导管内可视化通过NF-κB记者的转基因小鼠模型的乳腺炎:信号注射LPS

该程序的总体目标是研究乳腺炎或炎症，更具体地说，可视化和量化发炎的哺乳腺内的 NF Kary 活动。这是通过首先将雌性 NF Kappa b 报告基因转基因与野生型雄性杂交来实现的。幼崽出生后 8 天，通过引入性注射技术将脂多糖引入雌性的哺乳腺，注射后 6 小时不会损坏注射部位的所有伤口。

小鼠进行生物发光成像以检测乳腺内的荧光素酶活性。最终，通过使用导管内注射方法，然后进行生物发光成像，结果可以显示 LPS 处理的腺体中显着的 NF KB 活性。与其他导管内注射方法相比，我们方法的主要优点是注射部位不会受到任何损害。

如果您打算研究与 LPS 注射相关的炎症，这绝对至关重要，因为对该部位或的任何损伤都会叠加并混淆这些分析。NGL Reporter 转基因阳性的雌性小鼠用于此过程。一。女性至少为 6 周龄。

M 将它们与 FVB 野生型雄配，并在交配后 15 天繁殖。开始定期检查雌性是否有怀孕迹象，即大的突出围度。将怀孕的雌性分到自己的笼子里，当最后一只雌性怀孕时，将雄性从繁殖笼中移出。

需要一窝六只幼崽才能获得充足的泌乳。这样一窝出生八天后。继续执行协议。

该程序最具挑战性的部分是入门注射本身。拥有稳定的手和大量的练习会有所帮助，但陷阱总是会发生。准备好在注射当天准备好多只小鼠，以确保成功。

首先在 PBS 中将大肠杆菌衍生的脂多糖稀释至终浓度为 0.1 微克/微升。将 50 微升这种 LPS 溶液注射到乳腺中。单独准备第二管 PBS 用于对照注射。

剖析范围的阶段旁边。固定鼻锥装置以进行麻醉。根据需要使用额外的聚光灯为舞台准备明亮的照明。

解剖设置准备就绪后，启动 isof 氟机和气流。接下来，在 31 号胰岛素注射器中加入 50 微升 LPS 溶液，并将注射器放在一边进行练习注射。使用在 PBS 中稀释的 triam blue 染料来可视化结果。

接下来，一旦小鼠的呼吸减慢，就麻醉要注射的小鼠。将其放在载物台上，并通过鼻锥提供 iso 氟。使用 to 捏 确认在整个过程中完全麻醉。

监控鼠标的呼吸模式。不断调整 isof fluorine 以保持稳定。使用一小滴 70% 乙醇压平动物腹侧腹部的毛发并找到。

用非惯用手的细镊子将右 4 号腹股沟乳腺的放在下腹部。小心地将从皮肤上拉出。镊子永远不能夹紧。

只需轻轻握住惯用手的。将预装注射器置于视野中并握住它，这样就不需要重新定位来注射其内容物。小心地将针头对准中心的小延展性开口。

将大约四分之一的针头插入导管中，无需重新定位。在 3 到 5 秒内注射注射器的内容物。然后小心地从奶嘴上取下针头。

在第二个注射器中装入 50 微量释放的 PBS，然后重复左侧的程序。第四个，使用 PBS 对照的腹股沟乳腺。两次注射完成后，停止麻醉并将鼠标移至恢复笼。

雌性应该在 5 分钟内移动。一个小时后，将她和她的泡芙一起放回家笼。小鼠注射 6 小时后应进行成像。

在此期间，如果观察到痛苦的迹象，请监测鼠标。停止实验并在成像设施中对小鼠实施安乐死。准备使用 isof fluorine 麻醉女性。

确保麻醉剂流向盒子和成像室。将小鼠置于 isof fluorine 麻醉下，放入透明麻醉盒中。呼吸减慢后，使用 to 捏 确认鼠标已完全麻醉。

接下来眶后，通过 100 号针头注射 26 微升 Lucifer 底物。注射后立即将鼠标转移到成像室，并连接鼻锥输送 Isof Lorraine。将鼠标置于仰卧位，并用黑色不透明胶带将每只脚固定在载物台上。

在 IVIS 软件中输入适当的设置，以拍摄白光摄影图像和生物发光活动的图像。获取图像后，曝光时间应为 10 秒。请遵循与注射后相同的恢复方案。

摄影和发光图像会自动叠加并显示在屏幕上。通过在鼠标下腹部的每一侧放置感兴趣区域或相同大小的 ROI 圆圈来分析采集的图像。一个在 PBS 注射的腺体上，一个在 LPS 注射的腺体上。

将读数设置为光子。应显示一个数字，指示在每个 ROI 中检测到的发光，并在统计分析中使用此数字来显示最佳图像。进一步调整所显示信号的阈值。

这不会改变总发光读数，但当 PBS 注入的压盖没有背景信号时，可以去除背景信号。在图像实践中，LPS 处理腺体中信号的增加应该很明显 注射在哺乳期的第 21 天进行，此时产奶量较少，注射的成功可以通过 trian blue 染色很容易地可视化 在成功注射的记忆腺中，只有导管树充满了溶液注射不成功。或周围组织处有液体积聚。

大脑和其他腹部器官的组成型 NF KB 活性，在第 8 天将 LPS 成功注射到乳腺管中导致腺体内 NF KB 活性增加。在进行任何作之前，有一个一致的基线信号。LPS 注射腺体中的荧光素酶活性明显高于一组 4 只小鼠的 PBS 注射腺体。

测量到 LPS 处理的腺体内发光的统计学显着增加。这种方法可以深入了解乳腺炎症。它也可以应用于其他研究领域，例如癌症研究。

您可以将癌细胞或致癌物直接注射到乳腺导管中。