个 6 分钟内进行评分。
我们首先覆盖未被评估的小鼠,以允许观察者在花费的每只小鼠时间内仅关注一只动物。移动是由游戏手柄设备控制的屏幕秒表测量的。在这里,如您所见,有两个独立的屏幕秒表同时控制。
第一个秒表从 360 秒开始倒计时,并向观察者指示测试持续时间。第二个秒表测量受试者保持移动的时间。您可能会注意到,第二个秒表被第一个秒表覆盖,并且观察者只能看到其毫秒小数。
这样,观察者将能够看到秒表是否在计数,但在评分完成之前无法看到总移动时间。我们这样做是为了防止观察者偏差影响结果。小鼠,尤其是在会话开始时,表现出与逃逸相关的行为。
这些行为包括试图触及装置和吊杆的壁、身体的强烈晃动和类似于跑步的四肢运动。这些运动显然构成了流动性。然而,随着测试的进行,动作变得更加微妙。
在我们的实验室中,我们不将仅限于前腿但后腿没有任何运动的小运动视为活动能力。除此之外,在之前的机动性比赛中由于动量增加而引起的钟摆状摆动不被视为机动性。现在让我们看看实际尾部悬架测试会话的评分。
通常报告不动时间,而不是移动时间。不动时间可以通过从 360 秒测试时间中减去总移动时间来计算。得分。尾部悬吊测试需要训练和练习。
建立内部实验室标准并培训新的观察者,直到他们达到高水平的可靠性,这一点很重要。在本文中,我们解释了如何执行尾部悬架测试并对其进行评分。祝你未来的实验好运。
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