用于肌萎缩侧索硬化症（ALS）小鼠模型的临床检测与脊髓取出

大家好，我叫Lar Turner，是德国英厄姆大学神经病学系的一名博士后。嗨，我叫Lin Gunda。

我是一名医学生，目前正在本实验室完成我的毕业论文工作。今天我们将向您展示 SODG 93 小鼠肌萎缩侧索硬化症模型的临床检测。此外，我们将通过所谓的转棒实验来演示运动功能测试，同时还将通过悬挂金属丝抓力实验进行另一项运动功能测试，以开展免疫学分析。

在完成对 a s 小鼠的功能测试后，必须进行脊髓、STIC 神经和腓肠肌的摘除。我们将详细展示这些手术操作步骤，并在最后呈现一些典型的免疫学研究结果。好的，现在我们首先开始临床测试。

这是一种自由活动的野生型MOE，在我们的临床分类系统中不表现出任何临床症状，如肌肉震颤或帕西斯，其评分为四分。这是一种转基因A LS moe。

在疾病早期阶段，该动物表现出右后肢严重震颤，属于评分三级（SCORE three E）。严重的步态异常使该动物被归为二级评分。在悬挂丝线试验中，至少一条后肢出现拖拽即被定为临床评分一级，同时对粗略的肌肉握力进行评估。将每只小鼠置于定制的金属丝网上，小心地将其翻转至倒置状态，位于铺有垫料的盒盖上方。

在连续三次训练中每次至少坚持180秒后，测量其跌落潜伏期。每只小鼠最多给予三次尝试机会，使其倒置悬挂于盖子上，最长持续时间为180秒，记录其中最长的一次停留时间，并与右侧的白毛野生型小鼠进行比较。左侧的斑块转基因小鼠非常虚弱，在达到最长时间之前即从盖子上掉落。

转棒仪用于评估运动协调性、平衡能力及运动学习能力。良好的表现需要高度的感觉运动协调性。该装置由计算机控制、电机驱动的旋转轴组成，并设有五个通道，可供五只动物同时进行实验。

通过底部塑料板上的压力自动检测小鼠的失误。在以每分钟15转的恒定速度连续训练三次、每次至少180秒后，测量动物在旋转棒上保持不掉落的时间。每只动物进行三次试验，记录其中最长的不掉落潜伏期。

左侧的健康野生型小鼠在转子杆上奔跑时无任何困难。相比之下，右侧的转基因阿尔茨海默病小鼠在转子杆上保持平衡都存在严重问题，一段时间后便从杆上滑落，此现象从后方观察可见。您可以看到该左侧行为异常小鼠存在严重的运动障碍。

与健康的野生型小鼠相比，该小鼠无法跟上转棒的速度，且不能用前肢向上推动。为了进行脊髓的免疫化学分析，必须将动物处死。必须始终严格遵守当地关于动物实验操作规范的指导原则。

在此背景下，本图简要概述了脊柱及其周围组织，展示了主要的解剖结构。我们将动物置于腹侧位置，从背部开始分离肌肉组织。在去除肌肉组织后，即可暴露并进入包裹脊髓的脊柱。

动物处死后，用含多聚甲醛的灌流液灌流，随后可取出脊髓。将动物置于手术台上，四肢完全固定于两侧，以暴露小鼠背部。润湿动物体表以压平毛发，便于后续皮肤切开。

为此，需使用锋利的手术刀。注意向两侧拉紧皮肤。为便于切割，应先暴露腿部肌肉。

还需要切开它们的皮肤。完成皮肤切口后，将其轻轻拉开。用一对镊子去除腿部肌肉和坐骨神经后，我们继续暴露脊髓，并将动物放置在新的手术台上。

现在可以很容易地辨认出颅骨颈部、肌肉和脊柱。在识别出所有这些结构后，便可顺利进入下一步操作。需要去除颈部的肌肉和项韧带。

注意不要切得过深而损伤脊柱。下一步需完全去除椎旁肌肉以暴露脊柱。为了进入脊柱，需要进行多个截骨操作。

我们从脊柱的颈椎部分开始，包括枕部寰椎关节。为了进行椎板切除术，必须切断椎弓，以便将所有椎骨突起从椎体上移除。如前所述，椎板切除术首先从切断椎弓开始。

然后可以将硬脑膜拉开。再次注意不要损伤脊髓，因为还需要移除更多的椎骨。使用弯头剪刀同时剪开双侧多个椎弓非常有帮助。

然后牵拉背侧突起，彻底去除椎板并拉近视野。可以看到，剪刀必须从脊髓管侧缘最外侧小心插入。需去除椎柱残余的侧部结构，以便后续完整取出脊髓。

脊髓的解剖学标志包括所谓的颈膨大和腰膨大。完成整个脊髓的切除后，需确保切断脊髓的所有腹根，并将其从脑膜的硬膜中分离出来。接下来，切断颈段脊髓。

从颅侧开始，再次进行脊髓的分离。操作时需极为谨慎地接触脊髓，避免对其造成损伤，因为这可能严重影响后续的免疫化学分析。脊髓的分离继续在胸段进行，并延伸至腰段部分。

现在再次在马尾神经的一侧进行切割。此时我们能够完全将其释放。您可以看到脊髓被放置在其于脊柱内的原始位置旁边。

最后，将其放入多聚甲醛固定液中进行后固定。作为脊髓免疫组织化学分析的经典示例，可使用识别胆碱乙酰转移酶的抗体来鉴定脊髓前角中的运动神经元。此处可见健康野生型动物脊髓前角中存在大量运动神经元。

相比之下，处于终末期的肌萎缩侧索硬化转基因动物在前角中表现出的运动神经元数量要少得多。通过观看本视频文章，您应该已经了解了SODG93A小鼠这一肌萎缩侧索硬化模型的基本临床检查方法。

已展示两种运动行为学测试：转棒测试和悬挂丝线测试。这两种方法能够有效评估基本的运动功能，操作简便、对运动功能障碍的检测具有高敏感性，且节省时间。

本视频的主要部分演示了脊髓组织的制备技术。该方法当然也可应用于其他任何小鼠疾病模型，是后续对脊髓疾病病理进行免疫化学分析的关键步骤。感谢您的观看。

我们希望本视频文章对您将来的实验有所帮助。